肉鸡鸡胚肝脏中脂滴的发育研究

为了探索鸡胚肝脏脂滴的发育规律,选取120枚受精蛋,分别在孵化的第7~21天（E7~E21）每天随机选取6枚蛋,收集鸡胚,采集鸡胚肝脏,采用冰冻切片、苏丹Ⅲ染色观察鸡胚肝脏脂滴的形成和发育特点。结果发现：①鸡胚发育到E9胚龄,肝细胞内开始出现脂滴,且随着胚龄增加,脂滴的数量不断增多,脂滴的大小不断增大;②E18胚龄以前,肝脏脂滴的分布从中央静脉开始沿肝索到肝小叶边缘数量逐渐减少,E18胚龄以后,肝脏边缘脂滴数量较肝脏中央的多;③肝脏脂滴的发育分为E9~E14、E15~E17和E18~E21 3个阶段,而且后一个阶段脂滴的数量和体积均显著大于前一个阶段（P<0.05）,脂滴的平均大小在E9~E14、E15~E17和E18~E21 3个阶段分别为3.2、5.7和10.8 μm,平均数量分别为67、327、397个/mm²。以上结果表明,随着鸡胚的发育,肝细胞内脂滴数量增加、体积变大。     

肉鸡胚胎发育过程中肝脏的组织学观察

肝脏是家禽体内最大的消化腺,其发生发育与功能的行使紧密相连。本研究从组织学的角度观察肉鸡肝脏组织在胚胎发育过程中的特点,并比较高、低脂系间肝脏组织在发育过程中的区别。结果发现,肝叶体积随日龄的增长而增加;胚胎发育至12日龄时肝小叶结构基本发育完整;在胚胎发育后期,肝细胞内脂滴明显增加,且肝叶周边的肝细胞较肝叶中心的肝细胞增殖活动旺盛。而在整个胚胎发育过程中,两系间肝细胞内脂滴沉积并没有明显的区别。     

Research Progress on Metabolic Related Structural Proteins in Lipid Droplet Development

Generally, lipid droplets are storage of triglycerides in adipocytes, but recent researches indicate that the transport, storage and steatolysis mobilization of fat in the cells are all based on lipid droplets, various phenomena reveal that lipid droplets is not only a simple energy storage in cells, but also more of a multifunctional organelle. By analyzing the structure of lipid droplets, it has been found that with neutral fat as the core, lipid droplets are covered with single phospholipid and embedded with a variety of functional proteins, which are referred as lipid droplets associated proteins. Lipid droplets associated protein correlated with lipid droplets are involved in the regulation of lipid metabolism, membrane transport, signal transduction and other physiological processes in different forms. It can be divided into three categories according to the different bearing capacity of proteins, including lipid droplet structural protein, lipid droplet associated protein and lipid transport protein. Among them, structural proteins, such as proteins in the PAT family and CIDE family proteins, play important roles in the regulation of lipid droplet growth and metabolism.In addition, hormone-sensitive lipase, adipose triglyceride lipase and Rab protein, as well as other metabolism and transport proteins are suggested to be involved in lipid droplets development through different forms. At present, new types and mechanisms of lipid droplets related proteins are still being explored. This review is to address the research progress of lipid droplets, lipid metabolism and lipid droplets related proteins in cells.     

脂滴发育中代谢相关的结构蛋白研究进展

一般认为脂滴是脂肪细胞中甘油三酯的贮存器,但近来研究发现细胞中脂肪的运输贮存与动员分解都是以脂滴为核心完成的,种种现象揭示了脂滴在细胞内并不仅仅是一个简单的能量贮存器,而更多地扮演着一个多功能细胞器的角色。通过对脂滴结构进行分析发现,脂滴以中性脂肪为核心,表面覆盖单层磷脂结构并镶嵌多种功能蛋白,即脂滴相关蛋白。脂滴相关蛋白以不同形式协同脂滴参与调控脂代谢、膜转运及信号转导等多个生理过程。根据蛋白承载功能的不同,可大致将其分为三大类：脂滴结构蛋白、脂滴代谢相关蛋白与脂滴转运蛋白。其中,结构蛋白如PAT家族蛋白、CIDE家族蛋白等在脂滴发育代谢的调控与信息传递介导中发挥着重要作用,此外,还有激素敏感脂肪酶、脂肪甘油三酯水解酶与Rab蛋白等代谢与转运蛋白通过不同形式参与脂滴发育。目前,脂滴相关蛋白新种类与具体作用机制仍在不断探索中。作者就细胞中脂滴与脂代谢及脂滴相关蛋白的研究进展做一综述。     

哺乳期补饲精氨酸对断奶仔猪肝脏脂代谢功能的影响

本文旨在研究哺乳期补饲精氨酸对断奶仔猪肝脏脂代谢功能的影响。试验成对选取7日龄体重相近40头哺乳仔猪,分为对照组(CON组)和精氨酸组(Arg组),每组20头猪(公母各占1/2)。7日龄起,在自然哺乳的同时,CON组仔猪每日灌服生理盐水40 mL,Arg组每日灌服精氨酸40 mL[250 mg/(kg·d]。在21日龄时,仔猪断奶并饲喂基础饲粮。每组在断奶当天(21日龄)和断奶后第3天(24日龄)每次随机挑选8头仔猪(公母各占1/2)屠宰并采取肝脏。结果表明:1)断奶后第3天,仔猪的体重与肝脏重均极显著低于断奶当天(P<0.01);与CON组相比,断奶后第3天,Arg组仔猪肝脏指数极显著提高(P<0.01)。2)与CON组相比,Arg组仔猪肝细胞粒径极显著提高(P<0.01),肝细胞面积显著提高(P<0.05)。3)断奶后第3天,仔猪肝脏中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量极显著高于断奶当天(P<0.01);断奶当天,Arg组仔猪肝脏中高密度脂蛋白胆固醇(HDL⁃C)含量显著高于CON组(P<0.05),低密度脂蛋白胆固醇(LDL⁃C)含量极显著低于CON组(P<0.01)。4)与CON组相比,断奶当天,Arg组仔猪肝脏中脂蛋白脂肪酶(LPL)基因相对表达水平显著提高(P<0.05)。由此可得,哺乳期补饲精氨酸能够促进断奶仔猪肝脏发育,提高肝脏中HDL⁃C含量,降低肝脏中LDL⁃C含量,提高肝脏中LPL基因的表达水平,进而提高断奶仔猪肝脏脂代谢的功能。     

初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响

本试验旨在研究初生重对新生梅山仔猪肝脏发育和脂代谢的影响。选取正常初生重(NBW)和低初生重(LBW)新生梅山仔猪各6头,不喂食母乳,出生6h内颈动脉放血致死。取仔猪血液测定血浆脂代谢指标,屠宰取样测定肝脏器官指数、肝脏脂代谢指标及相关基因的表达。结果表明:与NBW组相比,LBW组新生梅山仔猪的肝脏细胞粒径和面积极显著降低(P<0.01);血浆总胆固醇(TC)含量极显著升高(P<0.01),血浆低密度脂蛋白(LDL)含量显著升高(P<0.05),血浆甘油三酯(TG)含量极显著降低(P<0.01);肝脏TC含量显著降低(P<0.05),肝脏TG含量和脂蛋白脂酶(LPL)活性极显著降低(P<0.01),肝脏肝脂酶(HL)活性呈下降趋势(P=0.086);肝脏脂肪酸合成酶(FAS)和LPL的基因表达量极显著降低(P<0.01),肝脏激素敏感脂肪酶(HSL)的基因表达量显著降低(P<0.05)。上述结果显示,LBW会抑制新生梅山仔猪的肝脏发育,降低脂代谢功能。     

组学技术分析肉鸡胚胎发育过程中肝脏蛋白表达的变化

旨在探讨肉鸡胚胎在发育中后期肝脏蛋白水平的变化。本试验选取120枚重量为（65±0.2）g的罗氏308肉鸡种蛋,分为14胚龄（E14）和出壳1日龄（H1）两组,每组3个重复,每个重复20枚种蛋。孵化至E14胚龄和H1日龄时,采集肝脏组织样本,应用相对和绝对定量的等量异位标签（isobaric tags for relative and absolute quantitation,iTRAQ）结合生物信息学分析技术筛选核心差异蛋白。结果显示,在E14和H1日龄之间共筛选出10个核心差异蛋白,主要促进脂肪酸降解（上调ACOX1、ACSL1、ACSL5、CPT1A和ECI2）和糖异生（上调ALDH3A2、FBP1、FBP2、GPI和PGM2,下调LDHB和ALDH9A1）。试验结果提示,胚胎发育的主要能量供给途径是脂肪酸降解,而不是糖酵解。此外,糖异生增多,促进糖原储存以应对出壳以及营养环境变化。     

Starvation Caused Lipid Droplet Remodeling in Adipogenic Differentiation C2C12 Cells

This study was aimed to explore the effect of short-term starvation treatment on the growth and development of lipid droplets in adipogenic differentiation C2C12 cells,provide the foundation for the interpretation and utilization of compensatory growth mechanisms.Adipogenic differentiation C2C12 cells were divided into two groups:Control group,high glucose treatment for 24 h,and starvation treatment group (FAST),serum-free and low-glucose medium starvation treatment for 24 h.The morphological changes of lipid droplets was observed by BODIPY staining and triglyceride determination,and Western blotting was used to determine the change of the expression level of perilipin family protein (perilipin 1-5) on the lipid droplet.The results showed that C2C12 cells induced adipogenesis for 12 days,which could make the cells reach a better fat-filling state.After treatment with serum-free and low-glucose starvation,the levels of triglycerides in adipogenic differentiation C2C12 cells decreased extremely significantly (P<0.01),the size of lipid droplets decreased extremely significantly (P<0.01),and the number of lipid droplets increased extremely significantly (P<0.01).The perilipin protein on the lipid droplets was changed,the expression level of perilipin2 and perilipin5 were extremely significantly up-regulated (P<0.01),and the expression level of perilipin3 was significantly up-regulated (P<0.05).In summary,serum-free and low-glucose starvation could induce the remodeling of lipid droplets and change the expression level of perilipin proteins on the lipid droplets.     

饥饿诱发成脂分化C2C12细胞中脂滴形态重塑

试验旨在探究短期饥饿处理对成脂分化C2C12细胞中脂滴生长发育的影响,为阐释及利用补偿生长机制奠定基础。通过胰岛素等激素混合物诱导C2C12细胞成脂分化,将成脂分化12 d的C2C12细胞分为两组：对照组（Control）,高糖培养24 h;饥饿处理组（FAST）,无血清低糖培养24 h。通过BODIPY染色和甘油三酯测定观察脂滴形态变化,并使用Western blotting方法测定脂滴表面结构蛋白perilipin1-5表达量的变化。结果显示,C2C12细胞成脂诱导12 d,可以使细胞达到较好的充脂状态。通过无血清低糖饥饿处理后,成脂分化C2C12细胞中甘油三酯含量极显著下降（P<0.01）;脂滴平均尺寸极显著减小（P<0.01）,脂滴平均数量极显著增多（P<0.01）;脂滴表面结构蛋白出现变化,perilipin2、perilipin5表达极显著上调（P<0.01）、perilipin3表达显著上调（P<0.05）。综上,无血清低糖处理可以诱发脂滴形态重塑,改变脂滴表面结构蛋白的表达。     

新生仔猪肝脏发育的肝细胞生化分析

选择新生仔猪15头，分别于出生当日(0 d)、出生后3d及7d屠宰取样，制作肝脏电镜切片进行组织学分析，并测定肝脏中DNA、RNA含量及常规生化指标。结果显示：新生仔猪肝细胞中内质网、线粒体等细胞器都很丰富，而且各细胞器的结构已经发育成熟。肝脏质量在仔猪出生后1周尤其是3d内迅速增加(P＜O．01)，远远快于体重增加的速度。仔猪肝脏的蛋白质含量在生后1周也迅速增加(P＜O．01)；而肝糖原贮备在刚出生时较高，出生后迅速下降(P＜O．01)。仔猪出生后肝脏中DNA和RNA浓度的变化趋势正好相反，前者在出生后3d内明显下降(P＜O．05)，4～7d又有增加趋势，而RNA浓度以3d为最高。试验结果表明，仔猪到出生时肝细胞的结构和功能基本发育成熟。仔猪出生以后，肝脏的生长发育十分迅速，不仅肝细胞的数量快速增加，肝细胞的体积也不断增大。     

纳米硒对肉鸡肝脏硒含量和抗氧化能力的影响

试验选用1日龄艾维茵(Avian)肉鸡225只,随机分为5个处理组,每组设3个重复,研究纳米硒对肉鸡肝脏硒含量和抗氧化能力的影响。在玉米-豆粕型日粮基础上添加纳米硒0、0.15、0.3、0.6、1.2mg/kg,基础日粮组为对照组,试验期6周。结果表明:42日龄时,日粮中添加纳米硒显著提高了肝脏总抗氧化能力、谷胱甘肽过氧化物酶活力、总超氧化物歧化酶活力、抑制羟自由基能力(P<0.05),显著降低了肝脏丙二醛含量、一氧化氮含量(P<0.05),极显著提高了肝脏硒含量(P<0.01)。而且随日粮中纳米硒添加量的增加,肝脏抗氧化能力和硒含量均呈二次曲线关系。因此,肉鸡日粮中纳米硒的适宜添加水平为0.7～1.0mg/kg。     

甘氨酰谷氨酰胺二肽对黄羽肉鸡肝脏脂肪代谢的影响及其机制的研究

选择360只1日龄优质黄羽肉鸡,随机分为4组,分别饮用凉开水配制的浓度为0、0．01、0．05和0．10mg／L的甘氨酰谷氨酰胺（Gly—Gin）二肽溶液,连续饮用41d。用甘油三酯试剂盒测定肝脏总甘油三酯的含量。采用相对定量RT—PCR的方法来检测ACC（acetyl—CoAcarboxylase）和PPAR0a（peroxisomeproliferator—activatedreceptorsa）mRNA的表达水平。试验结果表明：①Glv—Gln二肽能够呈现剂量依赖性的降低肝脏4CCmRNA的表达水平,0．10mg／LGly—Gin二肽处理组较对照组差异显著（P〈0．05）。②Glv—Gln二肽能够显著上调只附R仅基因mRNA的表达水平,其中0．05mg／LGly—Gln二肽处理组较对照组差异显著（P〈0．05）。③Gly—Gln二肽具有提高肝脏甘油三酯含量的趋势,但差异不显著（P〉0．05）。以上结果提示,Glv—Gln二肽能够通过降低肝脏甘油三酯的合成,促进代谢,从而减少脂肪沉积水平。     

肉种鸡饲养方式对子代胚肝蛋白表达谱的影响

挑选40周龄体况良好的产蛋三黄肉种鸡200只,随机分为对照组(笼养)和试验组(平养),饲喂相同的肉种鸡日粮.收集受精种蛋各300枚并孵化,分别取9、14、19胚龄和出壳时的肝脏,经2D-PAGE分离后,对经胶体考马斯亮蓝G-250染色的图像用PDquest7.3软件进行差异表达分析,取差异表达的蛋白质斑点进行胶内酶切和MALDI-TOF-MS分析.结果表明,试验组和对照组在9、14和19胚龄时,胚质量和肝质量均无显著差异;出壳时,试验组胚质量、肝质量均显著小于对照组(P<0.05).蛋白表达谱分析发现29个在试验组和对照组间表达量存在两倍以上差异的蛋白斑点,其中22个得到鉴定.在这些被鉴定的蛋白中,大多涉及到机体内基础代谢的酶、能量产生及信号传导等.     

Total lipid and triacylglycerol contents in the liver of broiler and layer chickens at embryonic stages and hatching

To compare the hepatic function of broiler and layer chickens (Gallus gallus domesticus) at various embryonic stages and hatching, the total lipid and triacylglycerol (TG) content were determined. The chicken embryos accumulated a large amount of lipids in the liver and the total lipid content gradually increased toward hatching, though no significant difference was observed between broilers and layers. The TG contents in the liver increased considerably with developmental stage. At embryonic day 14 the TG content in the liver was similar between broilers and layers; thereafter, it was 1.3 and 2.2 times higher in broilers than in layers at embryonic day 18 and for newly hatched chicks, respectively. Chick embryos accumulate an excessive amount of cholesterol ester in the liver, but cholesterol ester is replaced by TG after hatching. The results of hepatic TG contents in the present study suggest that the development of the hepatic function between broilers and layers may already differ at embryonic stages.     

1例肉鸡肝恶性黑色素瘤的病理学诊断

本研究旨在对临床上发现的1例肉鸡肝黑色素瘤进行病理学诊断。1羽25日龄AA肉鸡精神沉郁、极度消瘦,剖检发现其整个肝呈黑色。HE染色结果显示,病变肝内遍布大小不一、细胞核深染、细胞质内有大量黑色素颗粒沉积的异常细胞团。黑色素瘤诊断标志蛋白SOX 10和HMB-45抗体免疫组化染色均呈阳性。结合病理学检测和免疫组化结果,判定该病鸡肝患有恶性黑色素瘤。试验对病变肝进行胆色素染色和普鲁士蓝染色,结果均呈阴性,提示病变肝并非由胆红素或含铁血黄素淤积所致。综上表明,此例病鸡患有严重的肝恶性黑色素瘤,试验结果对禽类黑色素瘤的诊断与研究有参考价值。     

不同脂肪源对肉仔鸡肝脏中脂肪代谢相关基因表达的影响

本试验运用牛油、豆油、鱼油三种脂肪酸组成不同的脂肪源设计日粮 ,因而其对肉仔鸡肝脏中FAS、ACC、HMG -COA还原酶基因的mRNA的表达量的影响也存在差异。结果表明富含PUFA的鱼油相对其它脂肪源对此三种基因表达的抑制作用最为明显。运用RT -PCR定量的三种基因的mRNA的量分别比牛油组下降了 5 0 .35 %、4 0 .35 %和81.4 9% ,差异显著 (P <0 .0 5 )。而豆油组中此三种基因的表达相对牛油组下降了 1.4 8%、2 0 .6 9%、2 4 .5 3% ,其抑制效果不如鱼油。     

胰岛素对雏鸡肝脏发育及其超微结构的影响

为研究胰岛素对雏鸡肝脏发育及其超微结构的影响,16只体重相近的雏鸡被随机分为两组,试验组每天定时腹腔注射生理剂量胰岛素,对照组腹腔注射等剂量的生理盐水.连续注射10 d后称重,取样并制片,分析肝体比并利用透射电镜对肝脏的超微结构变化进行观察.结果表明:与对照组相比,试验组雏鸡的体重、肝脏重和肝体比没有明显变化,但其肝脏的线粒体数量明显增加.提示生理剂量胰岛素可以刺激肝细胞线粒体的发生,进而促进肝脏的代谢作用.     

血浆极低密度脂蛋白浓度的双向选择对肉鸡腹脂、肝脂和产肉性能的影响

对零世代８周龄血浆极低密度脂蛋白（ＶＬＤＬ）浓度进行降低腹脂的间接选择，一世代取得了明显效果：腹脂和肝脂向两极分化，其中肌胃脂和肝脂选择反应较大。低血浆ＶＬＤＬ的选择使腹脂降低，肝脂增加，对产肉性状未产生不利影响。９周龄腹脂率、板油率和肌胃脂率在高ＶＬＤＬ系分别高于低ＶＬＤＬ系２１％，１６％和５１％；肌胃脂率品系间差异极显著（Ｐ＜０．００１）。品系与性别互作对肌胃脂率有明显影响（Ｐ＜０．０５）。腹脂、肌胃脂存在性别差异，腹脂率雌性略高于雄性，而肌胃脂率雄性高于雌性。９周龄肝脂率，高ＶＬＤＬ系显著低于低ＶＬＤＬ系（Ｐ＜０．０１），雌性高于雄性。一世代８周龄血浆ＶＬＤＬ产生了直接选择反应，血浆ＶＬＤＬ浓度，高ＶＬＤＬ系高于低ＶＬＤＬ系。血浆ＶＬＤＬ存在性别差异，雄性高于雌性。一世代高、低ＶＬＤＬ系血浆ＶＬＤＬ和腹脂的变异系数仍然很大，继续对其选择仍然有效。由于血浆ＶＬＤＬ属中等遗传力，并且家系间差异显著，因此，在世代选育中应采取家系结合个体选择法     

游泳应激对小鼠血液和肝脏脂质过氧化水平的影响

为探讨游泳应激对小鼠血液和肝脏脂质过氧化水平的影响,试验选取50只昆明小鼠进行游泳试验,于游泳前和游泳10、20、30、50min后分别随机选取10只小鼠眼眶采血致死,采集血液和肝脏,测定样品中MDA含量、SOD和GSH-Px活性。结果表明,游泳应激使小鼠血清MDA含量持续升高并显著高于游泳前对照组(P<0.05);SOD活性先显著下降(P<0.05),之后缓慢升高,游泳50min后仍显著低于对照组(P<0.05);10min游泳应激使小鼠血清GSH-Px活性显著上升(P<0.05),之后缓慢下降,50min后与对照组无显著差异。游泳应激使小鼠肝脏MDA含量显著升高(P<0.05),游泳50min后肝脏SOD活性显著升高(P<0.05),GSH-Px活性在游泳20、30、50min后均显著下降(P<0.05)。结果提示游泳应激能显著影响小鼠血液和肝脏组织脂质过氧化水平。     

饲粮中添加泛酸对生长獭兔肝脏脂肪代谢的影响

本试验旨在研究饲粮中添加泛酸对生长獭兔肝脏脂肪代谢的影响。试验选用体重相似的断奶獭兔160只,随机分为4组,每组40个重复,每个重复1只。对照组獭兔饲喂基础饲粮,试验组獭兔分别饲喂在基础饲粮中添加10、20和40 mg/kg泛酸的饲粮。预试期7 d,正试期56 d。结果表明:与对照组相比,饲粮中添加40 mg/kg泛酸显著降低了生长獭兔肩胛、胃周和肾周脂肪沉积率(P0.05);饲粮中添加10~20 mg/kg泛酸显著降低了生长獭兔肝脏中脂滴的含量(P0.05)。饲粮中泛酸添加水平对生长獭兔血浆中总胆固醇和白蛋白的含量无显著影响(P0.05);随着饲粮中泛酸添加水平的升高,生长獭兔血浆中甘油三酯的含量先降低后趋于稳定,20、40 mg/kg添加组显著低于对照组(P0.05);与对照组相比,饲粮中添加20~40 mg/kg泛酸显著升高了生长獭兔血浆中极低密度脂蛋白的含量(P0.05)。与对照组相比,饲粮中添加40 mg/kg泛酸显著增加了肝脏中激素敏感脂酶(HSL)和骨骼肌中脂肪酸转运蛋白(FATP)基因的表达量(P0.05);饲粮中添加20~40 mg/kg泛酸显著增加了肝脏中肉毒碱棕榈酰转移酶1(CPT1)基因的表达量(P0.05);饲粮中添加10~40 mg/kg泛酸显著增加了肝脏中脂肪酸合成酶(FAS)基因和骨骼肌中CPT1基因的表达量(P0.05)。综上所述,饲粮中添加泛酸影响生长獭兔肝脏内脂肪代谢,泛酸添加水平为40 mg/kg时可降低肝脏内脂肪的沉积,并能降低机体脂肪沉积率,增加骨骼肌对脂肪酸的摄取和利用。