鸭胚卵内注射rhIGF-1对其出壳后卵泡抑素基因表达及胸肌发育的影响

本研究通过卵内注射技术,注射120、100、80和0(对照组)ng.mL-1的重组人胰岛素样生长因子(rhIGF-1)到孵化中的鸭胚蛋白中,并检测2日龄雏鸭胸肌发育和卵泡抑素(FST)表达的情况,探讨不同浓度rhIGF-1对FST表达及鸭胸肌发育的影响。结果表明,卵内注射不同浓度的rhIGF-1对雏鸭体质量的影响不显著(P>0.05);但雏鸭胸肌质量、胸肌率随rhIGF-1注射浓度的增加而升高,120 ng.mL-1处理组胸肌质量、胸肌率相对对照组有显著差异(P<0.05);120 ng.mL-1的rhIGF-1处理组肌纤维直径和横切面积最大,显著高于对照组(P<0.05);FST基因在雏鸭胸肌中的表达水平也随rhIGF-1的浓度增大而升高,其中以120 ng.mL-1处理组FST基因表达量最高,显著高于其它各处理组(P<0.05)。结果表明IGF-1对FST的调控作用以浓度依赖的方式进行,高浓度的IGF-1导致FST高表达并促进肌肉发育。     

蛋内注射rhIGF-IGF-1对高邮鸭骨骼肌发育的影响

胰岛素样生长因子1(IGF-1)是重要的生长因子,参与机体生长发育的多个进程。研究利用蛋内注射技术处理孵化前高邮鸭受精蛋,以揭示外源注射IGF-1对雏鸭发育及骨骼肌生长的影响;同时在细胞水平分析外源重组人类胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)对成肌细胞活性影响和内源IGF-1/IGFR mRNA表达影响。结果显示:孵化前蛋清内注射rhIGF-1显著增加育雏期6～21日龄雏鸭体重水平,骨骼肌解剖后称重发现,14日龄处理组胸肌增重显著高于对照组(P0.05);细胞水平试验结果显示,细胞培养体系中添加不同浓度rhIGF-1,随着培养时间的延长,处理组和对照组细胞活性差异不显著(P0.05);但成肌细胞处理组和对照组IGF-1/IGFR mRNA表达水平差异显著(P0.05)。研究结果揭示,孵化前蛋清内注射rhIGF-1增加高邮鸭出壳前后的体重,显著提高育雏中期胸肌增重水平,影响成肌细胞中IGF-1/IGFR mRNA表达。     

高邮鸭和金定鸭胸肌早期发育及MyoD1基因表达分析

 
采用qPCR分析生肌调节因子MyoD1基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期及初生早期(13、17、21、25、27胚龄和出雏后7日龄)胸肌发育中的表达模式以及与胚胎和胸肌发育的相关性。结果表明,MyoD1 mRNA在两个品种鸭胸肌早期发育中表现出一致的表达规律,均呈“波浪形”,在13胚龄时表达量相对较高,17胚龄时下降,21胚龄时上升到最高,随后下降,出雏后又维持较高水平;品种间比较结果显示除了在25胚龄时金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA表达量稍低于高邮鸭,在其他所检测的胚龄/日龄中,金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA表达量均高于高邮鸭胸肌中的表达量(P>0.05);高邮鸭胸肌MyoD1 mRNA表达与胚胎和胸肌发育无显著相关性,而金定鸭胸肌中MyoD1 mRNA的表达与其胚胎和胸肌发育呈强负相关(P胚重=0.048;P胸肌重=0.006)。MyoD1基因参与鸭胚胎期及出雏早期胸肌的发育,胸肌中MyoD1基因表达分析研究为进一步深入研究MyoD1基因在胚胎期胸肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据     

鸭胚骨骼肌不同组织Myf6基因表达的发育性变化研究

为研究Myf6基因对鸭肌肉发育的影响,本试验利用实时荧光定量PCR绝对定量技术检测Myf6基因在高邮鸭和金定鸭胚胎期第13、17、21、25、27天及出生后7日龄胸肌、腿肌发育过程中的表达量。结果显示,Myf6基因在2个品种的胸肌和腿肌中均有表达,在不同品种同一肌肉组织中的表达变化规律一致,而在不同肌肉组织中的表达模式不同,其中在胸肌组织中21胚龄时表达量最高,随后表达量下降,维持相对较高表达水平;在腿肌组织中13胚龄时表达量较高,17胚龄时达到最高,随后表达量有所降低,并在21胚龄后急速下降至极低水平,但其表达在胚胎期后期(27胚龄)及初生期(7日龄)又有缓慢上升趋势。上述结果表明,Myf6基因参与了胸、腿肌组织的发育,在胸、腿肌中表达模式不同,推测Myf6基因在胸、腿肌中的调控存在差异,可能与其胸、腿肌不同肌纤维的发育与分化有关。     

鸭胚骨骼肌生肌调节因子MyoD1和Myf5发育性变化研究

本研究采用Real-timePCR分析生肌调节因子MyoD1和Myf5在不同鸭品种(高邮鸭和金定鸭)胚胎期及初生早期(13、17、21、25、27日胚龄和出雏后7日龄)骨骼肌发育中的表达模式以及表达差异。结果表明,MyoD1mRNA和Myf5mRNA在两个品种鸭胸肌早期发育中表现出一致的表达规律,均呈"波浪"型;在腿肌早期发育中均呈近似"反√"型的表达趋势,在27日胚龄时表达量最低,出生后7日龄表达量又上升,但MyoD1mRNA的表达量仅有小幅增加,与27日胚龄的表达量差异不显著(P>0.05),而Myf5mRNA的表达量有大幅增加,与27日胚龄的表达量差异极显著(P<0.01),胸肌和腿肌中两基因的mRNA表达量在同一胚龄不同品种间差异均不显著。结果提示:骨骼肌中MyoD1和Myf5基因表达具有显著的时空性,但不存在品种差异,为进一步深入研究MyoD1和Myf5基因在胚胎期骨骼肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据。     

Akirin2基因在肉鸭胸肌和腿肌中的发育表达研究

Akirin基因家族中Akirin2基因与哺乳动物肌纤维类型密切相关。鸟类中仅有Akirin2基因,为研究Akirin2与鸭肌纤维类型的关系,本文比较了鸭10、14、18、22、27日胚龄及出生后1周龄(P7d)胸肌和腿肌的发育差异,并采用QRT-PCR法检测了Akirin2在以上各阶段胸肌、腿肌中的发育性表达。结果表明,Akirin2基因的表达与胸肌肌纤维的发育关系密切,其表达的增高伴随肌纤维直径的增粗;相反,在腿肌中Akirin2的表达降低伴随肌纤维直径的增粗。因此,Akirin2基因与鸟类红肌纤维发育关系密切,其有可能是鸭胸肌发育以及肌纤维类型组成的关键基因之一,值得在今后的基础研究和育种研究中引起重视。     

三碘甲状腺原氨酸注射对鸭早期生长发育影响的研究

为研究甲状腺激素对鸭早期生长发育的影响,试验通过在鸭种蛋蛋清中分别注射100μL含0(对照组)、0.25μg三碘甲状腺原氨酸(T3组)的生理盐水,检测鸭胚胎期至出雏后14日龄时,体重、体长、不同组织器官重的变化规律。结果显示,25日胚龄,T3组脑重显著高于对照组(P0.05);27日胚龄,T3组的各组织器官重均出现升高趋势,其中体重、胸肌重显著高于对照组(P0.05)。通过生长分析首次发现T3减缓胚胎发育后期胸肌的负生长现象。出雏后7日龄,体长、脑重和肝脏重在T3组显著高于对照组(P0.05),14日龄,各组织器官重均出现下降趋势,其中,T3组体重、体长和腿肌重显著低于对照组(P0.05)。研究表明种蛋内注射T3可以促进鸭胚生长发育,抑制雏鸭生长;T3对鸭组织器官重的影响具有时间依赖性。     

白羽王鸽胚胎期胸肌肌纤维发育规律及相关基因表达分析

实验旨在研究白羽王鸽胚胎期胸肌肌纤维发育规律，并分析肌纤维发育相关基因在胸肌发育过程中的表达变化规律。采集鸽不同孵化时间胸肌组织，利用石蜡切片技术研究胸肌肌纤维发育规律，利用RT-qPCR技术检测肌纤维发育相关基因在胸肌发育过程中的表达变化规律。结果显示，鸽肌纤维在12胚龄时仍处于成肌细胞增殖和分化的混合期，14胚龄时肌细胞融合程度进一步上升，16胚龄时肌细胞增殖和分化基本完成，至出雏时肌纤维已基本发育成熟。在鸽胚胎发育过程中，胸肌肌纤维直径逐渐增加，肌纤维密度呈现先增加后降低的趋势。基因表达结果显示，Myf6表达量随着胚龄的增加不断上升，至出雏达到最大表达量；MyoD呈现先下降后上升的趋势；MyoG表达呈现持续下降的表达趋势，至出雏达到最低表达量；MSTN 12～14胚龄表达量下降，14胚龄后显著回升，至出雏达到最大表达量。综上所述，本研究结果有助于深入理解鸽骨骼肌发育规律，为进一步研究白羽王鸽骨骼肌生长发育调控机理提供理论参考。     

鸭发育早期骨骼肌NFATc3 mRNA差异表达及其与生长性状的相关性研究

为研究不同品种鸭胚胎期和出雏早期骨骼肌中NFATc3基因mRNA表达规律及其与生长发育的相关性,运用荧光绝对定量PCR技术检测了生长速度差异较大的高邮鸭和金定鸭13、17、21、25、27胚龄和7日龄胸肌和腿肌中NFATc3 mRNA的表达水平。结果表明胸肌和腿肌NFATc3 mRNA在两鸭品种中均具有相似的表达模式,不存在品种效应,胸肌和腿肌NFATc3 mRNA的表达均是13胚龄时表达量最高,显著高于其它各胚龄或日龄(P0.05);相关性分析结果表明两个品种鸭骨骼肌NFATc3 mRNA表达量与其组织重、体重均呈极显著负相关(P0.01),而与肌肉组织中IGF-Ⅰm RNA的表达量呈极显著正相关(P0.01)。鸭骨骼肌中NFATc3主要在早期的肌纤维生成中起作用,与IGF-Ⅰ可能共同参与了对骨骼肌生长发育的调节。     

藏鸡FST基因组织表达谱及时序表达谱的研究

研究旨在揭示卵泡抑素(FST)基因在藏鸡不同组织及发育阶段中的表达特性。选取1、42、70、120、150日龄藏鸡公母各5只,分别采集垂体、下丘脑、胸肌、腿肌组织样本,利用qRT-PCR技术,对FST基因在所选组织中的表达水平进行测定,构建组织表达谱及时序表达谱并进行分析。结果显示:FST基因主要在藏鸡垂体组织中表达,发育前期公鸡中的表达水平较高,发育后期母鸡中的表达水平高于公鸡;与下丘脑、胸肌以及腿肌时序表达特性不同,FST基因在藏鸡垂体组织中的时序表达特性具有性别差异。研究结果为进一步了解FST基因的功能及物种多样性提供了参考,也为藏鸡的遗传育种提供了一定的理论基础。     

胚蛋给养蛋氨酸对朗德鹅血液生化指标和胸肌发育的影响

本试验采用胚蛋注射技术研究孵化后期补充外源性营养物质蛋氨酸对血液生化指标和胸肌发育的影响。选取300枚种蛋随机分为2组,每组3个重复,每个重复50枚种蛋。在孵化第24天进行蛋氨酸注射,对照组不做任何处理,处理组注射1.5 m L蛋氨酸营养液(Met 5 mg/m L、Na Cl 7.5 mg/m L)。出雏后,每个重复选取体重均匀和健康的雏鹅20只进行饲养试验,饲养28 d。结果表明:胚蛋给养蛋氨酸显著提高了朗德鹅的初生重和7 d体重(P0.05),处理组显著提高了0、7 d胸肌重(P0.05),有提高0 d胸肌指数的趋势(0.05≤P0.10),并且显著提高了0、7 d的肌纤维直径(P0.05);处理组有提高雏鹅血清中总蛋白含量的趋势(0.05≤P0.10),显著提高了白蛋白含量并降低了血清尿酸含量(P0.05);处理组显著提高了Myf5的相对表达量并降低了MSTN的相对表达量(P0.05)。试验结果显示,胚蛋给养蛋氨酸可通过调节Myf5和MSTN的m RNA相对表达量来促进胸肌的发育,促进了机体的生长。     

北京鸭胸肉发育过程中MRFs和SIRT1基因的表达规律研究

生肌决定因子对肌细胞的增殖和分化、肌纤维的数量和大小起着关键的调控作用,而且对肉质和风味也有着非常重要的影响.SIRT1对生肌决定因子的表达具有一定的调控作用,因而影响肌肉和脂肪细胞的增殖、分化和凋亡.本研究利用qRT-PCR技术分析了北京鸭出壳后胸肌发育过程中生肌决定因子家族的4个成员(MyoD、MyoG、Myf5和Myf6)和SIRT1基因的表达变化模式,结果发现MyoD1和Myf5基因在北京鸭出壳后的肌肉组织中呈下降趋势,而且这两个基因具有相似的表达模式;Myf6基因在北京鸭出壳后的肌肉发育过程中没有显著的变化;MyoG基因在北京鸭出壳后的肌肉发育过程中表达量低且没有明显的变化规律.SIRT1基因与MyoD和Myf5基因的表达模式具有显著的相关性,整体上也呈现出下降的趋势.本研究对生肌决定因子和SIRT1基因在北京鸭出壳后胸肌组织中的表达模式进行了比较详细的研究,为揭示北京鸭胸肌发育的分子调控机制提供参考.     

北京鸭和淮南麻鸭胸肌发育过程TPM1和TPM3基因的表达变化研究

为了解北京鸭和淮南麻鸭胸肌发育过程TPM1和TPM3基因的表达变化,试验分别采集出壳当天(1 d)、2周龄、4周龄、6周龄和8周龄北京鸭和淮南麻鸭胸肌组织,提取总RNA,利用qRTPCR技术分析TPM1和TPM3基因在北京鸭和淮南麻鸭胸肌发育过程的表达变化情况。结果表明:TPM1基因在北京鸭和淮南麻鸭胸肌发育过程中没有明显的变化(P0.05)。TPM3基因在出壳当天北京鸭和淮南麻鸭胸肌组织中的表达量与其他时间点相比显著提高(P0.05),在2周龄淮南麻鸭胸肌组织中的表达量与6周龄和8周龄相比显著降低(P0.05),在4周龄淮南麻鸭胸肌组织中的表达量没有显著变化(P0.05)。从出壳当天到8周龄时,TPM3基因在北京鸭胸肌组织中的表达量与淮南麻鸭胸肌组织中的表达量相比有升高的趋势。     

樱桃谷鸭胚胎期胸肌发育特征的研究

为探究樱桃谷鸭胚胎期胸肌的发育规律以及调控基因与胸肌发育的关系,选取100只均重90～100 g的樱桃谷鸭种蛋进行同条件孵化,测定12～27日胚龄(E12～E27)的胚重和胸肌重并计算胸肌率;采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法分析樱桃谷鸭E13～E27胸肌中MyoG、MRF4和MSTN的表达量。结果显示:樱桃谷鸭胚重随着胚龄的增加而增加;E20前胸肌发育与鸭胚重发育趋于一致,胸肌率随胚重的增加而增加;然而,E20后胸肌的发育以肌细胞融合为主,胸肌增长几乎处于停滞状态,胸肌率开始呈现下降趋势。MyoG、MRF4在胸肌中的相对表达量随胚龄的增加均呈现出先升高再降低的趋势,分别在E19、E20处达到最高点;MSTN在E16～E27的表达趋势与MyoG、MRF4相反,呈现出先降低再升高的趋势,在E19处出现最低点。结果表明:E18～E20是樱桃谷鸭胸肌增长最快点,是胚胎期樱桃谷鸭胸肌发育的关键过渡点。     

金定鸭胚胎期骨骼肌发育模式及MRFs家族基因表达变化研究

MRFs (Myogenic regulatory factors,MRFs)家族包括肌分化因子MyoD、肌细胞生成素(myogenin)、生肌决定因子Myf5和Myf6,它们参与肌肉发生发育的各个环节.研究采用Real-time PCR方法研究了金定鸭胚胎期13、17、21、25和27日胚龄MRFs家族基因在骨骼肌中的表达变化,并分析其表达变化与胚重、骨骼肌发育的相关性.金定鸭胚重及骨骼肌重发育模式显示胚重在胚胎期呈持续增加趋势,但胸肌在胚胎中后期显示出较腿肌滞后的增重变化.MRFs家族基因在胚胎期骨骼肌中均能检测到表达,MyoD mRNA在21日胚龄前腿肌中的表达量高于胸肌,而在胚胎发育后期(25及27日胚龄)胸肌中表达量渐渐高于腿肌.胸、腿肌中myogenin mRNA的表达与胚重、胸、腿肌发育重量变化均呈强的负线性相关.上述研究结果首次揭示了鸭胚胎期骨骼肌中MRFs家族基因表达具有显著的时空性,推测MyoD mRNA在胸、腿肌中的表达变化可能与胸、腿肌增重表型差异有关,研究结果为进一步深入研究MRFs家族基因在胚胎期骨骼肌发生过程及其调控机理中的功能提供一定的理论依据.     

雏鸭病毒性肝炎的诊治

取疑似雏鸭病毒性肝炎病死鸭肝脏制成1:1匀浆,分别接种9日龄鸡胚和11日龄鸭胚,鸡、鸭胚均于接种后24～36小时全部死亡,取鸡胚尿囊膜制成1:2匀浆接种11日龄鸭胚,鸭胚于接种后64小时死亡,取鸡胚尿囊液回归4日龄雏鸭进行人工发病雏鸭于24～96小时全部死亡;用已知抗鸭肝病毒卵黄液对发病鸭群紧急被动免疫注射,病鸭群于注射后3天全面停止死亡,取鸡、鸭胚尿囊液制成油乳剂免疫产蛋鸡,免疫后21天的鸡卵黄经3倍稀释,1ml可抵抗10~(-2)0.5ml鸡胚尿囊液对2日龄樱桃谷鸭的致病性,获100％保护,而对照鸭的发病率为100％,致死率为66.7％,从而确诊某鸭群为雏鸭病毒性肝炎,用鸭肝病毒无需灭活制成油乳剂免疫产蛋鸡以制取抗鸭肝病毒鸡源性卵黄抗体防治雏鸭病毒性肝炎,取材方便,制作简单,疗效显著,值得推广和应用。     

鸡成肌细胞及不同品种肌肉组织的FAFFAF1 mRNA表达特征分析

以矮小品系S2系鸡和隐性白羽鸡作为试验素材,采用q-PCR技术及SPSS分析软件,研究Fas相关因子1(Fas-associated factor 1,FAF1)在两个品种胚胎期至生长期骨骼肌发育中的差异性的表达模式及在成肌细胞增殖和分化期的表达特征。结果表明,FAF1在两品种胚胎期胸肌组织的表达都显著高于出雏后其他发育时期(P0.05),但FAF1在S2系鸡整个胚胎期及出雏当天的表达都显著高于隐性白羽鸡(P0.05);在腿肌组织中,隐性白羽鸡中,在10日胚龄时FAF1的表达量显著高于其他胚龄(P0.05),并随胚龄的增加表达量逐渐下降,在6周龄时表达量显著低于2、4、8、16周龄(P0.05),S2系鸡中,10日胚龄时FAF1的表达量显著高于其他发育时期(P0.05),从胚胎期至出雏后6周表达量随周龄的增加逐渐减少。除6周龄外,FAF1在S2系鸡其他发育时期的表达都显著高于隐性白羽鸡。在鸡原代成肌细胞中,FAF1 mRNA 在分化期的表达显著高于增殖期(P0.05),并随诱导分化时间的延长表达量逐渐升高。结果表明:FAF1 mRNA 表达呈现明显的品种和组织差异性,该基因可能以不同的方式参与调控胸肌、腿肌发育过程,为进一步研究该基因调控肌肉发育的分子机制提供了理论依据。     

鸭Mef2bnb基因的克隆及其mRNA丰度在肌肉组织中的发育性表达变化

旨在克隆鸭肌肉增强因子2b邻居基因(Myocyte enhancer factor 2Bneighbor,Mef2bnb)的cDNA全序列,并对其进行分析,研究该基因在肌肉组织中的发育性表达规律。利用RACE技术从鸭腿肌中克隆出Mef2bnb的全长cDNA序列,应用Q-PCR技术检测了自鸭胚胎10d至出壳1周肌肉组织中Mef2bnb基因的发育性表达。结果显示:该序列全长935bp,包括5′非编码区(5′UTR)51bp和3′非编码区(3′UTR)518bp,完全开放阅读框(ORF)366bp,可编码121个氨基酸残基,结构分析表明,该肽链没有信号肽,第1～117号氨基酸为鸭Mef2bnb基因与其它动物高度保守的NEP结构域;Mef2bnb基因在胸肌、腿肌和心脏3种肌肉组织中不同阶段均有不同程度的表达,而其在胸肌中的表达量均高于同时期在腿肌中的表达量,推测鸭Mef2bnb基因可能具有促进Ⅱ型纤维形成的功能,另外该基因在心脏的高表达表明其可能与心脏的发育有关。本研究结果将为进一步研究鸭Mef2bnb结构及其在肌肉组织中的作用奠定基础。     

鸭Ccna1启动子克隆、序列分析及在鸭骨骼肌中的发育性表达

为研究Ccna1基因在鸭骨骼肌发育中的作用,本研究应用RT-PCR扩增和克隆了鸭Ccna1基因启动子区并作生物信息学分析,应用荧光定量PCR技术检测Ccna1基因以及参与该基因表达调控的多个肌源性转录因子在鸭胚骨骼肌组织发育过程中的表达模式。结果表明,扩增得到鸭Ccna1基因启动子2 213bp。序列分析表明,鸭Ccna1启动子存在典型的TATA-box、CAAT-box调控元件,有MyoD、MRF4、MyoG、Sp1、PITX1及MEF2等多个转录因子结合位点。定量结果发现,MyoD、MRF4、MyoG和Ccna1在鸭胚胎骨骼肌发育过程中均有表达。在鸭胸肌中,MRF4在E23时期表达量最高,显著高于D8的表达量(P0.05);在腿肌中,MRF4和MyoG表达量在E17时期达到最高,且显著高于D2、D8(P0.05)。聚类分析表明,在鸭胸肌组织中Ccna1表达模式与MyoD一致,在腿肌组织中Ccna1表达模式与MRF4、MyoG一致。初步推测,Ccna1参与到了鸭骨骼肌组织的发育,且在鸭腿肌的生长发育中,MRF4、MyoG可能与Ccna1相互作用进而调控骨骼肌发育,而在鸭胸肌组织中,Ccna1的表达可能与MyoD的转录调控有关。     

蛋内注射雌马酚对肉鸡性腺发育的影响

为了研究蛋内注射雌马酚(Eq)对肉鸡性腺发育的影响,选取三黄矮脚D肉鸡种蛋585枚,孵化至7胚龄时,随机分成3组:分别注射溶剂(对照组,Con组)、20μg Eq(低剂量组,L组)和100μg Eq(高剂量组,H组),出雏后按同一标准化程序饲养。结果表明:蛋内注射Eq对17胚龄胚重、性腺重和性腺的相对重量均无显著影响(P0.05);高、低剂量Eq处理对49日龄时体重无显著影响(P0.05),低剂量Eq可显著增加雌鸡卵巢重(P0.05)并伴血清雌二醇(E2)浓度的升高(P=0.08),但对雄性鸡性腺发育无显著影响(P0.05)。以上结果提示:鸡胚早期发育过程中接触一定浓度的Eq可提前雌性鸡性腺发育。