柑橘原生质体电融合研究进展

柑橘原生质体电融合研究进展华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室刘继红柑橘是多年生木本植物,童期长,遗传上高度杂合,一些主栽品种雄性败育（如温州蜜柑）或／和雌性败育（如脐橙）,更为重要的是柑橘具有多胚性,使得杂交育种进展极为缓慢。而原生质体融合技术能...     

水稻原生质体电融合适宜条件的研究

水稻原生体电融合适宜条件为：交流电场强度２５０Ｖ／ｃｍ；交频率５００ｋＨｚ；脉冲强度１．６ＫＶ／ｃｍ；脉冲宽度５０ｕｓ；脉冲个数为２。此时的１对１融合率为１４．９％，总融合率达２４．９％。在此条件下，电场处理对原生质 体活力无明显的影响。     

作物原生质体电融合技术的新进展

本文对作物原生质体电融合技术在作物体细胞杂交中的应用及最新发展进行了综述,并对电融合的原理、方法及优点进行了描述。本文引用了国内外近期报道的具有良好农艺性状的体细胞杂种或胞质杂种的许多例证,并重点介绍了禾谷类粮食作物方面的研究进展及存在问题。这些例证不仅具有育种应用价值,而且对于研究如何选择适宜的融合一脉冲参数、实现高频率异种融合的条件以及对杂种细胞有效的筛选方法等亦有重要的理论意义。     

香蕉原生质体的电融合研究

以香蕉栽培种＂过山香＂（Musa AAB Silk cv.Guoshanxiang）和野生阿宽蕉（Musa itinerans Cheesm.AB Group）原生质体为融合试材,进行香蕉高效融合的电融合参数优化。研究表明,在交变电场（AC）200 V/cm、AC作用时间30 s、直流脉冲电压（DC）1500 V/cm、DC脉冲时间40μs、脉冲次数为2次时,融合效率最佳,融合率可达32.4%以上,原生质体活力达81.4%。     

香蕉原生质体的电融合研究

以香蕉栽培种"过山香"(Musa AAB Silk cv.Guoshanxiang)和野生阿宽蕉(Musa itinerans Cheesm.AB Group)原生质体为融合试材,进行香蕉高效融合的电融合参数优化。研究表明,在交变电场(AC)200 V/cm、AC作用时间30 s、直流脉冲电压(DC)1500 V/cm、DC脉冲时间40μs、脉冲次数为2次时,融合效率最佳,融合率可达32.4%以上,原生质体活力达81.4%。     

普通小麦和黑麦草原生质体电融合的适宜条件

研究了普通小麦(Triticum aestivum L.)、多花黑麦草(Lolium muiriflorum Lam.)和多年生黑麦草(Lolium perenne L.)原生质体电融合的适宜条件。结果表明:在同一电场条件下,不同物种原生质体的电融合反应有差异,在500kHz、100V/cm交流脉冲和1.5kV/cm、40μs直流脉冲下,原生质体排列成串,小麦、多花黑麦草和多年生黑麦草原生质体融合频率分别为80％,60％,30％;电场参数中的场强和直流脉冲幅宽对原生质体融合频率影响较大;融合液中CaCl_2浓度以0.5～1mmol/L为宜;渗透压较低的融合液有利于原生质体融合;在适宜的电脉冲处理后,原生质体存活率与对照相似,经融合处理的原生质体培养一个月后,其植板率有所提高。     

真姬菇生长发育条件研究

研究了温度、培养料及含水量对真姬菇生长发育的影响。结果表明,真姬菇菌丝生长较适温度２５～２８℃,子实体发育较适温度１５～１８℃,培养料含水量以６５％～７０％为宜,采用木屑７３％、麦皮２０％、玉米粉５％和木屑７３％、“２０１”稻草粉２０％,玉米粉５％两组配方袋栽真姬菇产量较高,生物效率５８．０％～６２．２％。试验还表明,富含蛋白的“２０１”两用稻草粉是一种代替麦皮较好的培养料。     

龙眼荔枝属间原生质体电融合

由龙眼的幼胚培养诱导、筛选出松散型胚性愈伤组织 ,由之建立了胚性悬浮细胞系 ;用同样的方法建立了荔枝的松散型胚性愈伤组织系 .龙眼的胚性悬浮细胞和荔枝的胚性愈伤组织在含纤维素酶和果胶酶各 10 .0g· L-1的 CPW- 13M的酶解液中酶解 ,经纯化后可得到较为纯净的原生质体 .采用电融合方法进行两种原生质体融合处理 ,获得了适宜的融合参数 ,融合率达 2 0 %以上 .融合产物经初步培养 ,形成了多细胞团     

马铃薯叶肉原生质体电融合参数优化及杂种植株再生

以马铃薯栽培种“中薯2号”的无性系3^#、8^#和野生种Solanum chacoense叶肉原生质体为融合试材,优化马铃薯高效融合的电融合参数。研究表明,在交变电场(AC)100V／cm、AC作用时间20s、直流脉冲电压(DC)1100V／cm、DC脉冲时间60μs、脉冲数1次时,双核融合率可达40％以上。融合产物经过4-5个月的培养获得再生植株。对首先再生的15个株系通过RAPD标记检测,证明均为体细胞杂种。所用引物C-01能够同时扩增出杂种植株中双单倍体亲本1100bp和670bp的特征带以及野生种．S.chacoense亲本510bp的特征带。     

里氏木霉DWC原生质体制备条件的研究

对影响里氏木霉 (Trichodermareesei)DWC原生质体制备和再生的条件 ,包括菌龄、水解酶液的种类及浓度、酶解温度、酶解时间、再生培养基的稳渗剂进行了研究。结果表明 :当菌龄为 1 0h ,采用 2 %纤维素酶和 2 %蜗牛酶混合液 ,酶解温度 30℃ ,酶解时间 90min ,用 0 .6mol·L- 1 蔗糖作再生培养基的稳渗剂 ,原生质体的形成数为60万个·L- 1 ,原生质体再生率为 1 0 .1 %。     

小鼠卵母细胞的电激活及胚胎电融合

为提高核移植的效率，采用SHIMADZU生产的SSH－2电融合仪进行小鼠卵母细胞电激活及2－细胞胚胎电融合，结果表明：（1）不同脉冲的卵激活率有极显著差异（P＜0．01），在2次脉冲和30μs的脉冲宽度的条件下，脉冲强度以0．1kV/cm最好，激活率达76．9％；（2）不同脉冲强度、脉冲次数和脉冲宽度的胚胎融合率亦有极显著差异（P＜0．01），最佳融合参数为0.1kv/cm,30μs的脉冲宽度及2脉冲，胚胎融合率达84．6％。     

小单孢菌40027菌株原生质体的形成和再生

通过酶解温度、酶解时间和再生培养基对小单孢菌40027菌株原生质体形成和再生的研究,确定小单孢菌40027菌株原生质体制备条件为37℃酶解60min;原生质体的再生培养基为R-1培养基。     

不同电融合参数对猪手工克隆重构胚胎发育效果的影响

为探讨不同融合参数对猪手工克隆(HMC)重构胚发育效果的影响。本试验比较了胞质与胞质之间不同黏合方式以及不同的电融合参数对融合效率的影响,以及融合参数对HMC重构胚胎发育的影响。结果表明,卵-供体-卵的黏合方式有利于提高胞质的融合率;融合参数3(2 k V/cm,80μs,1次)和参数4(2.2 k V/cm,80μs,1次)的对胞质的融合率显著高于其他参数,两个参数对HMC重构胚卵裂率的影响差异不显著,而参数3的囊胚率以及囊胚细胞总数显著高于参数4。参数3更适合用于HMC重构胚的融合,并能提高重构胚的囊胚发育率以及囊胚的细胞个数。     

紫孢侧耳平菇原生质体再生无性系的变异性研究

用溶壁酶制备出平菇原生质体，经过原生质体再生，获得３５６个无性系菌株。从中随机选出３１个原生质体Ｆ１代无性系，２５个原生质体Ｆ２代无性系进行一些性状研究。所测的３１个无性系Ｆ１代菌株都产生了新的遗传变异。所测的５６个无性系中有３１个茵株的生物效率显著高于亲株。所以，原生质体再生无性系的变异，可以丰富食用菌的品种资源，为高技术育种开辟了一条新途径。     

谷子新品种保213与济谷14产量性状与抗胁迫能力比较研究

以具有不同株型的优质高产谷子品种保213和济谷14为材料,安排了4个留苗密度(52.5、60、67.5和75株/m2)、5个施氮水平(0、4.5 g、9 g、13.5 g和18 g/m2)的裂裂区试验,系统比较了不同处理对产量相关性状影响,结果表明:不同处理保213的产量显著优于济谷14。在试验范围内,不同氮肥处理对2品种的影响不显著,施氮量在9～13.5 g/m2可以满足高产需求;而不同密度对2品种有显著的影响,济谷14的适宜密度在60～67.5株/m2,而保213在52.5～60株/m2下产量较高。2品种单株成穗率均随密度的升高而降低;增加施肥量提高了济谷14的成穗率,但保213反而降低。2品种产量随收获穗数增加而提高,但济谷14的增产幅度大于保213。与松散型济谷14相比,紧凑型品种保213具有较强的抗倒伏性能,更适合于在高肥、高密下获得高产。     

烟草叶片原生质体制备及其在蛋白互作研究中的应用

[目的]获得高产量的烟草叶片原生质体.[方法]在前人的基础上,在酶浓度和酶解时间上,对简易大量制备本氏烟叶原生质体的条件进行了进一步的探索;并以此为基础,通过双分子荧光互补试验进一步研究了其在蛋白互作研究中的应用.[结果]在纤维素酶浓度为1.3％,离析酶浓度为0.4％,果胶酶浓度为0.3％,酶解4h,酶解温度28℃,并在简易纯化的条件下制备原生质体,所得到的完整原生质体产量最高,并且细胞碎片和杂质均最少.[结论]该方法为瞬时表达于本氏烟叶中的荧光蛋白研究提供了重要的技术参考.     

植物原生质体及利用其进行细胞结构和生理研究的进展

本文综述自70年代以来利用原生质体进行细胞结构和生理研究的进展.内容包括:用以细胞结构和生理研究的原生质体的制备;利用原生质体进行细胞结构,尤其是细胞壁再生的研究;利用原生质体进行细胞生理的研究,着重反映光合作用和跨膜运输两方面的内容.