11株枯草芽孢杆菌益生特性研究

试验旨在研究11株枯草芽孢杆菌的抑菌、产酶、耐受性和体外消化率等益生特性。从11株枯草芽孢杆菌中初筛得到9株体外抑菌特性和产酶特性均较好的芽孢杆菌;经过热、人工胃肠液、胆盐等耐受性复筛,结果表明9株芽孢杆菌中有6株对胆盐、胃酸、肠液等人工模拟的消化道内环境和生产过程中的热耐受性较强;经模拟动物体消化道的试验结果表明,9株芽孢杆菌中有5株（BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-3、BLCC1-4、BLCC1-6）对不同组合饲料的消化效果较好。综合以上试验结果,既表现出较好的产酶、抑菌和耐受性,又对组合饲料有良好的消化效果的枯草芽孢杆菌有BLCC1-1、BLCC1-2、BLCC1-4和BLCC1-6,这4株枯草芽孢杆菌具有作为饲料添加剂应用于畜禽饲料中的潜力,可进一步开展研究。     

高效降解游离棉酚并改善棉籽粕营养品质的菌株筛选

本试验旨在利用枯草芽孢杆菌和植物乳酸菌发酵棉籽粕,研究其对棉籽粕中游离棉酚降解率的影响,并对发酵前后棉籽粕的营养品质指标如活菌数、中性蛋白酶活性、酸溶蛋白质含量、pH、游离棉酚含量等进行比较。结果发现:可高效降解棉籽粕中游离棉酚的枯草芽孢杆菌菌株为BLCC1-0039,可有效改善发酵风味的植物乳酸菌菌株为BLCC2-0092。综合上述2株益生菌的优点,筛选出最优复配发酵方式为植物乳酸菌BLCC2-0092与枯草芽孢杆菌BLCC1-0039按照1∶1比例接种,37℃需氧发酵24h再厌氧发酵。与空白对照组相比,最优复配发酵组各发酵阶段发酵棉籽粕的pH显著降低(P0.05),厌氧发酵72h时pH降至5.27;酸溶蛋白质含量显著提高(P0.05),厌氧发酵72h时酸溶蛋白质含量达到23.54%;游离棉酚含量显著降低(P0.05),需氧发酵24h时游离棉酚降解率达到52.12%,厌氧发酵72h时游离棉酚降解率达到61.58%。由此可知,植物乳酸菌BLCC2-0092与枯草芽孢杆菌BLCC1-0039复配发酵可有效降低发酵棉籽粕中的游离棉酚含量并改善其营养品质。     

猪源芽孢杆菌的分离鉴定及生物学特性研究

从自然生长的健康猪肠道中分离到13株芽孢杆菌,通过生理生化试验初步鉴定其中9株为枯草芽孢杆菌,2株为巨大芽孢杆菌,1株为地衣芽孢杆菌,1株为凝结芽孢杆菌;对这13株芽孢杆菌分别进行了耐酸性试验、耐胆盐试验、体外抑菌试验和动物安全性试验。结果表明,其中1株地衣芽孢杆菌B7株和1株枯草芽孢杆菌B9株均有较强的耐酸、耐胆盐能力,对致病性大肠杆菌具有较好的体外抑制能力,且均安全无毒,可作为动物用益生菌制剂的候选菌种。     

一株肠源枯草芽孢杆菌的生长、抗逆和产酶特性分析

本试验分析了一株肠源枯草芽孢杆菌生长特性,耐酸、胆盐、高温和重金属性能以及产蛋白酶、淀粉酶的能力。结果表明:菌株最大生长浓度出现在22 h左右。菌株在pH 3.0营养肉汤培养基中培养3 h,存活率为58.6%,培养时间延长至6 h,存活率仍能达到47.5%。在胆盐浓度为0.3%,培养4 h后枯草芽孢杆菌存活率为65.5%,8 h后的存活率仍能达到40.4%。在90℃下,处理10 min成活率为61.8%,处理20 min后仍能达到33.3%。当Cu离子和Zn离子浓度为500 mg/L时,菌株生长量相当于对照的107.6%和86.7%。菌株培养48 h后上清液的淀粉酶活性为1.89 U,蛋白酶活性达到655.2 U。结果表明,本枯草芽孢杆菌具备较好的生长与抗逆特性和较高的酶活力,具备作为益生菌的潜在特质。     

西藏牦牛源枯草芽孢杆菌的分离培养及鉴定

从西藏健康牦牛的新鲜粪便中分离、纯化枯草芽孢杆菌,并筛选出耐受性最好的菌株,并进行形态学观察、生化试验、PCR扩增、电泳检测、16s rRNA序列测定、构建进化树并进行同源性分析,对通过鉴定的枯草芽孢杆菌进行耐肠液、耐胆盐、耐高温等耐受性试验.结果显示:分离出疑似枯草芽孢杆菌4株,革兰氏染色为阳性;芽孢染色液染色菌体为...     

6株芽孢杆菌的生物学特性比较研究

以实验室分离保存的6株芽孢杆菌为材料,对其主要生物学特性进行了研究,包括产酶活力,对NaCl、牛胆盐、人工胃液和人工肠液的耐受性及对抗生素的敏感性。结果显示,枯草芽孢杆菌1、凝结芽孢杆菌和蜡样芽孢杆菌均能产生较高活性的中性蛋白酶和淀粉酶;2株枯草芽孢杆菌和凝结芽孢杆菌能耐较高浓度的NaCl;枯草芽孢杆菌2、凝结、纳豆和蜡样芽孢杆菌对牛胆盐的耐受性较强;除地衣芽孢杆菌外,其他5株芽孢杆菌对胃液和肠液的耐受性较好;6株芽孢杆菌均对常用饲用抗生素敏感。结果表明,枯草1、凝结、蜡样芽孢杆菌是优良的候选益生菌菌株。     

猪源枯草芽孢杆菌BL-Y9益生特性研究及小鼠安全试验

本研究对实验室自行分离保存的猪源枯草芽孢杆菌BL-Y9进行抑菌、产酶、体外消化率等益生特性研究,并测定了其对小鼠的安全性。结果表明：菌株BL-Y9对猪大肠杆菌K88、鸡大肠杆菌O78、鸡白痢沙门氏菌CVCC533及金黄色葡萄球菌C56011有较好的抑菌效果,抑菌圈直径均可达到10 mm以上,发酵上清液中性蛋白酶及纤维素酶活性分别可达184.94、9.68 U/mL|经模拟动物体消化道的试验结果表明：菌株BL-Y9对三种不同饲料组合的消化效果较好,其中以对玉米面+豆粕组合消化效果最好,经作用后,消化液粗纤维消化率、游离氨基酸增加幅度、可溶性氨基酸增加幅度、还原糖增加幅度及酸溶蛋白增加幅度分别为37.79%、152.94%、438.11%、325.62%、131.39%。动物试验结果显示,每只小鼠灌胃1 ~ 100亿剂量菌体是安全的。菌株BL-Y9可作为畜禽饲料添加剂使用。 [关键词] 枯草芽孢杆菌|产酶特性|抑菌特性|消化率|小鼠安全性     

不同组合益生菌对育成期水貂生长性能和消化代谢规律的影响

本试验旨在研究不同组合益生菌对育成期水貂生长性能和营养物质消化率及氮平衡的影响。选择96只60日龄、健康状况良好的水貂,随机分为4组,每组24只,公、母各半。对照组饲喂基础日粮,试验1、2、3组分别在基础日粮中添加0.06 g地衣芽孢杆菌+0.06 g枯草芽孢杆菌、6 g安琪酵母+12 mL乳酸菌、0.06 g地衣芽孢杆菌+0.06 g枯草芽孢杆菌+6 g安琪酵母+12 mL乳酸菌。在水貂育成期内进行饲养与消化代谢试验,分析不同组合益生菌对水貂平均日采食量、平均日增重、料重比、粗蛋白质和粗脂肪的消化率及沉积氮、蛋白质生物学价值和净蛋白质利用率的影响。结果表明,与对照组相比,试验1组公貂的干物质消化率和试验2组公貂的脂肪消化率显著下降(P<0.05),但不同组水貂的生长性能和氮平衡及母貂的营养物质消化率未受到益生菌的影响(P>0.05)。提示,日粮中添加益生菌不会显著改善育成期水貂的生长性能、营养物质消化率及氮平衡,故在水貂健康的前提下,无需在育成貂日粮中添加益生菌。     

植物根际促生菌对两种真菌病害病原的抑制作用及其鉴定

利用钼蓝比色法、乙炔还原法和高效液相色谱法分别测定了分离自5种植物根际的19株细菌溶磷、固氮和分泌生长素特性;用平板对峙生长法测定了19株细菌对黄瓜枯萎病菌和小麦根腐病菌的抑制作用;结合菌株形态、生理生化反应,利用分子生物学方法鉴定了其中8株优良细菌。结果表明,菌株Bacillus subtilis LM4-3固氮酶活性较高[244.88 nmol C₂H₄/(mL·h)];菌株B. subtilis LHS11-1溶磷能力较强(205.77 mg/L);菌株PGRS-3分泌IAA能力较好(40.78 μg/mL)。5株菌株能够有效拮抗黄瓜枯萎病菌,其中B. subtilis FX2-1抑菌活性较强(活菌抑制率69.07%,发酵液抑制率51.73%)。7株菌株能够有效拮抗小麦根腐病菌,其中B. subtilis FX2-1抑菌活性较强(活菌抑制率 78.17%),B. subtilis LHS11-1发酵液抑制率高达81.52%。其他具有较好促生或拮抗上述两种病原真菌的菌株经鉴定,分别属于蜡样芽孢杆菌(B. cereus,菌株XX1)、短小芽孢杆菌(B. pumilus,菌株F1-4和LX22)、简单芽孢杆菌(B. simplex,菌株XX6)和荧光假单胞杆菌(Pseudomonas fluorescens,菌株XX5)。     

一株解淀粉芽孢杆菌的特性及抑菌活性研究

试验旨在对一株牛瘤胃源解淀粉芽孢杆菌的生长曲线、耐酸性和耐胆酸盐性等特性进行分析，同时对该菌发酵产物的抑菌活性和抑菌活性稳定性进行测定。采用生长速率法测定该菌生长曲线，活菌计数法测定耐酸性和耐胆酸盐性等特性，牛津杯法测定抑菌活性和抑菌活性稳定性。结果显示，该菌生长4 h时进入对数生长期，20 h后生长趋于稳定，进入生长稳定期；同时该菌表现出较好的耐酸性，在pH 3.0~7.0时存活率为23.8%~90.6%；有较好的耐胆酸盐性，在0.1%~0.4%的胆酸盐中存活率为64.2%~83.6%。以大肠杆菌（Escherichia coli）、副溶血弧菌（Vibrio parahemolyticus）、藤黄八叠球菌（Sarcina lutea）和产气杆菌（Aerogenes）等细菌和黑曲霉（Aspergillus niger）、黑根霉（Rhizopus nigricans）等霉菌作指示菌进行抑菌试验发现，该菌的发酵产物具有抑菌活性，同时其抑菌活性物质的耐热性和耐酸性较好。本试验通过对该解淀粉芽孢杆菌的特性进行研究发现，该菌具有耐酸、耐胆酸盐等特性；其抑菌活性及抑菌稳定性较好，具有耐酸碱及耐高温特性。     

Isolation and Identification of Six Strains of Swine Bacillus and Their Probiotic Research

This study was aimed to separate Bacillus from healthy pig feces by high temperature treatment method and conventional anaerobic bacteria isolated method, and through the cultivation of traits, biochemical tests, PCR, bowel tolerance, antibacterial activity and vaccinated animals and other screening methods to identify stable properties and probiotic Bacillus. As a result, a total of six strains of Bacillus, which were one strain of huge Bacillus, one strain of Death Valley Bacillus, two strains of Bacillus amyloliquefaciens and two strains of Bacillus subtilis. Isolates were resistant to polymyxin and penicillin, were more sensitive to the other 12 kinds of commonly used drugs, and had better bacteriostatic action to pathogenic E.coli and Staphylococcus aureus. Four kinds of Bacillus were available under acidic, high temperature conditions and bile salts, in particular Bacillus megaterium and Bacillus subtilis were strong tolerance. Those isolated Bacillus were not pathogenic to mice, wherein Bacillus megaterium and Death Valley Bacillus had a more significant role in promoting the growth of animals. Finalized, the Bacillus megaterium and the Death Valley Bacillus could initially be as probiotic Bacillus choice.     

6株猪源芽孢杆菌的分离鉴定及其益生性研究

本研究旨在通过高温处理和常规厌氧菌分离法从健康肥猪粪便中分离芽孢杆菌,并通过培养性状、生化试验、PCR、肠道耐受、抗菌活性和接种试验动物等方法鉴定筛选性状稳定、优良的益生性芽孢杆菌。结果显示,共分离到6株芽孢杆菌,其中1株巨大芽孢杆菌、1株死谷芽孢杆菌、2株解淀粉芽孢杆菌和2株枯草芽孢杆菌;分离菌对多黏菌素和青霉素耐药性较强,对其他12种常用药物较敏感,对致病性大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌效果较好;4种芽孢杆菌均可在酸性、高胆盐和高温条件下生存,特别是巨大芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌耐受能力较强;分离的芽孢杆菌对小鼠均无致病性,其中巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌有较明显的促进试验动物生长的作用。结果提示,巨大芽孢杆菌和死谷芽孢杆菌可作为益生性芽孢杆菌的初步选择。     

预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化

试验旨在研究预防犊牛腹泻复合微生态制剂3株菌种的配比优化。通过研究嗜酸乳杆菌、布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌不同浓度人工胃液、人工肠液、牛胆盐的耐受性及其对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌的抑菌性,确定其生物学特性;以大肠杆菌K99为指示菌,研究3种益生菌不同配比对大肠杆菌K99的抑菌效果,以确定其最佳组合。结果表明:(1)3种益生菌在不同pH人工胃培养条件下都具有较好的耐受性,其中嗜酸乳杆菌、芽孢杆菌在pH为5时,存活率达到了118.75%、142.24%,布氏酵母菌对不同pH均表现成活率达到了100%以上。(2)3种益生菌在人工胃液中9 h存活率较高,与0 h的OD600相比,布氏酵母菌、枯草芽孢杆菌、嗜酸乳杆菌存活率分别为108.7%、129.73%、96.37%。(3)在含有不同浓度的牛胆盐培养基中,布氏酵母菌、嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌存活率较对照组的存活率最高为60.49%、85.1%、47.42%。(4)3株益生菌按照不同配比在培养12 h后,试验组第2、4、8组较对照组相比差异显著(P<0.05);培养24 h后,试验组第3、4、5、6较对照组差异显著(P<0.05),组间差异不显著(P>0.05);第8个处理组在培养12 h后对大肠杆菌K99的抑菌效果较好。综合分析,3株益生菌对人工胃液、人工肠液、牛胆盐具有较好的耐受性,并具对大肠杆菌K99、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌等致病菌均有一定的抑菌特性。嗜酸乳杆菌、枯草芽孢杆菌、布氏酵母菌最佳的优化配比为3:3:1。     

枯草芽胞杆菌B7对肉鸡生长性能和蛋白消化率的影响

为了探讨肉鸡日粮中添加枯草芽胞杆菌B7对其生长性能、饲料蛋白消化率的影响,选取7日龄健康肉鸡180只,随机分成3个处理组,每个组设4个重复,分别为对照组(CK组)、枯草芽胞杆菌1组(Y1组)和枯草芽胞杆菌2组(Y2组),试验期为42d。研究各试验组日耗料、日增重、料肉比、胃蛋白消化率、回肠蛋白消化率。结果表明,与CK组相比,Y2组肉鸡日耗料提高了5.81%,日增重提高了7.29%,料肉比降低了2.43%,且三者差异均显著(P<0.05);此外,在14日龄时,Y2组的饲料胃蛋白消化率和肠蛋白消化率分别提高了28.07%和21.29%,且两者差异显著(P<0.05)。肉鸡日粮中添加适量的枯草芽胞杆菌能显著提高其生长性能和饲料利用率。     

枯草芽孢杆菌MA139类细菌素抑菌活性的研究

为测定枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素的抑菌活性。本试验采用管碟法对枯草芽孢杆菌MA139产生的类细菌素对多株革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌和真菌的抑菌活性进行测定。结果表明:类细菌素不但对芽孢杆菌属的其他菌种有抗菌活性,对病原菌和霉菌也有拮抗作用;不同指示菌对类细菌素的敏感性不一样,其中金黄色葡萄球菌对其最敏感。该类细菌素具有广谱抗菌作用,有作为畜禽饲料添加剂的潜力。     

11株瘤胃源芽孢杆菌生理学特性研究

试验对已筛选的11株瘤胃源芽孢杆菌的产酶活力、耐酸、耐胆盐和抑菌活性及菌株间相容性进行研究。采用3,5-二硝基水杨酸法（DNS法）测定纤维素酶的活力,涂布平板计数法测定菌株的耐酸性、耐胆盐等特性,牛津杯法测定抑菌活性,滤纸片法进行室内相容性试验。结果显示,菌株T-2、T-3和T-10产纤维素酶的酶活力较高;菌株T-2、T-5、T-7、T-8和T-9表现较强的耐酸能力;菌株T-4、T-5、T-9和T-11表现较强的耐胆盐能力。菌株T-4和T-7对副溶血弧菌的抑菌活性较强,T-7对产气杆菌的抑菌活性最强,T-5、T-9、T-10对大肠杆菌抑菌活性较强,而T-3对藤黄八叠球菌指示菌的抑菌性最强。室内相容性试验结果表明,11株芽孢杆菌部分菌株之间存在颉颃作用,由此筛选出优良菌株的复配组合,抑菌可能的最优复配组合为T-3、T-4、T-5;T-3、T-4、T-10;T-4、T-5、T-10;T-3、T-7、T-10。纤维素酶活力较强时可能的最优复配组合为T-2、T-3、T-5;T-2、T-3、T-10;T-2、T-5、T-10;T-3、T-5、T-6;T-3、T-5、T-10。本试验可为动物饲料的研究和开发提供一定的参考依据。     

混菌固态发酵法生产大豆多肽饲料的研究

采用枯草芽孢杆菌、米曲霉和酿酒酵母混合菌株固态发酵法生产大豆多肽饲料。利用枯草芽孢杆菌和米曲霉分泌蛋白酶降解基料中的蛋白质,使其分解成小肽;利用米曲霉将淀粉和纤维素降解为简单糖类物质;利用酿酒酵母分解糖类,产生醇香味,增加多肽饲料的适口性。以高温豆粕为原料,研究了发酵培养基组成、接种菌配比、接种量、发酵温度和发酵时间对发酵豆粕中多肽得率的影响,得到了最佳工艺条件:豆麸比为8:1(m:m),加蜜量为2%,混菌菌种比(枯草芽孢杆菌、米曲霉、酿酒酵母)为5:1:1(V:V:V),加水量为120%,接种量为25%,发酵温度为34℃,发酵时间为96 h。最终发酵物中多肽得率达54.89%,发酵产物中多肽含量为21.47%(干基)。     

不同浓度枯草芽孢杆菌对体外瘤胃发酵特性的影响

本研究利用体外产气量法,以生产中较为常见的TMR(精粗比60∶40)为发酵底物,通过单因素试验设计,研究了低、高剂量(1.14×10¹⁰、2.27×10¹⁰ CFU/kg)枯草芽孢杆菌对体外发酵12、48 h瘤胃产气动力学参数、瘤胃发酵参数等指标的影响;同时根据24 h产气量预测枯草芽孢杆菌对底物代谢能值(ME)、有机物消化率(OMD)及微生物蛋白(MCP)产量的影响,旨在为其合理应用提供理论依据。结果显示:在产气动力学方面,与对照组(CON)相比,低剂量组(T1)和高剂量组(T2)均显著提高了24、48 h的产气量(P<0.05),且T2组显著高于T1组(P<0.05);与对照组相比,T1组发酵12 h甲烷(CH_4)含量显著增加(P<0.05),T2组无明显变化(P>0.05)。在瘤胃发酵参数方面,与对照组相比,T1组12 h各发酵参数均无显著变化(P>0.05),T2组氨氮(NH_3-N)浓度显著增加(P<0.05),但其他发酵指标均无显著变化(P>0.05);T1组发酵48 h丁酸及戊酸含量显著降低(P<0.05),T2组pH显著降低(P<0.05)、总挥发性脂肪酸含量显著升高(P<0.05);T1及T2组其他48 h瘤胃发酵指标均无显著变化(P>0.05)。T1、T2组OMD、ME及MCP产量均显著高于对照组(P<0.05); T2组OMD和ME均显著高于T1组(P<0.05)。综合上述结果,不同浓度的枯草芽孢杆菌对精粗比为60∶40的TMR发酵参数均有一定程度的改善,但其效果存在一定的差异,高添加量(2.27×10¹⁰ CFU/kg)的效果更好。     

2株枯草芽孢杆菌对大肠杆菌和沙门氏菌的体外抑菌试验研究简

本试验旨在检测2株枯草芽孢杆菌对致病性大肠杆菌和沙门氏菌抑菌作用。以致病性大肠杆菌和沙门氏菌作为指示菌,采用2株枯草芽孢杆菌与大肠杆菌和沙门氏菌同时接种及先后接种的方法,对其与大肠杆菌和沙门氏菌的生物颉颃作用进行了研究。结果表明,先接种枯草芽孢杆菌再接种致病菌抑制作用最明显且在24 h时抑菌作用最强,同时接种枯草芽孢杆菌和致病菌抑制作用次之,先接种致病菌再接种枯草芽孢杆菌的抑制作用最弱。提示,2株枯草芽孢杆菌对致病性大肠杆菌和沙门氏菌都有一定的抑制作用,但抑制作用的强弱有差异,且与枯草芽孢杆菌和致病菌接种的时间长短有关。     

Separation and Preliminary Identification of Intestinal Probiotics of Laying Hens

[Objective] The paper was to isolate and identify probiotics in the intestine of laying hens. [Method] The intestinal probiotics in laying hens at peak period were isolated using conventional separation methods; the physical and chemical properties of target strains and in vitro antibacterial effects were measured. Moreover, the safety test of chicks was conducted. [Result] Four strains of lactobacillus were isolated from the jejunum of laying hens, including Lactobacillus plantarum, Bacillus acidophilus, L. delbrueckii subsp. Delbrueckii and L. delbrueckii subsp. Lactis, and their inhibition zone diameters were 18.30, 16.07, 11.45, 17.26 mm, respectively. One strain of Lactobacillus, L. brevis, was isolated from the cecum, with the inhibition zone diameter of 10.26 mm. Three strains of bacillus were isolated from the cecum, including Bacillus subtilis, B. cereus and B. licheniformis, and their inhibition zone diameters were 9.25, 8.46 and 8.37 mm, respectively. Daily drinking 2 billion units of viable bacteria was the safe dosage for chicks. [Conclusion] Eight strains of probiotics had certain inhibitory effect on Escherichia coli O_2, and had no toxic side effects to chicks. Lactobacillus had strong antibacterial effect on E. coli O_2, while the antibacterial effect of bacillus was relatively weak.