脂肪酸结合蛋白5对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成的影响

脂肪酸结合蛋白5（fatty acid binding protein 5,FABP5）是一种胞内脂质运载体。本试验应用甘油三酯测定法及BODIPY染色法检测奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cell,BMEC）中甘油三酯及脂滴分泌情况,采用实时荧光定量PCR、Western blotting技术检测BMECs中FABP5对固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）的表达影响。结果显示,试验成功获得高纯度的BMECs,构建了pGCMV-IRES-EGFP-FABP5真核表达载体,且与空白对照组和空载体组相比,FABP5过表达组的甘油三酯和脂滴分泌量极显著增加（P<0.01）,同时SREBP-1c及靶基因FAS、ACC的表达量均极显著增加（P<0.01）;试验成功筛选了FABP5 siRNA1为最佳干扰片段,当FABP5抑制时,抑制组的甘油三酯、脂滴分泌量极显著减少（P<0.01）,SREBP-1c、FAS、ACC的表达量均极显著降低（P<0.01）。表明FABP5可通过上调SREBP-1c的表达从而促进BMEC中乳脂的合成。     

Effect of maternal rearing on lipid metabolism-related gene expression in offspring broilers during embryonic development

1. The aim of this study was to investigate the effect of maternal rearing on lipid metabolism and lipid metabolism-related gene expression in offspring broilers during embryonic development. 2. One hundred laying Sanhuang breeders were divided into two groups, and either floor-reared or cage-reared on the same diet. Liver and serum samples were extracted on days 14 and 19 of embryonic development and at hatching. The lipid metabolism related gene expressions of acetyl CoA carboxylase (ACC), fatty acid synthase (FAS), malic enzyme (ME), apolipoprotein B100(apoB100), sterol regulating element binding protein (SREBP-1c), carnitine palmitoyltransferase (CPT-1) and peroxisome proliferators-activated receptor (PPARα) genes were determined using real time RT-PCR. 3. The results showed that embryonic weight, liver weight, serum and hepatic total cholesterol (TC) concentration and serum triglyceride (TG) content were not significantly different between the cage-reared group and the floor-reared group during embryonic development. However, embryonic weight, liver weight, serum and hepatic TC concentration and serum TG content in the cage-reared group were significantly higher than in the floor-reared group at hatching. 4. Hepatic ACC, FAS, SREBP-1c, ME and apoB genes expression were not significantly different between the cage-reared and the floor-reared groups during E9 and E14 development. Hepatic ME gene expression in the cage-reared group was higher than in the floor-reared group during E19 development. However, hepatic FAS, SREBP-1c, CPT-1 and PPARα gene expressions in the cage-reared group was higher than in the floor-reared group. 5. A change in the maternal regime could regulate lipid metabolism in offspring broilers during embryonic development, and especially at hatching.     

纳米氧化锌对育肥牛生产性能、血清指标和背最长肌肌内脂肪沉积相关基因表达的影响

本试验旨在研究纳米氧化锌对育肥牛生产性能、血清指标及背最长肌肌内脂肪(IMF)沉积相关酶活性和基因表达的影响。选用16头西杂阉公牛(西门塔尔牛×本地黄牛),随机分2组,每组8个重复,每个重复1头牛。对照组饲喂基础饲粮(不添加锌),纳米氧化锌组在基础饲粮的基础上添加80 mg/kg锌(纳米氧化锌形式)。试验期为60 d。结果表明：1)与对照组相比,添加纳米氧化锌显著提高了育肥牛的平均日增重(P<0.05),显著降低了料重比(P<0.05)。2)与对照组相比,添加纳米氧化锌极显著提高了血清游离脂肪酸、甘油三酯、总胆固醇、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、葡萄糖和胰岛样生长因子-Ⅰ含量(P<0.01),显著提高了胰岛素含量(P<0.05),极显著降低了葡萄糖/胰岛素比值(P<0.01)。3)与对照组相比,添加纳米氧化锌显著提高了背最长肌IMF含量和乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性(P<0.05),极显著降低了激素敏感脂肪酶(HSL)活性(P<0.01),显著降低肉碱转移酶-1(CPT-1)和脂蛋白脂肪酶(LPL)活性(P<0.05)。4)与对照组相比,...     

日粮蛋白质水平对乌金猪肝脏组织脂类代谢相关基因表达的影响

为探讨日粮蛋白质水平对乌金猪肝脏组织脂类代谢相关基因表达的影响,试验选取体重约15 kg的乌金猪54头,随机分为3组,每组18头,为低、中和高蛋白质组,其在15～30、30～60及60～100 kg生长阶段的蛋白质水平分别为14%、12%、10%,16%、14%、12%和18%、16%、14%。猪在体重为30、60和100 kg时屠宰,取其肝脏组织,Real-time PCR定量检测脂类代谢相关基因的表达水平。结果显示,在30、60和100 kg时,乌金猪肝脏组织中ACC、FAS、SREBP-1C基因的表达水平均随着蛋白质水平的升高而降低;CPT-Ⅰ和PPARα基因的表达水平则随着蛋白质水平的升高而升高。由此表明,日粮高蛋白质水平显著降低肝脏脂肪酸合成代谢基因(ACC、FAS和SREBP-1C)的表达(P<0.05),提高脂肪酸分解代谢基因(CPT-Ⅰ和PPARα)的表达水平(P<0.05);脂肪酸合成减少,且被氧化的量增加,两者共同作用导致用于合成甘油三酯(TG)的脂肪酸含量降低,从而减少了从肝脏组织被运输到各个组织的TG含量,使机体沉积TG的能力降低。     

FADS2基因在奶牛乳腺细胞中的过表达和干扰研究

为了研究脂肪酸脱氢酶2(fatty acid desaturases 2,FADS2)基因在奶牛乳腺细胞脂肪酸代谢中的作用,本研究在奶牛乳腺上皮细胞中对FADS2基因进行过表达和干扰,研究FADS2基因表达对脂肪酸合成相关基因的调控及对奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯含量的影响。针对FADS2基因的CDS序列设计siRNA和过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP,转染奶牛乳腺细胞检测FADS2基因过表达和干扰对脂肪酸代谢相关基因表达的影响及细胞中甘油三酯含量的变化。结果显示,试验成功获得过表达载体pcDNA3.1-FADS2-EGFP和干扰片段,转染细胞后具有良好的过表达和干扰效果。FADS2基因过表达后,1-酰基甘油磷酸酰基转移酶(AGPAT1)、固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)、3-磷酸甘油转移酶(GPAM)、脂肪酸延长链5(ELOVL5)、乙酰辅酶A酰基转移酶1(ACAA1)、脂肪酸脱氢酶1(FADS1)、二酰基甘油转酰基酶1(DGAT1)和过氧化物酶体增殖激活受体α(PPARα)基因显著下调(P<0.05),脂滴蛋白2(PLIN2)基因极显著上调(P<0.01)。FADS2基因干扰过后可引起AGPAT1、GPAM、ELOVL5、ACAA1、PLIN2和FADS1基因显著上调(P<0.05),脂肪酸合成胰岛素诱导基因1(INSIG1)极显著上调(P<0.01),DGAT1和PPARα基因显著下调(P<0.05)。甘油三酯检测结果显示,FADS2基因过表达和干扰均可降低奶牛乳腺上皮细胞中甘油三酯的含量。综上所述,在奶牛乳腺上皮细胞中,FADS2基因能调控脂质合成相关基因的表达,对乳腺脂质合成具有调控作用。     

Lipogenic gene expression in abdominal adipose and liver tissues of diet-induced overweight cats

The effect of overweight status on the expression of SREBP-1c and downstream lipogenic genes, such as ATP citrate lyase (ACL) and fatty acid synthase (FAS), in abdominal adipose and liver tissues was determined in cats using a diet-induced weight gain model. ACL and SREBP-1c mRNA expression was significantly reduced (～65% and 20%, respectively) in liver tissue, whereas FAS and SREBP-1c expression was significantly increased (～80% and 45%, respectively) in abdominal omental adipose tissue of overweight animals as compared to healthy animals. Additionally, ACL, FAS, and SREBP-1c expression was significantly reduced by ～50%, 75%, and 70%, respectively, in abdominal subcutaneous adipose tissue of overweight animals. Omental adipose tissue appeared to foster, whereas subcutaneous adipose and liver tissues appeared to defer lipid storage based on differences in SREBP-1c mRNA expression. Overall, reduced lipogenic gene mRNA expression patterns support the hypothesis that SREBP-1c expression is reduced in overweight and possibly obese cats, reflecting down-regulation of the lipogenic pathway to prevent further fat accumulation and weight gain.     

苜草素对产蛋后期蛋鸡抗氧化能力、脂质代谢及相关基因表达的影响

本试验旨在研究不同水平苜草素对产蛋后期蛋鸡抗氧化能力、脂质代谢及相关基因表达的影响。选用69周龄、健康海兰褐蛋鸡324只,随机分为3组,每组6个重复,每个重复18只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验组在基础饲粮的基础上添加500和1 000 mg/kg苜草素。试验预试期2周,正试期8周。结果表明,与对照组相比:1)试验组蛋鸡产蛋率显著升高(P0.05),料蛋比显著降低(P0.05)。2)500 mg/kg苜草素显著增加了蛋壳强度(P0.05),极显著降低了肝脏甘油三酯含量(P0.01),显著降低了肝脏总胆固醇含量(P0.05)。3)1 000mg/kg苜草素极显著提高了血浆谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总超氧化物歧化酶(T-SOD)及肝脏GSH-Px活性(P0.01),显著提高了血浆总抗氧化能力(T-AOC)、降低了丙二醛(MDA)的含量(P0.05),极显著降低了肝脏与蛋黄总胆固醇和甘油三酯含量(P0.01),极显著提高了肝脏硫氧还蛋白还原酶1(Trx R1)、胆固醇-7α羟化酶(CYP7A1)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)mRNA表达量(P0.01),极显著降低了3-羟基-3-甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGCR)mRNA表达量(P0.01),而对GSH-Px mRNA表达量无显著影响(P0.05)。由此可见,饲粮中添加苜草素可降低产蛋后期蛋鸡蛋黄胆固醇和甘油三酯含量,提高生产性能、蛋壳强度、机体抗氧化和胆固醇代谢能力,且以添加1 000 mg/kg苜草素效果较好。     

山羊DGAT1基因的克隆及对前体脂肪细胞脂质沉积的调控作用研究

旨在克隆山羊DGAT1基因序列,明确DGAT1基因在山羊不同组织中的表达模式,并进一步揭示过表达DGAT1基因对山羊肌内前体脂肪细胞脂质代谢的影响。本试验以10月龄健康简州大耳公羊（n=7）为试验动物。采用RT-PCR法克隆山羊DGAT1基因序列,并对序列进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR （real-time quantitative PCR,RT-qPCR）检测DGAT1在山羊不同组织中的相对表达水平;采用双酶切法构建pcDNA3.1-DGAT1真核表达载体并转染至山羊肌内前体脂肪细胞;使用RT-qPCR检测DGAT1过表达效率及脂质代谢相关基因的表达情况;通过油红O染色法观察过表达DGAT1对脂滴形成的影响,利用GPO-Trinder酶学反应检测甘油三酯含量。结果显示,获得山羊DGAT1基因序列全长1 651 bp （GenBank登录号：MT221183）,包含5'UTR 125 bp,CDS 1 470 bp,3'UTR 56 bp,编码489个氨基酸残基;山羊DGAT1基因在小肠中的表达量最高,在脾中表达量最低;RT-qPCR检测结果显示,DGAT1在细胞中过表达极显著（P<0.01）,GPAM基因的相对表达水平显著上调（P<0.05）,ADRP和ACOX1基因极显著上调（P<0.01）,而AGPAT6基因相对表达水平显著下调（P<0.05）,MLYCD和HSL基因极显著下调（P<0.01）;油红O染色结果显示,过表达DGAT1后脂滴聚积相较于对照组极显著增多（P<0.01）,甘油三酯测定结果显示,过表达DGAT1基因可极显著增加山羊肌内脂肪细胞甘油三酯含量（P<0.01）。本研究成功获得山羊DGAT1基因CDS区序列并构建了pcDNA3.1-DGAT1真核表达载体,过表达DGAT1可显著促进山羊肌内前体脂肪细胞脂质沉积,并显著影响脂质代谢相关基因的表达,这些结果为进一步阐明DGAT1对调控山羊肌内脂肪代谢的作用机制提供了重要数据。     

从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达研究

试验旨在探讨从江香猪肌内前体脂肪细胞分化过程中相关基因的表达。采集3日龄从江香猪背最长肌,采用Ⅱ型胶原酶消化法分离肌内前体脂肪细胞,进行原代和传代培养,并对其进行形态学观察。诱导培养后,利用油红O染色法对其进行鉴定。采用实时荧光定量PCR方法检测细胞诱导分化0、24、48、72和144 h时脂肪相关基因丙酮酸脱氢酶激4（PDK4）、成纤维细胞生长因子10（FGF10）、脂联素（ADIPOQ）、脂肪酸合成酶（FAS）、脂蛋白脂酶（LPL）、CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）、脂肪细胞脂肪酸结合蛋白4（FABP4）、蛋白激酶B（AKT2）的表达,选择诱导0 h作为对照组。结果显示,分离的肌内前体脂肪细胞5 h开始贴壁,贴壁的细胞呈圆形,胞体透明,经传代后,细胞形态均一,经诱导培养后,油红染色呈红色。实时荧光定量PCR结果显示,PDK4、ADIPOQ、C/EBPα、FAS、FABP4和AKT2基因mRNA表达水平在诱导48 h时均呈现较高表达,极显著高于其余各阶段（P<0.01）;FGF10基因mRNA表达水平在诱导24和48 h时均较高;LPL基因mRNA表达水平在诱导72 h时极显著高于对照组（P<0.01）,之后明显下降;PDK4、ADIPOQ和FGF10基因mRNA表达水平在诱导144 h时均极显著低于对照组（P<0.01）;C/EBPα基因mRNA表达水平在诱导144 h时显著高于对照组（P<0.05）;FAS基因mRNA表达水平在诱导144 h时显著低于对照组（P<0.05）;AKT2和LPL基因mRNA表达水平在诱导144 h时与对照组差异不显著（P>0.05）。本试验成功培养了从江香猪肌内前体脂肪细胞,并检测了不同诱导阶段脂肪相关基因的表达情况,为进一步研究从江香猪脂肪代谢和沉积提供参考依据。     

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。     

Effects of different levels of protein supplementary diet on gene expressions related to intramuscular deposition in early‐weaned yaks

This study was conducted to estimate different levels of protein supplementary diet on gene expressions related to intramuscular deposition in early‐weaned yaks. Results showed that supplementary dietary protein significantly increased final weight, average daily gain (ADG), intramuscular fat (IMF), serum free fatty acid (FFA), total triglycerides, total cholesterol (Ch), low‐density lipoprotein cholesterol (LDL) and high‐density lipoprotein cholesterol (HDL) content. There was a quadratic response of ADG, IMF, FFA, Ch, HDL and LDL to dietary crude protein (CP) level. Lipoprotein lipase (LPL), fatty acid synthase (FAS) and acetyl‐CoA carboxylase (ACC) enzyme activities were significantly increased by supplementary dietary CP, while hormone‐sensitive lipase (HSL) and carnitine palmitoyltransferase‐1 (CPT‐1) activities were significantly decreased. LPL, ACC and FAS enzyme activities showed quadratic increase as dietary CP increased. Peroxisome proliferator‐activated receptor γ (PPARγ), LPL, FAS, sterol regulatory element binding protein 1 (SREBP‐1), ACC, stearoyl‐CoA desaturase (SCD) and heart fatty‐acid binding protein (H‐FABP) gene expression were significantly increased by supplementary dietary CP, while HSL and CPT‐1 gene expression were significantly decreased. PPARγ, LPL, SREBP‐1, ACC and H‐FABP gene expression showed quadratic increase as dietary CP increased. These results indicated that supplementary dietary protein increased IMF accumulation mainly to increased intramuscular lipogenic gene expression and decreased lipolytic gene expression.     

Potential predictive biomarkers of obesity in Burmese cats

Australian Burmese cats are predisposed to diabetes mellitus and, compared to other breeds, have delayed triglyceride clearance that may result in subtle changes within cells and tissues that trigger specific alterations in gene expression within peripheral blood leucocytes (PBLs). Expression of genes involved in energy metabolism (glucose-6-phosphate dehydrogenase and malate dehydrogenase), lipogenesis (ATP citrate lyase [ACL], fatty acid synthase [FAS] and sterol regulatory binding protein-1c [SREBP-1c]), and insulin signalling (insulin receptor substrates 1 and 2, and phosphatidylinositol-3 kinase), as well as cholesterol lipoprotein subfraction profiling were carried out on PBLs from lean Burmese cats and compared with similar profiles of age and gender matched lean and obese Australian domestic shorthaired cats (DSHs) in an attempt to identify possible biomarkers for assessing obesity.For the majority of the genes examined, the lean Burmese cats demonstrated similar PBL gene expression patterns as age and gender matched obese Australian DSH cats. Lean Burmese had increased expression of ACL and FAS, but not SREBP-1c, a main upstream regulator of lipid synthesis, suggesting possible aberrations in lipogenesis. Moreover, lean Burmese displayed a 3- to 4-fold increase in the very low density cholesterol fraction percentage, which was double that for obese DSH cats, indicating an increased degree of lipid dysregulation especially in relation to triglycerides. The findings suggest that Burmese cats may have a particular propensity for dysregulation in lipid metabolism.     

长期饲喂不同蛋白质水平饲粮对猪脂肪代谢相关基因表达的影响

本试验旨在研究长期饲喂不同蛋白质水平饲粮对猪脂肪代谢相关基因表达的影响。试验选用18头三元(杜×长×大)杂交28日龄断奶仔猪,随机分为3组,每组6个重复,每个重复1头。对照组[高粗蛋白质(HCP)组]采用符合NRC(2012)推荐营养需要的饲粮,试验组是根据NRC(2012)标准,在添加赖氨酸(Lys)、蛋氨酸(Met)、苏氨酸(Thr)、色氨酸(Try)4种必需氨基酸基础上,将饲粮蛋白质水平分别降低3%[中粗蛋白质(MCP)组]和6%[低粗蛋白质(LCP)组]。试验期125 d。结果表明:1)在肝脏中,与HCP组相比,LCP组显著降低脂肪酸合成相关基因乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)、苹果酸酶1(ME1)及锚蛋白1(ANK1)的基因表达量(P0.05);同时显著提高脂肪酸转运相关基因过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)及脂肪酸结合蛋白(FABP)的基因表达量(P0.05);而MCP组与HCP组相比,脂肪酸合成、转运相关基因表达量均无显著性差异(P0.05);与HCP组相比,MCP及LCP组均显著降低脂肪酸氧化分解相关基因、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)、肉毒碱棕榈酰转移酶(CPT)的基因表达量(P0.05)。2)在背最长肌(LDM)中,MCP组中脂肪酸合成相关基因胆固醇调节元件结合蛋白(SREBP)、FAS、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD)的基因表达量显著高于其他2组(P0.05);ACC及FABP在LCP组的基因表达量显著低于其他2组(P0.05);CPT基因表达量及LDM的肌内脂肪(IM F)含量在LCP及M CP组显著低于HCP组(P0.05)。3)肝脏和LDM中,各组甘油三酯脂酶(ATG L)及二烯酰辅酶A还原酶(DECR)基因表达量均无显著性差异(P0.05)。由此可见,在NRC(2012)基础上,适当的降低饲粮蛋白质水平(3%)可促进LDM中脂肪酸合成、转运相关基因的表达,但对肝脏中脂肪酸合成相关基因的表达无显著影响;适当的降低饲粮蛋白质水平(3%)可降低LDM及肝脏中脂肪酸氧化分解相关基因的表达,但并不增加LDM肌内脂肪含量。     

DHA对高脂饲粮诱导肝脏脂肪积累的预防作用

【目的】探索二十二碳六烯酸(DHA)对高脂饲粮诱导肝脏脂肪积累的预防机制。【方法】将32只雄性SPF级C57BL/6小鼠均分为4组,对照组(Con)饲喂普通饲粮,模型组(Model)饲喂高脂饲粮,DHA组分别在高脂饲粮中添加0.2 g DHA(DHAL)和1.0 g DHA(DHAH),饲喂周期为20周。饲喂期间每天称量体重及食物重量,计算摄食量;饲喂结束,采集肝脏和血液,ELISA法检测肝脏脂联素和血清甘油三酯(TG)的含量,实时荧光定量PCR检测新生脂肪合成关键酶(SREBP-1c、FAS)、脂肪酸氧化关键基因(PPARα、PPARγ、CPT-1A和ACOX)、线粒体基因(PGC-1α)、褐色脂肪化基因(Prdm16、UCP1)的表达,Western blotting法检测肝脏磷酸化ACC、AMPK和AKT蛋白的表达。【结果】与Con组相比,Model组终体重、体脂重量和TG含量均显著增加(P<0.05),肝脏脂联素浓度显著降低(P<0.05)。与Model组相比,DHAL和DHAH组终体重、体脂重量和TG含量均显著降低(P<0.05),肝脏脂联素水平显著增加(P...     

氨氮胁迫下饥饿与复投喂对黄颡鱼肝脏中脂质代谢相关酶活性及相关基因表达的影响

为了研究氨氮胁迫下饥饿与复投喂对黄颡鱼脂质代谢的影响,将360尾黄颡鱼幼鱼[初始体重为(14.95±0.03)g]随机分配到12个养殖桶中,每桶30尾.对照组人工饱食投喂42 d,试验组饥饿14 d后恢复投喂28 d.对照组和试验组分别被暴露到总氨氮浓度为0(低氨氮处理,正常养殖环境)和5.70 mg/L(高氨氮处理,...     

牦牛不同组织SREBP-1基因表达差异分析

在不同季节分别采集青海省祁连县、大通县和湟中县牦牛的肝脏、肾脏和结肠,提取Total RNA,在逆转录聚合酶的作用下生成cDNA,利用Real-time PCR检测牦牛甾醇类调控元件结合蛋白1(SREBP-1)基因mRNA的表达水平。结果显示,牦牛不同组织中SREBP-1基因相对表达量由大到小顺序为,肝脏、肾脏、结肠。SREBP-1基因在不同季节中除了2016年春季的牦牛,其他的均以肝脏样品中的SREBP-1 mRNA相对定量拷贝数最高。不同季节间SREBP-1基因在2015年春季和2016年春季中相对表达量差异极显著。3个组织间SREBP-1基因在结肠和肝脏中相对表达量差异呈极显著(P<0.01),在肾脏和肝脏中相对表达量差异显著(P<0.05)。     

ADCY2基因表达对延边黄牛脂肪前体细胞成脂分化的影响

本试验旨在研究环腺苷酸（3',5'-cyclic adenosine monophosphote,cAMP）环化酶合成酶2（adenylyl cyclase 2,ADCY2）基因对延边黄牛脂肪前体细胞成脂分化的影响。选取3日龄的延边黄牛腹股沟皮下脂肪组织进行脂肪前体细胞的分离、培养和诱导分化;设计ADCY2基因的干扰片段（siADCY2-1、2、3）,构建pEX4过表达载体;分别收集正常诱导（对照组）、干扰和过表达0、5和10 d的脂肪细胞。用实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖激活物受体（PPARγ）、CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）和ADCY2在细胞分化过程中mRNA的转录水平,并用Western blotting法检测其蛋白的表达;用油红O染色检测脂滴含量的变化;用甘油三酯试剂盒检测甘油三酯含量。试验结果表明,在成脂分化过程中,与未分化相比,ADCY2基因在分化的第5和10天表达量均极显著上升（P<0.01）,而分化第10天与第5天相比水平极显著下降（P<0.01）;siADCY2-1干扰效率最高,过表达ADCY2基因使其mRNA水平升高;与对照组相比,过表达组细胞内ADCY2基因mRNA水平提高了约4 000 000倍,脂肪细胞内脂滴含量和甘油三酯的含量极显著提高（P<0.01）,成脂关键基因C/EBPα和PPARγ表达极显著上调（P<0.01）,而RNA干扰组细胞内ADCY2基因mRNA水平极显著降低（P<0.01）,脂肪细胞内脂滴含量和甘油三酯的含量极显著下降,成脂关键基因C/EBPα和PPARγ表达极显著下调（P<0.01）。因此,ADCY2基因过表达能显著增加成熟脂肪细胞的脂滴含量及甘油三酯含量,促进成脂关键基因C/EBPα和PPARγ的表达,说明ADCY2基因对脂肪细胞分化具有正向调控作用。