菌落突变株与细菌适应性生存关系研究进展

小菌落突变株（small colony variants,SCVs）是细菌正常生长周期中的一种细菌亚群,它在各种不利条件下可被选择出现。其生化特征表现为生长缓慢、菌落形态不规则、生化特性异常,这使得SCVs的分离鉴定较困难。临床上,SCVs可引起慢性持续性感染,而不引起宿主强烈的免疫反应,且对抗菌药物产生严重的耐药性。文章对SCVs在临床上的表型分类、与宿主免疫反应的关系及抗菌药物对其影响进行综述,以期为SCVs的深入研究提供理论支持。     

Estabishment of Mastitis Model in Mouse by Artificial Infection of Staphylococcus aureus Small Colony Variants

In order to establish the mouse mastitis model induced by Staphylococcus aureus small colony variants (SCVs),40 BALB/c mice 6 to 8 days postpartum were randomly divided into eight groups,negative control group,physiologic saline group and six treated groups with different doses (1.0×10³,1.0×10⁴ and 1.0×10⁵ CFU/mL) of Staphylococcus aureus SCVs or Staphylococcus aureus quality control strains.50 μL physiologic saline and Staphylococcus aureus liquid were injected into the forth mammary glands in physiologic saline group and the six treated groups,respectively.All the mice were sacrificed 24 h after treatment.One side of the forth mammary glands was used to make pathological section,the other side was used to detect the concentration of TNF-α in the supernatant.The results showed that mice had different degrees of clinical symptoms in the treated groups,their mammary glands appeared different degrees of inflammatory symptoms and pathological changes.Under the same injected dose,the Staphylococcus aureus quality control strains group pathologic changed more severe than the Staphylococcus aureus SCVs group.The experimental data had been statistically analyzed by using SPSS software,the result showed that the expression of TNF-α of the Staphylococcus aureus quality control strains group were extremely significantly higher than that of Staphylococcus aureus SCVs group with high dose (P<0.01).The results indicated that Staphylococcus aureus and its SCVs could be used to establish the mice mastitis model,and Staphylococcus aureus SCVs caused relatively minor inflammation than the normal strains.The results provided a new research materials and meaningful exploration to research the prevention and control of chronic mastitis cows and its pathogenic mechanism caused by Staphylococcus aureus SCVs,and laid the foundation for studying the deeper relationship between Staphylococcus aureus SCVs and chronic mastitis.     

金黄色葡萄球菌小菌落突变株感染小鼠乳房炎模型的建立

为了建立由金黄色葡萄球菌小菌落突变株(small colony variants,SCVs)诱发感染乳房炎动物模型,本试验取40只分娩6~8 d的BALB/c小鼠,随机分成8组(n=5),分别为阴性对照、生理盐水组和不同剂量金黄色葡萄球菌SCVs及金黄色葡萄球菌质控菌株(1.0×10³、1.0×10⁴、1.0×10⁵ CFU/mL)试验组,对生理盐水组及各试验组小鼠第4对乳腺注射生理盐水和对应剂量的菌液(50 mL/只),注射后24 h解剖观察病理变化,一侧乳头制作石蜡切片,另一侧研磨后用ELISA检测试剂盒检测组织匀浆上清中的TNF-α含量。结果显示,注射菌液的试验组,小鼠均出现不同程度的临床症状,乳腺出现不同程度的炎性症状和病理变化。同一注射剂量下,金黄色葡萄球菌质控菌株较金黄色葡萄球菌 SCVs病理变化严重,通过SPSS等软件对试验数据进行统计分析后得出,高浓度处理组金黄色葡萄球菌质控菌株的TNF-α表达量极显著高于金黄色葡萄球菌SCVs(P<0.01)。结果表明,金黄色葡萄球菌及其SCVs均可用来建立小鼠乳房炎模型,且金黄色葡萄球菌SCVs引起的情况较其正常株轻微,这一结果为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究提供了新的材料和有益的探索,为SCVs与慢性乳房炎更深层次关系的研究奠定基础。     

Study on Infection of Staphylococcus aureus Small Colony Variants on Mammary Epithelial Cells in Vitro

In order to study the situation of S. aureus small colony variants (SASCVs) and the normal strains hitting the mammary epithelial cells of primary culture, we observed and compared the degree of damage to the cellular structure and the effects on mammary epithelial cells. This test was carried out with a strain of SASCV which was separated by Yunnan Agricultural University Animal Medical Experimental Teaching Center Laboratory via infecting mice mammary epithelial cells in vitro. We put the SASCVs and quality control strains ATCC 25923 respectively into the mammary epithelial cells cultivated in vitro in the laboratory, and observed the morphological change of mammary epithelial cell apoptosis induced by quality control strains ATCC 25923 and SASCVs using ordinary light microscope and scanning electron microscope; At the same time, we also observed the mammary gland epithelial cells apoptosis induced by quality control strains ATCC 25923 and SASCVs using flow cytometry (Annexin V-FITC/PI double staining). The results showed that 3 h after quality control strains and small colony mutant strains infecting the mammary epithelial cells, the mammary epithelial cells could be induced to apoptosis. It showed some typical characteristics of apoptosis such as the nucleus shrivelled, chromatin marginalized, mammary gland epithelial cells could be induced apoptosis, expression was shrinking nucleus, chromatin marginalized, the increase of cell intracytoplasmic vacuoles and so on. After testing using the Annexin V-FITC/PI double staining, we found that compared with the control group, the apoptosis rate of infection group was obviously higher, and the apoptosis rate of the positive control group was obviously higher than that of the experimental group. The results showed that in the process of infecting cells, the SASCVs reached a certain number and then stopped; The apoptosis rate of SASCVs was obviously lower than the normal of S.aureus. Therefore, SASCVs could also induce mammary epithelial cells apoptosis. It had the typical morphological characteristics of apoptosis. It provided experimental basis for the prevention and control of SASCVs chronic mastitis cows.     

金黄色葡萄球菌小菌落突变株体外感染乳腺上皮细胞的研究

为研究金黄色葡萄球菌小菌落突变株(S.aureus small colony variants,SASCVs)与正常株对原代培养的乳腺上皮细胞的侵袭情况,并观察对比其对细胞结构的损坏程度和对乳腺上皮细胞的影响,本试验对由云南农业大学动物医学实验教学中心实验室分离的一株SASCV进行体外感染小鼠乳腺上皮细胞试验,将分离出的一株SASCV及质控菌株ATCC 25923分别注入实验室体外培养的小鼠乳腺上皮细胞内,采用普通光镜和扫描电子显微镜观察质控菌株ATCC 25923及SASCVs诱导乳腺上皮细胞凋亡的细胞形态学变化;用流式细胞仪(Annexin V-FITC/PI双染法)定量检测质控菌株ATCC 25923及SASCVs感染乳腺上皮细胞凋亡的诱导作用,观察细胞的变化。结果显示,质控菌株ATCC 25923及SASCVs感染小鼠乳腺上皮细胞3 h后,可诱导乳腺上皮细胞发生凋亡,显示为细胞核皱缩,染色质边缘化和细胞浆内空泡增多等典型的凋亡特征。Annexin V-FITC/PI双染法检测后发现,与对照组相比,感染组细胞凋亡率明显升高,并且阳性对照组的细胞凋亡率明显高于试验组。结果表明,SASCVs在侵染细胞的过程中达到一定数量不再上升;SASCVs的凋亡率明显的较正常金黄色葡萄球菌低。因此,SASCVs也可诱导乳腺上皮细胞凋亡,具有细胞凋亡的典型形态特征。本试验结果为以后预防和控制SASCVs感染奶牛慢性乳房炎提供试验依据。     

胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌小菌落突变株的分离鉴定

本试验对由患慢性奶牛乳房炎奶样中分离出的1株疑似金黄色葡萄球菌小菌落突变株(SCVs)进行形态观察、金黄色葡萄球菌相关保守基因片段(nuc、nucA、16S rDNA) 多重PCR扩增鉴定、药敏试验、生理生化特性研究及补偿试验。结果显示分离出1株金黄色葡萄球菌SCVs,该菌含有金黄色葡萄球菌菌种特异性基因nuc和nucA;与金黄色葡萄球菌质控菌株ATCC 25923的抑菌圈大小明显不同;菌落形态主要表现为菌落细小、生长缓慢、溶血能力下降;凝固酶活性下降;耐盐能力降低;革兰氏染色为革兰氏阳性球菌,呈葡萄状排列;补偿试验鉴定该金黄色葡萄球菌SCVs为胸腺嘧啶依赖型。结果表明成功分离鉴定出1株胸腺嘧啶依赖型金黄色葡萄球菌SCVs,为由金黄色葡萄球菌SCVs引起的奶牛慢性乳房炎的预防和控制及其致病机制的研究奠定前期基础。     

槲皮素-替米考星混合物纳米粒的制备及对金黄色葡萄球菌小菌落变异株抗菌活性研究

【目的】 制备一种适用于治疗由金黄色葡萄球菌小菌落变异株(Staphylococcus aureus small colony variants,SASCVs)引起奶牛乳腺炎感染的槲皮素-替米考星混合物纳米粒,评价其对SASCVs菌株的抗菌活性。【方法】 通过对槲皮素(0.05、0.10、0.15和0.20 g)和替米考星原料药用量(0.2、0.3、0.4和0.5 g)及转速(500、1 000、1 500 r/min)、反应时间(0.5、1.0、2.0 h)、反应温度(25、50、75 ℃)、溶剂浓度(5.0%、7.5%、10.0%)进行考察,以外观性状为指标,筛选槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优配方和制备条件;以微观形态、沉降体积比、再分散性、粒径和Zeta电位为指标,对制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒表征;通过琼脂扩散法、微量肉汤稀释法和体外杀菌曲线,对比槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抗菌活性,评价槲皮素-替米考星混合物纳米粒的优势。【结果】 当替米考星为0.4 g、槲皮素为0.1 g、溶剂为20 mL 7.5%的聚乙二醇溶液,在转速为1 000 r/min、反应时间为1 h、反应温度为50 ℃时,所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒最优,其溶液外观性状显示颜色清亮,无沉淀和絮状物;微观形态显示该混合物纳米粒分布均匀,颗粒大小一致;沉降体积比为1,再分散性良好,平均粒径为741.9 nm,Zeta电位为-7.69 mV。替米考星标准品、槲皮素-替米考星混合物纳米粒和市售替米考星溶液对SASCVs菌株的抑菌圈直径分别为2.54、1.51和1.38 cm,对SASCVs菌株的最低抑菌浓度分别为1、1和2 μg/mL;体外杀菌曲线表明,槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株表现出明显的浓度依赖性。【结论】 本研究所制备的槲皮素-替米考星混合物纳米粒对SASCVs菌株具有较强杀菌能力,可为治疗由SASCVs菌株引起的奶牛乳腺炎提供基础研究资料。     

羊口疮病毒与宿主互作研究进展

羊口疮是一种人兽共患传染病,主要由羊口疮病毒（Orf virus,OrfV）感染所致,目前尚无特效药物可治疗。囊膜蛋白是OrfV的主要抗原性蛋白,其机理主要是为病毒侵入宿主细胞创造一系列条件,同时降低宿主免疫力,增强了病毒的毒力。当病毒侵入宿主体内后,宿主会产生抗病毒免疫应答来清除病毒粒子,包括特异性体液免疫和非特异性细胞免疫应答,但主要以非特异性的细胞免疫应答为主。宿主对病毒会产生抗病毒免疫应答,同时病毒也会对宿主的免疫应答形成一种免疫逃避机制,通过该机制来躲避宿主免疫细胞对病毒粒子的捕获和清除,为病毒粒子在宿主体内的增殖、成熟及增强病毒毒力创造了各种条件。作者归纳总结了近年来羊口疮病毒与宿主互作的研究,阐述了OrfV囊膜蛋白的生物学功能、宿主的抗病毒免疫应答、病毒在宿主体内的免疫逃避机制和OrfV的其他一些毒力因子的致病作用,以期为羊口疮病毒的致病机制及疫苗防制研究提供参考。     

细菌耐药性研究进展

细菌抗生素类药物耐药性的产生是临床治疗感染性疾病的一大难题,已受到人们的广泛关注。细菌主要通过产生灭活酶或钝化酶获得耐药性,除此之外还有细胞壁的渗透障碍、外排泵的泵出作用、靶位改变等多种机制,这些机制相互作用共同决定细菌的耐药水平。随着新型抗生素的临床应用,新的耐药机制随之出现,耐药菌也越来越广泛。细菌耐药机制的研究对耐药菌的控制和新药开发具有指导性意义。文章从耐药性的起源、产生机理、耐药特性及耐药性的检测方法4个方面进行了阐述。     

Research Progress on Bacterial Resistance

Antibiotic resistance of bacteria is a major problem in the clinical treatment of infectious diseases,and it has received the extensive attention.Bacteria producing inactivated enzyme or passivated enzyme is a mainly way to acquire resistance.Besides,the mechanisms of cell wall permeability barrier,efflux pump and target changes are existed,these mechanisms interact to the level of the bacterial antibiotic resistance.With the clinical application of new antibiotic,the new resistant mechanisms emerge and the antibiotic-resistant bacteria are widespread.The study of bacterial resistance mechanisms has instructional meaning for antibiotic-resistant bacteria control and new drug development.We elaborated the bacterial resistance from the origin of the resistance,mechanisms,characteristics and test method in this article.     

布鲁氏菌胞内存活机制与巨噬细胞极化关系研究进展

布鲁氏菌（Brucella）是一种兼性胞内寄生致病菌,虽无典型的毒力因子却有很强的致病力,且常导致慢性持续感染。布鲁氏菌病被列入世界上严重的人兽共患病之一,直接对畜牧业造成重大经济损失,严重威胁人类健康和公共卫生安全。布鲁氏菌感染的靶细胞主要是巨噬细胞,其发展了更高的策略逃逸宿主免疫细胞的杀伤,甚至在细胞内大量繁殖,削弱巨噬细胞的功能,使巨噬细胞的杀伤作用和抗原递呈功能部分丧失,从而能在宿主细胞内长期持续性感染。文章围绕布鲁氏菌胞内存活机制进行探讨,分析了不同极化类型的巨噬细胞在布鲁氏菌感染过程中的调控作用,以及相关炎症通路对机体炎症发展的作用;揭示了布鲁氏菌胞内生存不仅可适应持续感染期间不同的免疫微环境,也可适应感染期间靶细胞营养物质利用率的差异;证实了在慢性感染的过程中免疫逃避和与宿主细胞代谢的相互作用起关键作用;解释了NF-κB通路是调节M1/M2型巨噬细胞亚型平衡状态的关键因素。布鲁氏菌在宿主细胞中持续感染是国内外学者所面临的巨大难题,其免疫逃逸机制和致病机制仍需进一步研究。     

沙门菌非编码小RNA RyhB研究进展

非编码小RNA(small non-coding RNA,sRNA)是一类基因组中被转录但不翻译成蛋白质的RNA分子,可在转录后水平调控基因表达。与蛋白质介导的调控系统不同,当细菌遇到不利的生长环境时,sRNA介导的调控可对环境变化做出快速应答。沙门菌RyhB-1和RyhB-2是两种相似性较高的sRNA,通过碱基互补配对方式,在调控因子作用下共同或单独调控靶基因表达。铁匮乏时,RyhB-1和RyhB-2可促进沙门菌摄取铁元素、限制胞内非必需含铁蛋白生成以及加快铁硫蛋白的储存,是沙门菌在转录后水平调控铁稳态的主要元件。此外,当沙门菌遭遇氧化应激、缺氧或酸性环境等不利环境胁迫时,RyhB可分别控制活性氧自由基的生成、平衡硝酸盐等无机物稳态、调节细菌运动性以及沙门菌毒力等应对环境变化。本文就沙门菌RyhB生理特征及其调控机制和功能进行阐述,以期为后续沙门菌RyhB的研究提供指导信息。     

细菌耐药机理及控制对策研究进展

随着抗菌药物的广泛应用,越来越多的细菌出现耐药性,而且耐药水平也越来越高。耐药性呈全球发展趋势,极大地影响着食品安全,危害着人类身体健康,本文就近年来国内外对细菌的耐药机理,耐药性的传播及对耐药性的控制对策等方面的研究进展作了阐述和综述。     

病原感染后鸡miRNAs调控的研究进展

microRNAs(miRNAs)是一种短的单链非编码小分子RNAs,无论是在正常发育还是疾病的发生发展过程中,都能够与靶mRNA结合,参与到基因的转录后调控过程,并在其中发挥重要的调节作用。近年来随着miRNAs研究的深入,越来越多的证据表明,病原感染后会引起宿主miRNAs表达水平发生变化,这些差异表达的miRNAs能够积极地参与到疾病的发生发展过程中,并通过调控靶基因的表达参与免疫功能、自噬、炎症反应、代谢等多种生物学过程来抑制或促进疾病的发展。此外,宿主miRNAs作为一种参与转录后调节的小分子RNAs,在病原感染过程中,鸡miRNAs除了可以靶向自身的基因来调控鸡先天免疫信号,也可以靶向病原的基因从而影响病原的吸附、入侵、增殖等过程。作者主要介绍了miRNAs的生物合成、功能以及鸡miRNAs在部分病毒、细菌、寄生虫等病原侵袭过程与致病过程中的调控作用及其机制,简述了不同病原感染后鸡miRNAs的调控策略,以期从miRNAs的角度为鸡病的诊断、治疗和防控提供一定的参考。     

单链抗体在小分子化学物质残留检测中的研究进展

兽药、农药及生物毒素等小分子化学物质在食品、饲料或水体中的过量残留对人、动物的健康及生态环境的平衡造成一定程度的危害,因此建立一种针对上述小分子化学物质残留的快速检测方法十分必要。以抗原抗体特异性结合为基础的免疫分析技术是残留检测的常用手段,该技术的关键是制备可用来检测特异性抗原的抗体。随着对抗体结构的解析及重组DNA技术的发展,单链抗体为小分子化学物质的残留检测提供了新的技术手段。单链抗体具有分子质量小、免疫原性低、可塑性强、可批量生产等优点,具有广阔的发展空间。近年来,以单链抗体为基础建立的酶联免疫吸附法检测小分子化学物质的残留检测成为最常用的分析工具,且单链抗体的筛选策略、表达策略、突变策略及与碱性磷酸酶形成的融合蛋白等进一步提高了抗体产量、灵敏度、广谱性,并使免疫分析方法简便化,从而推进单链抗体免疫分析方法在小分子化学物质残留检测的应用。作者综述了以单链抗体为基础的免疫分析方法在兽药、农药及生物毒素等小分子化学物质方面的研究进展,以期为小分子化学物质残留检测提供参考。     

大肠埃希菌耐药谱型、基因型和生物膜表型关系研究

以ATCC25922为研究对象,采用改良结晶紫染色,快速银染法和扫描电镜技术对其生物被膜进行定量和定性研究,建立大肠埃希菌生物被膜体外模型,利用优化的模型条件对249株临床分离株进行验证.采用琼脂平板计数法绘制大肠埃希菌浮游菌和被膜菌生长曲线,比较其生长特性的异同.对不同成膜能力的大肠埃希菌临床分离株进行色氨酸定量试验...     

抗动物霉形体类药物及耐药性研究进展

霉形体对畜牧业造成的损失是巨大的,抗生素类药物是临床上较常用的防治霉形体的药物,但随着其耐药性及并发感染的出现,使得药物疗效有所降低,本文就大环内酯类、氨基糖甙类、四环素类、氟喹诺酮类和其它抗菌类药物对动物常见霉形体病的研究情况以及中草药对动物霉形体的作用进行了综述。     

兽用抗生素残留对环境中细菌耐药性影响的研究进展

尊敬的主编先生/女士:我们谨此郑重通知:依据文献计量学的原理和方法,经研究人员对相关文献的检索、统计和分析,以及学科专家评审,贵刊《家畜生态学报》入编《中文核心期刊要目总览》2011年版(即第六版)之畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂类的核心期     

兽药小分子与生物识别元件相互作用研究进展

因不合理或违规使用兽药, 导致兽药原型或代谢物在动物源性食品和水体中残留, 继而危害人类健康、破坏生态环境。因此, 兽药残留快速检测方法的建立显得尤为重要。受体、抗体、适配体等生物识别元件具有分子识别能力, 根据其特性已发开了不同的检测方法, 如免疫分析法、受体检测法及生物传感器法等方法, 广泛用于生物医药的研究。由于分子识别元件是分析的主体, 影响分析的选择性, 因此不同识别元件与兽药相互作用的机制越来越受到人们的重视。随着计算机技术的发展, 同源建模和分子对接广泛用于残留检测技术, 主要用于药物与蛋白质之间、抗原与抗体之间、受体与配体之间等生物分子之间相互作用的研究。笔者重点介绍了单链抗体(ScFv)、受体和适配体3种识别元件与兽药小分子之间的互作机制, 主要分析生物识别元件与兽药结合部位形成的氢键、疏水性及关键氨基酸或碱基, 在分子水平上探究药物与识别元件的机理和规律, 从而找出影响识别元件与药物结合的关键因素, 并对3种识别元件进行了总结, 以期为全面了解识别机制和体外进化, 制备出亲和力更广的ScFv、受体、适配体提供理论支撑, 为后续药物残留检测技术和药物开发奠定基础。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒免疫生物学最新研究进展

猪繁殖与呼吸综合征病毒是对养猪业危害最严重的病原之一,猪和野猪是其唯一的自然宿主,野猪可呈隐性携带传播病毒,在该病流行中的作用需要给予重视。近20 a来,有关免疫方面的研究比较多,尽管疫苗已经应用很多年,但是它却不能提供全面的保护作用。本文着重从病毒受体、抗病毒先天性免疫反应、病毒的免疫调节以及获得性免疫反应的特征与作用等病毒的免疫生物学方面展开讨论,并就未来的研究提出一些建议,希望对推动野猪养殖业的健康发展提供一定的帮助。