借助纳米珠制作单分子DNA芯片

传统的单分子DNA芯片制作技术主要依靠稀溶液铺设,有很大的随机性,即有许多DNA分子重叠而无法观察,还有一部分基片上没有样品,造成浪费,为克服上述缺点,作者采用了一种新的单分子芯片铺设技术,纳米珠作为单分子DNA的连接载体,利用其空间位阻作用将DNA分子沉降到经过表面化学处理的基片表面,纳米珠的直径和DNA长度控制芯片上样点间距,去除纳米珠后,获得单分子DNA纳米阵列芯片。为单分子、高通量DNA芯片的制作做了新的探索。这个技术的完善将为今后单分子DNA研究开辟新的途径。     

金黄色葡萄球菌px-1 DNA芯片的制备及检测

提取金黄色葡萄球菌px—1总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E.coli DH5α,从而构成金黄色葡萄球菌px—1的基因文库。用PCR方法扩增基因文库,所得PER产物点于芯片上,从而制各px—1DNA芯片。分别提取不同盐浓度培养的px—1的总RNA,把不同盐浓度培养的px—1的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA。通过杂交检测芯片,并获得杂交图像。     

假单胞杆菌PsJN DNA芯片的制备及检测

提取假单胞杆菌PsJN总DNA经酶切后,与载体质粒Puc18链接,并转化E. coli DH 5α,从而构成假单胞杆菌PsJN的基因文库.用PCR方法扩增基因文库,所得PCR产物点于芯片上,从而制备PsJN DNA芯片.分别提取不同C源培养的PsJN的总RNA,把不同C源培养的PsJN的总RNA反转录为DNA,用Cy3,CY5分别标记反转录的DNA.通过杂交检测芯片,并获得杂交图像.     

在DNA芯片平台上探测AIV不同亚型 cDNA

 对以基因芯片技术为基础的检测H5、H7、H9亚型禽流感病毒的快速诊断技术进行了研究。试验中所使用的病毒为A/Goose/Guangdong/1/96（H5N1）、A/African starling/983/79（H7N1）和 A/Turkey/Wisconsin/1/66（H9N2）。通过RT-PCR获得大约500 bp的禽流感病毒基因cDNAs片段，克隆，从重组质粒扩增DNA片段，并点到玻璃载体上，制成芯片。在病毒RNA反转录过程中，用Cy5标记样品 cDNAs。样品 cDNAs是一个包括禽流感病毒HA和M基因的混合物。依据M基因鉴别型，依据HA基因鉴别亚型。扫描芯片上探针结合位点，杂交信号与预期设想基本一致。结果显示，DNA芯片技术可以提供一种有效的AIV诊断方法。     

钉螺总DNA提取方法的比较

以日本血吸虫的惟一中间宿主钉螺为对象,研究不同方法对其总DNA提取效果的影响.结果表明,SDS法和CTAB法可以快速、简便地从新鲜钉螺和钉螺的乙醇固定标本中提取总DNA.以该DNA为模板.通过相应引物成功扩增出线粒体CO1基因片段.提取DNA前钉螺标本用TE和PBS做预处理,提高了产品DNA的质量.     

用花粉管通道法将外源DNA导入新疆棉花初探

采用花粉管通道法将抗病品种总ＤＮＡ片断导入不抗病的新疆６个棉花品种（系），共注射２６朵花，得到４个发育较好的棉铃，成铃率为１５％。     

用Digoxigenin标记重组质粒DNA探针特异性的改良

鸡马立克病病毒基因组DNA的BanHI-K_3片断克隆的重组质粒DNA及从质粒上切下的经电泳和电洗脱提纯的BamHI-K_2DNA片断,在用非放射性Digoxigenin([dig])标记后,分别用作检测马立克病病毒DNA的探针。对两种探针特异性的比较表明,BamHI-K_3克隆的全质粒DNA探针对其它质粒来源的NDA仍表现出很强的交叉反应性,而用经电泳电洗脱提纯的BamHI-K_3DNA片断制备的探针,则仅对含同源DNA片断的质粒提取物或菌苔裂解物产生明显呈色反应,但对不含同源DNA的其它质粒DNA提取物几乎完全不呈现交叉反应。     

快生型大豆根瘤菌G+Cmol%测定及与其它根瘤菌之间的DNA同源性

用热变性温度法测定了快生型大豆根瘤菌DNA中G+Cmol%,结果表明其C+Cmol%为58.4-65.6,菌株间差为7%,提示了不同种的存在。以液相复性速率法测定了快生型大豆根瘤菌与其它根瘤菌种之间的DNA同源水平,测定证明它们之间的同源水平很低。快生型大豆根瘤菌与慢生型大豆根瘤菌三个DNA同源组间的同源率分别力15,10和25%,表明其亲缘关系很远。同源水平的测定为进一步研究奠定了基础。     

适于AFLP分析用的荔枝DNA提取方法

A：F7ll,（AJnpMedfraglnntlengthhorphism）具有共显性表达,不受环境影响,无复等位效应,带纹丰富,DNA用样量少,灵敏度高,快速高效,重复性好等优点．AFLP被认为是最有效的分子标记方法,近年来发展很快,在芒果、愕梨（Reteretal,1995）等果树上均有研究．然而有关荔枝Alllil,分析却少见报道．A：FIP反应程序主要包括模板DNA制备,酶切片断及凝胶电泳分析3个步骤,其中高分子组成基因组DNA的成功制备和避免部分分解是AFLP成功的关键．传统的DNA提取方法包括以下几种：①碱法;②0？A：II;③SDS法．其中碱法多用于…     

利用复合PCR结合DNA芯片的方法进行快速转基因事件检测

以我国批准进口用作加工原料的6种转基因玉米为材料,根据其外源基因、载体构建及插入位点,应用6对特异性引物及35S、NOS引物,设计并优化了复合PCR反应体系,对其进行转基因成分检测.同时尝试利用复合PCR与DNA芯片相结合,对不同转基因玉米混合样品进行检测,探索建立转基因事件快速检测和确认方法.     

不同玻璃对温室内植物生长环境的影响

测试了多种玻璃在１９０ｎｍ至５０μｍ波长范围内的透射光谱，以及实际可见光透射率和太阳辐射透射率，并对各个波段内的透射率进行了计算，同时还对玻璃的传热特性做了比较试验，并测试了不同玻璃覆盖下的植物光合作用速率．研究结果表明，比利时镀膜玻璃最适合用于冬季温室覆盖，其次是普通玻璃和银白色玻璃     

Automatic image analysis and spot classification for detection of pathogenic Escherichia coli on glass slide DNA microarrays

A computer algorithm was created to analyze and quantify scanned images from DNA microarray slides developed for detecting pathogenic Escherichia coli isolates recovered from agricultural food products. The algorithm computed centroid locations for signal and background pixel intensities in RGB space and defined a plane perpendicular to the line connecting the centroids as a decision boundary. The algorithm was tested on 1534 potential spot locations which were visually classified depending on the strength of the signal. Three other standard measures of SNR (SSR, SBR, and SSDR) were also performed for each potential spot location. The number of errors as compared to visual classifications was computed for each of the four measures. SSR and SSDR, which depend on pixel intensity standard deviations, performed poorly with high false positive results, while the current algorithm and SBR, which were independent of standard deviations, performed much better. Overall error rates were 1.4% for the reported algorithm, 2.0% for SBR, 14.2% for SSDR, and 16.8% for SSR.     

Genefinder和EB在DNA电泳谱带定量分析中的比较

[目的]比较Genefinder和EB对DNA电泳谱带定量分析的影响。[方法]用加入Genefinder或EB的琼脂糖凝胶进行PBR322DNA电泳,并用凝胶成像分析系统进行标准曲线相关性等分析。[结果]用Genefinder作染料,标准曲线相关性、样品含量百分误差、灵敏度等都比EB好。[结论]用Genefinder作染料不仅提高了定量分析的质量,而且安全、无污染,有利于保护环境。     

黄孢原毛平革菌预处理麦草生物制浆的研究

该实验采用黄孢原毛平革菌处理麦草,同时改变生物预处理条件:麦草含水率、生物接种量、营养源、预处理时间.通过测定纤维素、戊糖和木素降解率,探讨生物预处理的最佳条件.实验结果表明,较佳的生物预处理条件为:麦草含水率80%,生物预处理时间10 d左右,氮源加入量0.25%,生物接种量对菌株的生长影响不大.      

Development of a stable SCAR marker for rapid identification of Ganoderma lucidum Hunong 5 cultivar using DNA pooling method and inter-simple sequence repeat markers

The cultivar Ganoderma lucidum Hunong 5 was obtained using cross-breeding. Hunong 5 has high commercial value due to its high polysaccharide and triterpene content. This is the first report of using a DNA pooling method to develop a stable sequence characterized amplified region (SCAR) marker for rapid identification of the G. lucidum Hunong 5 cultivar. The SCAR marker was developed by first generating and sequencing a distinctive inter simple sequence repeat (ISSR) fragment (882 bp) from G. lucidum Hunong 5 cultivar. A stable SCAR primer pair GLH5F/GLH5R were obtained to identify the cultivar and the SCAR marker is a DNA fragment of 773 bp.