籼稻成熟胚愈伤组织诱导及不定芽分化

以不同籼稻品种的成熟胚为研究材料,通过对比实验,结果表明,采用DNB为诱导愈伤组织培养基,DMS与DNB培养基交替继代,籼稻愈伤组织诱导率高、质量较好;采用MSRc3(MS+casamino acids 500mg·L-1+gluttamine 300mg·L-1+proline 500mg·L-1+mannitol 36.4g·L-1+maltose 30g·L-1+TDZ 0.2mg·L-1+phytagel 5g·L-1pH 5.8)为分化培养基,愈伤组织不定芽分化率在90%以上,较对照MSR1提高300%～500%.     

丰花月季再生体系的建立

分别以丰花月季叶片、叶柄和茎段为外植体,进行了愈伤组织的诱导及植株再生的研究。结果表明,丰花月季诱导愈伤组织最佳激素浓度配比是1/2MS+2,4D 5 mg.L-1+BA 1 mg.L-1;所得到的愈伤组织在MS+6-BA1 mg.L-1+2,4D 2.5 mg.L-1+GA3 1 mg.L-1的培养基上继代保存两个月后于MS+NAA 0.02 mg.L-1+TDZ 1.8 mg.L-1+KT1 mg.L-1上分化出不定芽;不定芽在1/2MS+IBA 0.5 mg.L-1上的生根率为91.25%。     

亚洲百合Strawberry and Cream花器官组培快繁技术研究

为完善百合种球繁殖技术体系,对亚洲百合Strawberry and Cream花器官进行组织培养及快速繁殖技术研究。结果表明:不同外植体分化能力不同,由强到弱依次为花瓣,花丝和花柱;花瓣诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.00mg·L-1TDZ+0.1mg·L-1NAA,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2.0mg·L-12.4-D+0.5mg·L-1KT;花丝诱导不定芽的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1TDZ+0.5mg·L-1NAA,诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2.0mol·L-12.4-D+1.5mg·L-1KT;不定芽扩繁的最佳培养基为MS+1.0mg·L-1BA+0.1mg·L-1NAA。     

玉米植株再生体系建立及其主要影响因素的优化

研究选取11个东北地区主栽玉米品种的自交系,以幼胚为外植体诱导愈伤组织,应用正交实验设计方法探讨了2,4-D、BA、L-脯氨酸、水解酪蛋白4个因素及不同浓度组合对II型愈伤组织诱导的影响。结果表明,MS培养基中添加4mg·L-12,4-D、0.5mg·L-1BA、750mg·L-1L-脯氨酸和250mg·L-1水解酪蛋白时,II型愈伤组织诱导率最高,为49.66%。2,4-D是诱导II型愈伤组织的关键因素。优化了不定芽分化培养基和生根培养基,探讨了3个基因型愈伤组织的不定芽分化率及平均外植体出芽数,甜1品种都为最高,分别为93.14%和1.35%。初步确定了蛭石附加1/8MS营养液为再生植株移栽的最佳条件。     

紫花苜蓿愈伤成苗高频再生体系的建立及其影响因子的研究

 对秘鲁苜蓿等品种的子叶和下胚轴愈伤再生植株过程进行了系统研究。经筛选获得了以改良的SH大量元素 +MS微量元素及铁盐 +水解酪蛋白 +VB19.9mg·L-1+VB69.5mg·L-1+尼克酸 4 .5mg·L-1+琼脂 8g·L-1为基本成分的愈伤成苗高频再生体系。其中 ,诱导愈伤和保持愈伤的培养基加 2 .0mg·L-12 ,4 -D +0 .0 2 5mg·L-1KT ;诱导再生植株分化的培养基加 0 .4mg·L-1KT +2 0g·L-1的蔗糖 ;诱导生根的培养基为 1/ 2MS ,其中蔗糖浓度为 10 g·L-1。秘鲁苜蓿子叶愈伤组织分化率达 10 0 % ,下胚轴愈伤组织分化率达 92 %以上。以该体系完成苜蓿愈伤植株再生具有高效、快速的特点 ,完成植株再生仅需 6 0～ 70d。     

花椒组织培养再生体系的建立

以凤椒的嫩茎和嫩叶为外植体,研究了不同种类和浓度的细胞分裂素(TDZ、ZT、6-BA和KT)和生长素(IBA和NAA)组合对花椒组织培养再生体系的影响,建立了完整的花椒组培再生体系.结果表明:嫩叶是诱导花椒愈伤组织较好的材料;MS 2,4-D 0.5 mg·L-1 BA 0.5 mg·L-1能成功诱导嫩叶产生愈伤组织,诱导率达90%,且愈伤组织生长良好;MS TDZ 0.03 mg·L-1 BA 0.1 mg·L-1能成功的诱导愈伤组织分化出正常的不定芽,诱导率达70%;芽增殖的适宜培养基为MS 0.4 mg·L-16-BA 0.3 mg·L-1IBA,增殖系数为20;1/4MS 0.4 mg·L-1IBA 能成功诱导健壮的无根苗生根,生根率90%以上.     

邓恩桉下胚轴不定芽再生体系建立的影响因素

以邓恩桉种子萌发的实生苗下胚轴为材料,研究了不同激素种类与浓度及多胺对下胚轴经愈伤组织阶段产生不定芽过程的影响,以建立一种下胚轴不定芽再生快繁体系。结果表明,以MS为基本培养基,在培养基中添加2,4-D 1.0¹.5 mg/L可诱导邓恩桉下胚轴产生高质量的愈伤组织;愈伤组织增殖的适宜培养基为MS+TDZ 0.51.5 mg/L可诱导邓恩桉下胚轴产生高质量的愈伤组织;愈伤组织增殖的适宜培养基为MS+TDZ 0.5¹.0 mg/L,愈伤分化产生不定芽的适合培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+腐胺151.0 mg/L,愈伤分化产生不定芽的适合培养基为MS+TDZ 1.0 mg/L+腐胺15²5 mg/L,愈伤不定芽分化率达77.1%25 mg/L,愈伤不定芽分化率达77.1%⁷9.2%,且外植体褐化率得以降低。愈伤组织块移入分化培养基初期,379.2%,且外植体褐化率得以降低。愈伤组织块移入分化培养基初期,3⁷ d暗培养可使愈伤不定芽分化率提高到82.8%以上。     

草莓花药愈伤组织继代培养和不定芽发生研究

以草莓品种“硕香”和新品系“88-1 6-5”花药初代愈伤组织为材料 ,研究外源生长调节物质和 Ag NO3对愈伤组织继代培养和不定芽发生的影响。结果表明 :草莓花药初代愈伤组织不定芽分化培养基中添加 2 mg/L BA优于添加相同浓度的 ZT、CPPU和 KT。愈伤组织继代培养基中添加 1 mg/L CPPU对防止愈伤组织褐化及保持愈伤组织胚性和不定芽发生优于添加相同浓度的 BA、ZT和 KT。随着继代次数的增加 ,愈伤组织不定芽发生频率下降。分化培养基中添加5～ 1 5mg/L Ag NO3均可提高不定芽的分化率 ,以 8mg/L Ag NO3较为适宜。“硕香”和“88-1 6-5”在各处理中无明显差异     

5个芍药品种愈伤组织诱导及分化研究

芍药组织培养是解决其快速繁殖的有效方法,更为其新品种的繁育提供有效途径。本试验分别从5个芍药品种的不同部位取材,研究了影响芍药愈伤组织诱导和再分化的主要因素。结果表明:2,4-D、NAA与TDZ诱导愈伤组织效果较好,KT、IAA和IBA不利于愈伤组织诱导和不定芽分化;在愈伤组织再分化中,NAA效果优于2,4-D,TDZ优于6-BA;在所选外植体中只有胚轴产生的愈伤组织分化出不定芽,平均分化率为7.95%。     

用基因枪法将Bt杀虫基因导入水稻愈伤组织的研究

从水稻成熟胚诱导出的愈伤组织经继代培养后可以产生大量的胚性愈伤组织。本研究采用基因枪法转化上述胚性愈伤组织 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (5 0 μg·m L-1)的选择培养基上进行抗性愈伤组织的筛选 ,在附加羧苄青霉素 (5 0 0 μg· m L-1)和卡那霉素 (2 5 μg· m L-1)的分化培养基上诱导抗性芽。GUS酶活性检测和对基因组 DNA作 PCR检测结果均为阳性 ,证明外源目的基因 (Bt)已在寒地水稻抗性愈伤组织中整合并表达。抗性再生植株的 GUS酶活性及 PCR检测正在进行中     

红掌愈伤组织培养及不定芽分化影响因素的研究

[目的]构建红掌愈伤组织培养再生植株的技术体系.[方法]以红掌叶片和叶柄愈伤组织为继代培养的外植体材料,探讨红掌品种、外植体大小、激素条件对愈伤组织不定芽分化的影响.[结果]红掌品种YNG1叶片愈伤组织的不定芽分化率最高,叶柄愈伤组织的不定芽分化率则以品种YNG2最高,而品种YNG3和YNG5仅叶片愈伤组织能分化不定芽,叶柄愈伤组织均无分化;与细胞分裂素6-BA相比,向分化培养基中添加ZT与TDZ可促进叶片愈伤组织的增殖及不定芽分化;选取直径约1.0～1.5 cm的愈伤组织块进行继代培养,不定芽分化较多,同时可缩短不定芽分化时间.[结论]该研究为构建稳定高效的红掌组培快繁技术体系提供了新的试验依据.     

月季萨蔓莎不定芽的直接诱导和植株再生的研究

 以月季品种萨蔓莎为试材研究不同外植体、叶片位置、暗培养时间和激素组合对月季不定芽诱导和植株再生的影响。结果表明，月季萨蔓莎在含1.5 mg·L－1TDZ和0.05 mg·L－1NAA的MS培养基上黑暗培养8 d后转入含0.5 mg·L－1 BA和0.01 mg·L－1NAA的MS培养基光下培养，再生效果最好，小叶外植体和复叶柄的再生率分别为51.8%和10%。小叶的叶位对植株再生无显著影响，暗培养时间过长，外植体易形成愈伤组织而不利于不定芽的分化，植物生长调节剂中生长素浓度升高易导致愈伤组织形成而影响植株再生。本研究所建立的不定芽直接再生系统可用于该品种的转基因遗传改良研究。     

矮牵牛(Petunia hybrida Vilm)组织培养技术研究

实验以矮牵牛(Petunia hybrida Vilm)的花瓣为培养材料,在MS培养基中附加不同浓度的细胞分裂素(6-BA)和生长素(NAA),进行矮牵牛快速繁殖技术研究。结果表明,MS+6-BA(2.0 mg.L-1)+NAA(0.1mg.L-1)培养基愈伤组织发生的较早,数量多,培养基为最佳分化培养基,不定芽发生早,粗壮,数量多,玻璃化程度很小;诱导不定根时,1/2 MS+NAA(0.5 mg.L-1)培养基诱导生根的时间较早,不定根发生率达100%。     

杉木不同器官愈伤组织和再生芽的诱导效率

以杉木未成熟胚、种子发芽的下胚轴、子叶以及组培苗茎段为外植体,研究基本培养基、不同激素组合及浓度对杉木愈伤组织的诱导及再生芽发生的影响。结果表明:不同激素组合及浓度对不同外植体的愈伤组织诱导率有显著影响,对未成熟胚愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+2,4-D 2 mg·L~(-1)+6-BA 1 mg·L~(-1)+KT 1 mg·L~(-1),诱导率为92.7%;对子叶、下胚轴愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+6-BA 2 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1)+TDZ 0.01 mg·L~(-1),诱导率分别为97.4%和95.2%;对组培苗茎段愈伤组织诱导最佳的培养基为MS+2,4-D 1 mg·L~(-1)+NAA 2 mg·L~(-1)+TDZ 0.01 mg·L~(-1),诱导率为86.7%;MS+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+KT 1.5 mg·L~(-1)是愈伤组织诱导再生芽的最佳培养基,诱导率为80%。质地疏松的愈伤组织其再生芽率最高(65%),单个质地均匀的愈伤组织其再生芽数可达6个;基本培养基对愈伤组织质地形态有较大影响,1/2MS培养基诱导出愈伤组织质地较疏松,MS培养基诱导出的愈伤组织质地均匀且表面可见颗粒状细胞团,DCR培养基诱导出的愈伤组织质地较密。     

TDZ与6-BA对魔芋不定芽诱导的效应研究

为了建立魔芋离体培养高效再生体系,研究了TDZ与6-BA对魔芋不定芽分化的效应。结果表明:(1)单独使用TDZ和6-BA或6-BA与TDZ、6-BA与NAA组合均能诱导魔芋愈伤组织分化形成不定芽,且TDZ与NAA组合有利于魔芋不定芽的分化,当培养基中激素配比为TDZ 1.0mg·L-1+NAA 0.1mg·L-1时,不定芽分化率可高达96.15%;(2)TDZ或TDZ与NAA组合对魔芋不定芽数量的增加非常有效,增殖系数显著高于单独使用6-BA或6-BA与NAA组合,培养基中TDZ为1.0mg·L-1时增殖系数最高,可达15.78。(3)相比于激素6-BA,TDZ更易于导致不定芽的白化现象,最高白化率可达28.37%,而培养基中NAA的适当添加,可在很大程度上降低魔芋不定芽的白化。TDZ 1.0mg·L-1与NAA 0.1mg·L-1配比,不定芽白化率降至7.56%,6-BA 2.0mg·L-1与NAA 0.1mg·L-1配比不定芽白化率为0。(4)TDZ对魔芋不定芽的伸长生长表现出较强的抑制作用,而6-BA对不定芽的伸长生长则表现出较好的促进作用,可见在继代培养中使用6-BA更有利于魔芋不定芽的伸长生长。     

TDZ对牛皮杜鹃叶片分化及继代增殖的影响

以牛皮杜鹃组培苗为试材,研究以改良MS为基本培养基,不同质量浓度TDZ、ZT与IBA组合,对叶片愈伤组织诱导及分化、继代增殖的影响。结果表明：TDZ对组培苗叶片愈伤组织诱导及分化的效果显著优于ZT,但在继代培养时增殖效果不如ZT;TDZ 0.3 mg/L+IBA 0.5 mg/L处理的叶片分化效果最好,分化率高达97.44%;不定芽在改良MS+ZT 0.2 mg/L+IBA 0.5 mg/L中继代培养后,每瓶分化的不定芽数最多（30.2个）。     

中华猕猴桃华优遗传转化系统建立研究

为了更好的利用遗传转化技术进行猕猴桃品种改良研究,以中华猕猴桃华优组培苗幼嫩叶片为材料, 研究了外植体分化不定芽再生途径所需的培养条件及转化效率提高方法。结果表明,在叶片不定芽诱导培养基中加 入浓度为0.75~1.0 mg/L 的TDZ 时,叶片愈伤发生率达85.7%~90.1%,不定芽发生率达41.8%~44.6%;在TDZ 1.0 mg/L 基础上,补充0.1~0.4 mg/L IAA 可使叶片愈伤发生率提高到96.7%~100%,不定芽发生率提高到67.4%~71.9 %; 在农杆菌侵染液与共培养基中同时加入75~100 滋mol/L 浓度的AS,可使GUS 瞬时表达率及卡那抗性芽发生率分别 提高至27.9%、14.5%;外植体被农杆菌侵染前,的预培养2~3 d有利于提高GUS 表达率与卡那抗性芽发生率。GUS 染色与PCR 扩增检测结果显示,Shiva A基因已转化至中华猕猴桃华优转基因植株。     

细胞分裂素对红掌愈伤组织不定芽分化与增殖的影响

[目的]研究细胞分裂素对红掌组培苗繁殖速度及质量的影响。[方法]以继代培养第6代的愈伤组织为试验材料,探讨了ZT、TDZ、6-BA 3种细胞分裂素及其浓度对不定芽分化及变异的影响。[结果]在使用浓度2.0~8.0 mg/L的范围内,随着细胞分裂素浓度的增加,正常不定芽的分化数及叶片数呈下降趋势,而异常不定芽分化逐渐增多,且随着培养时间的延长,这种影响变得更加明显;3种细胞分裂素的培养效果具有显著差异,ZT和6-BA添加浓度分别在2.0和4.0 mg/L以下时,其正常不定芽分化较多,不良变异率较少,而TDZ在0.5 mg/L时已显著抑制了正常不定芽的分化,同时易产生异常不定芽。[结论]3种细胞分裂素作用的强弱依次为TDZZT6-BA;在红掌愈伤组织继代培养诱导不定芽过程中,应避免使用高浓度细胞分裂素。     

基于AFLP标记的河八王种质资源遗传多样性分析及分子身份证构建

以广西地区的15份河八王无性系为材料,采用AFLP标记结合毛细管电泳进行分析,计算多态性引物的总扩增条带数、多态性条带数和多态性条带比率。进行遗传相似系数和UPGMA聚类分析,并建立分子身份证。25对AFLP引物组合在15份河八王种质资源中共扩增出2 208个位点,其中多态性位点1 914个,多态性比率(PPB)为87.11%。UPGMA聚类分析表明,供试的15份河八王种质资源其遗传相似系数变化范围在0.656~0.878,在相似系数为0.706时,可划分为3个类群。结合特征带和不同引物组合方法可有效建立河八王种质资源特异分子身份证,置信概率达到99.99%。所供试河八王种质具有较丰富的遗传多样性水平,基于3对AFLP引物组合104条谱带构建的15份河八王种质分子身份证具有唯一性,AFLP标记是在分子水平上鉴定河八王种质的有效方法。