嗜水气单胞菌体外粘附Caco-2细胞对细胞膜生物学特性的影响

采用Caco-2细胞培养模型，研究了嗜水气单胞菌粘附Caco-2肠上皮细胞后时其活力、细胞膜磷脂酶A2（PLA2）、胞浆游离钙浓度、膜通透性和膜流动性的影响。结果显示，细菌粘附后1h，肠上皮细胞活力显著下降，PLA2活性和胞浆游离钙浓度显著增加，细胞外LDH含量和细胞损伤率显著升高（膜通透性异常增加），肠上皮细胞膜荧光，偏振度、膜脂微粘度显著增加（膜流动性降低），且上述指标均随着粘附时间的延长而持续升高或降低。     

嗜水气单胞菌研究进展

嗜水气单胞菌属于弧菌科气单胞菌属,在自然界分布广泛,可以感染多种水生及陆生动物并引起不同的疾病,是一种重要的人—兽—鱼共患病病原菌,本文概述了嗜水气单胞菌的分类地位和生物学性状,并对其鉴定方法、致病因子和由其引起的疾病进行了综述。     

罗非鱼嗜水气单胞菌的分离鉴定

北京某鱼场饲养的罗非鱼陆续发病死亡,其体表鳞片局部出血,肝、胰、脾脏肿大坏死,肠腔积水等,从病死及濒死罗非鱼的肝、胰脏中分离到 ４ 株细菌,经形态学、生理生化特性及血清凝集试验,鉴定为嗜水气单胞菌。４ 株细菌均能致死小鼠和鲢鱼。药敏试验表明,４ 株细菌对环丙沙星、蒽诺沙星高度敏感,而对青霉素和红霉素不敏感。     

嗜水气单胞菌检测技术研究进展

嗜水气单胞菌是重要的水生动物病原菌,也是重要的人兽共患病原菌。近年来,其检测技术取得了迅速发展。论文对嗜水气单胞菌的检测技术进行了综述,并对其检测新策略进行了展望。     

鱼嗜水气单胞菌疫苗研究进展

嗜水气单胞菌是一种人兽共患的致病菌,对水产养殖造成巨大危害。己报道的嗜水气单胞菌疫苗有全菌灭活苗、菌体成分亚单位疫苗、减毒活疫苗和DNA疫苗,现分别综述。     

嗜水气单胞菌检验程序的研究

本试验系统研究了嗜水气单胞菌（Ａｅｒｏｍｏｎａｓｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ,Ａｈ）的细菌学及毒力因子检测。对不同来源菌株的细菌作分离及生化鉴定,确定了Ａｈ的六项生化鉴定指标,同时比较确定了ＡＨＭ和ＲＳ作为Ａｈ的选择培养基。检验中氧化酶阳性反应是Ａｈ重要的鉴别指标。比较Ａｈ毒素、蛋白酶及Ｓ蛋白三种毒力因子的常规检测及免疫学检测,根据检测结果选出毒力因子分布各异的Ａｈ菌株作动物致死性试验,最终在Ａｈ三项毒力因子指标中选择蛋白酶一项作为检测指标,具有代表性,同时简化了检验程序,使Ａｈ的检测实际可行。     

企鹅源嗜水气单胞菌的分离鉴定

从上海某水族馆因血痢、厌食、消瘦而死亡的秘鲁帝企鹅的心脏、肝脏中分离到2株细菌SH051237和SH060104,其培养性状及生化特性基本一致,经生化试验、VITEK试验等鉴定为嗜水气单胞菌.动物试验表明,分离株对小鼠均具有较强的致病性,且从死亡鼠回收到相应细菌.结果表明,分离到的菌株为致病性嗜水气单胞菌.     

聚合酶链反应(PCR)法检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因

根据已报道的鱼源嗜水气单胞菌的丝氨酸蛋白酶基因序列设计和合成了 1对可扩增目的片段长度为 893bp的引物 ,建立了检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶基因 PCR方法。脱脂奶平板产溶蛋白圈的 10株鱼源嗜水气单胞菌株以及 ATCC796 6检测均为阳性 ,检测的灵敏度可达 2 .0× 10 - 3g/ L的模板 DNA。表明 PCR法在分子水平快速、特异检测嗜水气单胞菌丝氨酸蛋白酶并可作为流行病学调查的手段     

嗜水气单胞菌分离株ERIC-PCR及RAPD分型比较

采用ERIC-PCR和RAPD 2种方法对嗜水气单胞菌2009年分离菌株及实验室保存菌株共83株进行分子分型。参考相关文献设计并合成引物,分别进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳,电泳结果经Quantity One软件数值化后利用SPSS软件进行聚类分析。结果显示,除少数分离株外,使用2种方法对大多数菌株分型,均能得到多态性较好的指纹图谱。RAPD的AP12H引物能扩增出1～12个200～4 500bp之间的条带,可将嗜水气单胞菌分离株分为4群、12类。ERIC-PCR能扩增出4～16个100～5 800bp之间的条带,将嗜水气单胞菌分离株分为4群、17类,同一年代、同一地域分离株分别有聚成一类的趋势。2种分型方法均体现很好的分型能力。但ERIC-PCR分型与RAPD分型相比,重复性和稳定性更好,分辨力更高,且具备RAPD不要求模板序列已知而直接进行扩增的优点,更适合嗜水气单胞菌的分型研究。     

3株嗜水气单胞菌弱毒株的毒力相关特性分析

对健康鲫鱼和水体环境中分离的3株嗜水气单胞菌NJ-4、NJ-13和CS-13的毒力相关特性进行分析。采用PCR技术检测该菌5种主要毒力基因：气溶素（aer）、细胞毒性肠毒素（act）、细胞兴奋性肠毒素（alt）、温敏胞外蛋白酶（eprCAI）和丝氨酸蛋白酶（ahp）,并进行溶血性、溶蛋白性、细胞毒性、细胞黏附特性和主要外膜蛋白（MOMP）图谱分析,以及斑马鱼致病性试验。结果显示：NJ-4不合上述5种毒力基因,NJ-13只含有ahp基因,CS-13仅具备aer基因。3个菌株培养上清均不溶血、不溶蛋白;NJ-4和CS-13培养上清不能致细胞病变,NJ-13上清对细胞的毒力效价达1：128;而强毒株BSK-10培养上清的溶血价、溶蛋白效价和细胞毒力效价分别为1：128、1：256和1：256。NJ-4、NJ13和CS-13对HEp-2细胞有一定的黏附能力,但与强毒株BSK-10相比,黏附能力较弱。NJ-4、NJ-13和CS-13的培养液上清均不致斑马鱼死亡,菌体有一定致病作用,对斑马鱼的LD50超过10^8CFU／mL;而BSK-10培养上清和菌体致病性均很强,菌体对斑马鱼的LD50小于10^5CFU／mL。NJ-4、CS-13的MOMP条带与BSK-10相似度很高,而与NJ-13有一定差别,可能与菌株的来源有一定关系。结果表明,3株细菌均属弱毒株,特别是NJ-4的毒力最弱。     

北极狐嗜水气单胞菌的分离与鉴定

从北极狐脏器中分离到一种革兰氏阴性杆菌 ,经培养特征、形态、生理生化、致病力测定及药敏试验证实为嗜水气单胞菌 ,确定该菌为引起狐致死的病原菌     

嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的纯化及特性分析

为阐明嗜水气单胞菌弹性蛋白酶的性质及其在致病过程中的作用，试验以我国分离的嗜水气单胞菌J-1株为研究对象．纯化了其弹性蛋白酶．并对该酶进行热稳定性、蛋白酶抑制剂抑制作用、金属离子影响和致病性等特性分析。结果表明．嗜水气单胞菌J-1株的培养上清经35％～60％硫酸铵沉淀、阴离子交换层析和凝胶过滤层析，可获得纯化的弹性蛋白酶．SDS-PAGE显示单条带．相对分子质量约38000。该酶对热稳定，EDTA可抑制其活性，PMSF对其无影响，金属离子铜、锌、钴等抑制其活性。说明此酶属于热稳定金属蛋白酶。腹腔注射纯化的弹性蛋白酶能致死小鼠．其对小鼠的LD50为6．4μg（0．2mL）．表明该酶是一种直接致病因子。     

Dot-ELISA法检测致病性嗜水气单胞菌

在鱼类致病性气单胞菌诊断试剂盒的基础上,用斑点酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila,Ah)胞外蛋白酶ECPase54,同时用脱脂奶平板、PCR特异性扩增气溶素基因aer和16S rRNA基因检测72株气单胞菌分离株.结果显示致病性嗜水气单胞菌检测阳性率分别如下:Dot-ELISA法90.3％(65/72)、脱脂奶平板法75％(54/72)、aer基因PCR法94.4％(68/72)、16S rRNA PCR法81.9％(59/72),Dot-ELISA与其他3种方法的符合率分别为79.2％(57/72)、91.6％(66/72)、81.9％(59/72).在ECPase54兔抗血清制备后的2、4、6、12、18个月,用Dot-ELISA检测72株分离株,检测结果重复性好.结果表明Dot-ELISA法敏感、特异、实用,可用于鱼类致病性Ah的临床诊断.