麦洼牦牛基因组三碱基重复微卫星的挖掘及其遗传多态性分析

为了解麦洼牦牛现有群体的遗传多样性及种群遗传分化特征,试验通过生物信息学方法从已公布的牦牛基因组中筛选到9 466个三碱基重复微卫星位点,以191个麦洼牦牛基因组DNA样品为模板对各个位点进行PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳基因分型。经过哈迪-温伯格平衡检验,在15个三碱基微卫星位点中,有5个位点偏离哈迪-温伯格平衡（P<0.05）。15个微卫星位点均为高度多态性（PIC>0.5）,群体平均观测杂合度（Ho）、平均期望杂合度（He）和平均多态信息含量（PIC）分别达到0.5041、0.8152和0.7831。进一步通过Structure 3.0软件分析发现,麦洼牦牛群体结构单一,无分化特征,表明麦洼牦牛品种虽然具有较高的遗传多态性但是无分化迹象。     

CTGF、Gprin3基因多态性及其与牦牛体尺性状的关联分析

【目的】 检测牦牛结缔组织生长因子（CTGF）和G蛋白调节诱导神经突增生家族亚型因子3（Gprin3）基因的单核苷酸多态性（SNP），并分析多态位点与牦牛体尺性状的关联性。【方法】 以西藏的斯布牦牛、帕里牦牛、类乌齐牦牛、申扎牦牛及四川的麦洼牦牛5个类群260头个体为研究对象，利用基因池筛选技术检测CTGF、Gprin3基因SNP位点，分析其多态信息含量、有效等位基因数、纯合度及杂合度等指标，利用最小二乘线性模型分析不同基因型与牦牛体尺性状的关联性。【结果】 牦牛CTGF基因存在3个SNPs位点，分别为T1537A、C2195T和C2421T，均位于内含子区，其中T1537A位点在斯布牦牛和麦洼牦牛中均处于Hardy-Weinberg平衡状态，而在帕里牦牛、类乌齐牦牛和申扎牦牛中均偏离Hardy-Weinberg平衡状态，该位点与牦牛体高呈显著相关（P<0.05）；C2195T位点在5个牦牛类群中均处于Hardy-Weinberg平衡状态，且处于中度多态（0.25<PIC<0.5）；C2421T位点在5个牦牛类群中均处于Hardy-Weinberg平衡状态，该位点与牦牛体重、体斜长、胸围、管围和前肢长均呈显著相关（P<0.05）。牦牛Gprin3基因共发现4个SNPs，分别为G310C、C414T、C1100T和G1213A，其中G310C、C414T及C1100T位点在5个牦牛类群中均处于Hardy-Weinberg平衡状态；G1213A位点在类乌齐牦牛中偏离Hardy-Weinberg平衡状态，在其余4个类群中均处于Hardy-Weinberg平衡状态；G310C位点在5个牦牛类群中均处于低度多态（PIC<0.25），C414T和C1100T位点在类乌齐牦牛、斯布牦牛中均处于中度多态，G1213A位点在类乌齐牦牛中处于中度多态，在其余牦牛类群中为低度多态；C414T位点与牦牛体重、体高、体斜长和胸围均呈显著相关，而在斯布牦牛和申扎牦牛中C1100T位点与其胸围和前肢长均呈显著相关（P<0.05）。【结论】 牦牛CTGF和Gprin3基因具有丰富的多态性，CTGF基因T1537A、C2421T位点及Gprin3基因C414T、C1100T位点均与牦牛体尺性状有关，可作为影响生长发育性状的候选基因及基因座用于牦牛定向选育。     

柴达木绒山羊八个微卫星位点遗传多样性分析

以柴达木绒山羊为研究对象,对其8个微卫星位点进行遗传多样性分析,计算各位点的等位基因频率(P)、杂合度(H)、多态信息含量(PIC)和有效等位基因数(N)。结果表明:8个微卫星位点在柴达木绒山羊均呈高度的多态性(PIC>0.5);位点LSCV 24基因杂合度、有效等位基因和多态信息含量都最高(H=0.796,N=6.916,PIC=0.766);位点BM 3413的基因杂合度、多态信息含量都最小(H=0.676,PIC=0.615);位点MAF-70的有效等位基因最小(N=0·7672)。因此,柴达木绒山羊群体中遗传背景复杂,遗传多样性较丰富;这8个微卫星位点也可用于柴达木绒山羊羊绒性状的进一步研究。     

青海高原牦牛遗传多样性研究

以中心产区简单随机抽样在青海省西宁市共抽取青海高原牦牛76头,用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）和水平淀粉凝胶电泳技术检测21个编码血液蛋白（酶）结构基因座及12个微卫星位点的多态性,并进行中性检验及连锁不平衡分析。结果表明：在所检测的21个血液蛋白基因座中,有6个存在多型,多态位点百分比为28．57％,12个微卫星位点全部为多态,共检测出63个等位基因;两层次标记所反映的群体内遗传变异水平均较低,21个血液蛋白基因座平均有效等位基因数、观察杂合度、期望杂合度和多态信息含量分别为1．118、0．0665、0．0729和0．0603,12个微卫星位点相应指标分别为2．9005、0．4138、0．5325和0．4903;除Alp外,其余5个血液蛋白多态基因座和12个微卫星位点均为中性基因。除Alp-CA、LDH1-ADH两对血液蛋白基因座和8对微卫星显著（P〈0．05）或极显著（P〈0．01）处于连锁不平衡状态外,其余13对血液蛋白基因座和58对微卫星均处于连锁平衡状态（P〉0．05）;另外,6个血液蛋白多态基因座、12个微卫星位点或是两者的合并数据从群体水平上均处于连锁平衡状态（P〉0．05）。     

牦牛和犏牛促卵泡素受体基因5′-侧翼区序列多态性研究

本研究旨在分析牦牛和犏牛促卵泡素受体(follicle-stimulating hormone receptor,FSHR)基因的多态性,为从遗传角度上解决其繁殖产仔率低的问题提供参考,为筛选繁殖性状分子标记奠定理论基础。研究采用PCRSSCP和直接测序技术,对麦洼牦牛、九龙牦牛、大通牦牛和犏牛共110头个体的FSHR基因5′-侧翼区进行遗传多态性分析,统计基因频率和基因型频率,进行Hardy-Weinberg平衡性检测,计算纯合度、杂合度、多态信息含量和有效等位基因数等遗传多态性指标。结果表明,麦洼牦牛、大通牦牛和九龙牦牛FSHR基因5′-侧翼区核苷酸序列具有多态性,犏牛无多态性;麦洼牦牛存在AA、AB和BB 3种基因型,九龙牦牛和大通牦牛均存在AA、AB 2种基因型,AB基因型在3个牦牛品种中占绝对优势,等位基因A为优势等位基因;麦洼牦牛、九龙牦牛和大通牦牛的多态信息含量分别为0.3693、0.3565、0.3705,均达到了中度多态(0.25PIC0.5),表明各牦牛品种遗传变异较大。     

中国美利奴(新疆军垦型)羊遗传多样性的微卫星分析

利用6个微卫星标记,采用PCR扩增,对200只中国美利奴(新疆军垦型)羊基因组DNA的遗传多样性进行了检测。统计了各位点的多态信息含量(PIC)、遗传杂合度(H)、有效等位基因数(E)和基因纯合率(Rh)等遗传指标。结果表明:除BMS772(PIC=0.2571)为中度多态外,其余微卫星位点均为高度多态;群体的平均PIC、H、E、Rh分别为0.5446、0.5684、2.5695和0.6165,此品种绵羊基因多态性和遗传多样性相对贫乏,而基因纯合率相对较高;只有BM6506位点处于哈代-温伯格平衡(P>0.05)。     

牦牛MDHⅠ基因多态性及其与生长性状的关联分析

本研究旨在探讨牦牛细胞质苹果酸脱氢酶（cytoplasmic malate dehydrogenase,MDHⅠ）基因的遗传多态性及其与生长性状的关联性,以期为牦牛优良性状选育提供参考依据。选取5个牦牛类群（共178头）,采集耳组织样提取DNA并构建DNA池,对MDHⅠ基因所有外显子设计特异性引物进行扩增测序,用Mega 5.2筛查SNPs位点,直接测序法鉴定其基因型,利用PopGene 32进行χ²独立性检测、基因纯合度（Ho）、基因杂合度（He）、有效等位基因频率（Ne）和多态信息含量（PIC）分析,利用SPSS 24.0分析MDHⅠ基因与牦牛生长性状间的关联性。结果表明,申扎牦牛、类乌齐牦牛、斯布牦牛、帕里牦牛和麦洼牦牛均在外显子8区域发现1个突变位点（G23093C）,属同义突变,有3种基因型：GC、CC和GG,5个牦牛类群中,GC基因型为优势基因型（类乌齐牦牛中GG为优势基因型）,G为优势等位基因（斯布牦牛除外）,在斯布牦牛中,G和C基因频率相等。χ²适应性检验表明,申扎牦牛、类乌齐牦牛、斯布牦牛、帕里牦牛和麦洼牦牛均符合Hardy-Weinberg平衡（P>0.05）。MDHⅠ基因在申扎牦牛、帕里牦牛和斯布牦牛中属于高度多态（PIC>0.5）,在麦洼牦牛和类乌齐牦牛中属于中度多态（0.25 < PIC < 0.5）;纯合度最高的是申扎牦牛和类乌齐牦牛。关联性分析结果表明,MDHⅠ基因不同基因型对类乌齐牦牛、帕里牦牛和麦洼牦牛体重有显著性影响（P<0.05）;且种间分析发现,MDHⅠ基因不同基因型对牦牛体重有显著性影响（P<0.05）,说明该基因可作为人工选育的分子标记。     

新疆13个绵羊品种及1个杂交群体遗传多样性的微卫星分析

利用7个微卫星标记对新疆13个绵羊品种和1个杂交群体的遗传多样性进行了检测。统计了各品种的等位基因组成、平均有效等位基因数(E),利用等位基因频率计算出各品种的平均遗传杂合度(H)、多态信息含量(PIC)和品种间的遗传距离。结果表明,7个微卫星位点均为高度多态,可作为有效的遗传标记用于绵羊品种之间遗传多样性和系统发生关系的分析。各品种的分子系统发生关系与其来源、育成史及地理分布基本一致。     

新疆塔里木马鹿遗传多样性的微卫星分析

利用5个微卫星标记对新疆塔里木马鹿遗传多样性进行了检测。统计了塔里木马鹿3个群体的等位基因组成、平均有效等位基因数(E)和平均基因纯合率(Rh),利用等位基因频率计算出各群体的平均遗传杂合度(h)、多态信息含量(PIC)。结果表明5个微卫星位点在库尔勒、阿拉尔和沙雅县塔里木马鹿3个群体的平均多态信息含量分别为0.5884、0.5754、0.5344,除微卫星位点BM5004外均为高度多态,可作为有效的遗传标记用于塔里木马鹿遗传多样性分析;塔里木马鹿三个群体总平均PIC、h、Rh和E分别为:0.5661、0.5995、0.4474和2.7。分析认为塔里木马鹿遗传变异度较高,遗传多样性相对丰富,具有较大的遗传潜力。     

The Genetic Polymorphism Analysis in Tree Shrew(T.belangeri chinensis) based on Fluorescent Microsatellite

A total of 10 fluorescent labeling microsatellite markers detected by capillary electrophoresis were selected to analyze the genetic diversity of tree shrew(T.belangeri chinensis).Microsatellite Toolkit and PopGene softwares were used to calculate the genetic correlation indexes to assess the genetic diversity of the population.64 alleles with 6.4 alleles per locus were identified among 10 microsatellite loci.The average effective number of alleles, observed heterozygosity, expected heterozygosity and polymorphic information content were 3.7892, 0.6156, 0.6963, and 0.6367, respectively.Seven of all loci were high polymorphic, and three were moderate polymorphic.Five loci extremely significantly deviated from Hardy-Weinberg equilibrium(P<0.01).These novel polymorphic microsatellite markers indicated high genetic diversity, which will be used to evaluate genetic diversity in tree shrew.     

荧光标记微卫星分析广西树鼩群体的遗传多态性

选取10个微卫星位点,结合荧光标记(FAM) PCR扩增技术,运用毛细管电泳检测扩增产物,利用Microsatellite Toolkit、PopGene软件计算遗传相关指标,探讨广西树鼩群体的遗传多态性。结果发现,在10个微卫星基因座中,共检测到64个等位基因,平均等位基因数为6.4个,平均有效等位基因数为3.7892,平均观察杂合度和平均期望杂合度为0.6156和0.6963,平均多态信息含量为0.6367,其中7个是高度多态位点,3个属中度多态位点。此外,在10个微卫星基因座中,有5个位点偏离Hardy-Weinberg平衡(P<0.01)。结果表明广西树鼩遗传多态性较丰富,所选微卫星位点基本可用于评估广西树鼩群体遗传多样性。     

Analysis on the Genetic Diversity of Six Bactrian Camel Populations in China Using Microsatellite Marker

In order to understand the genetic diversity of Bactrian camel and the genetic evolutionary relationships between different populations,the genetic diversity of Alashan camel, Qinghai camel, Nanjiang camel, Beijiang camel, Subei camel and Sunite camel populations in China were analyzed using 10 microsatellite markers. By calculating heterozygosity (H), polymorphism information content (PIC), effective allele (Ne), Shannon information index, the genetic variation within populations were analyzed. By calculating the F-statistics, gene flow, genetic differentiation coefficient and genetic distance to analyze the genetic relationship between populations. The results showed that 89 alleles were tested at the 10 microsatellite loci,8.9 alleles were tested at every locus in average. All loci were medium-highly polymorphic loci (except YWLL08),the average PIC of the Bactrian camel population was between 0.488 to 0.752. The observed heterozygosity (0.355 to 0.448) of 6 Bactrian camel populations was lower than the expected heterozygosity (0.643 to 0.703). Almost all loci Shannon index was greater than 1,and most of loci were in Hardy-Weinberg disequilibrium. The genetic differentiation coefficient between groups (Fst) value was 0.059 and in the low degree of moderately differentiated state. The average Fis values of 6 Bactrian camel populations were positive which suggested 6 Bactrian camel populations had different levels of inbreeding. The standard genetic distance (D_S) and genetic distance T (D_A) clustering analysis showed that the Nanjiang camel and Beijiang camel jointed as one group, the Alxa camel, Qinghai camel, Subei camel, Sunite camel jointed as the other group. Research showed that Chinese Bactrian camel was abundant in genetic diversity, genetic variation within population was larger, and there was a phenomenon of inbreeding. There was a certain gene flow between populations, the differentiation of populations were mainly caused by genetic variation within population. 6 Chinese Bactrian camel populations were divided into two groups.     

太湖鸡资源群体遗传变异的检测

应用微卫星标记对江苏省无锡市祖代鸡场有限公司太湖鸡的保种群体进行了遗传变异的分析,计算了群体的杂和度(H)和多态信息含量(PIC)。研究结果表明:30个微卫星标记在太湖鸡保种群体的杂和度为0.504～0.858之间,平均杂和度为0.688,群体的遗传多样性丰富;其中24个微卫星标记在太湖鸡中多态信息含量为高度多态,可作为有效遗传标记用于太湖鸡保种群的遗传分析,而且各座位杂和度的高低与PIC值的大小体现了较高的一致性。本研究结果为太湖鸡开发利用研究提供了基础,也为太湖鸡的合理保护提供了科学根据。     

中国6个双峰驼群体微卫星遗传多样性分析

为了解中国双峰驼群体的遗传多样性及不同种群间的遗传进化关系,本研究采用微卫星标记技术,对中国阿拉善驼、青海驼、南疆驼、北疆驼、肃北驼、苏尼特驼6个双峰驼群体进行了遗传多样性分析。通过计算杂合度（H）、多态信息含量（PIC）、有效等位基因（Ne）、Shannon信息指数等分析群体内遗传变异,通过计算F-统计量、基因流、遗传分化系数、遗传距离等分析群体间遗传进化关系。结果显示,10个微卫星位点共检测到了89个等位基因,平均每个位点检测到8.9个等位基因;所有位点均属中高度多态位点（YWLL08除外）,平均PIC值在0.488~0.752之间;6个群体观测杂合度值（0.355~0.448）都低于期望杂合度值（0.643~0.703）;几乎所有位点的Shannon指数都>1,且处于哈代-温伯格不平衡状态（P< 0.05）。群体间遗传分化系数Fst值为0.059,处于较低程度的中等分化状态; 6个双峰驼群体的平均Fis值均为正值,说明6个双峰驼群体都存在不同程度的近交。基于标准遗传距离D_S和遗传距离D_A进行聚类分析,南疆驼和北疆驼聚为一支,阿拉善驼、青海驼、肃北驼、苏尼特驼4个群体聚为一支。研究表明,中国双峰驼遗传多样性丰富,群体内遗传变异较大,存在一定近交现象;群体间存在着一定的基因流动,群体间的分化主要由群体内的遗传变异造成;6个群体分为2个类群。     

中国美利奴（新疆军垦型）种羊场超细品系核心群群体遗传结构分析

利用10个微卫星标记对新疆紫泥泉国家二级种羊场中国美利奴（新疆军垦型）羊超细品系核心群基因组DNA的遗传多样性进行了检测。统计了各位点的多态信息含量(PIC) 、遗传杂合度(H) 、有效等位基因数(E) 和基因纯合率(Rh)等遗传指标。结果表明：除BMS772（PIC=0.2567），BM6506（PIC=0.4697）为中度多态外，其余微卫星位点均为高度多态；群体的平均PIC、H、E、Rh分别为0.5848、0.6333、3.0315和0.4841，该品系核心群的基因纯合率处于中等水平，具有较为丰富的多样性；10个微卫星标记中只有OARAE57位点处于哈代 温伯格平衡(P>0.05)。     

基于GBS简化基因组测序评估3个麦洼牦牛保种群的遗传结构研究

麦洼牦牛是青藏高原地区优良的乳肉兼用型牦牛品种,本研究旨在探究四川省龙日种畜场麦洼牦牛保种群的遗传多样性和遗传结构,评价3个不同保种群的保种效果并挖掘重要种质特性基因。对麦洼牦牛3个保种群粉嘴群（n=140）、全黑群（n=211）、弗洛群（n=55）进行GBS简化基因组测序,基于检测到的126122个单核苷酸多态性（SNPs）标记计算遗传统计量,结果表明,整个牦牛群的平均观测杂合度（Ho）和平均期望杂合度（He）为0.3038和0.3036,麦洼牦牛的遗传多样性较丰富。全黑群、粉嘴群、弗洛群的观测杂合度Ho分别为0.3029、0.3042、0.3044,近交系数Fis分别为0.0144、0.0152、0.0209,弗洛群和粉嘴群受人工选择的强度大于全黑群,较低的近交水平说明3个群的保种效果较好。Structure分析中全黑、弗洛群部分个体血缘较纯正,而其他个体血缘关系非常混杂;粉嘴群和全黑群的遗传分化系数（Fst）和遗传距离（DR）最大为0.03513、0.0358,结合系统进化树表明两者亲缘关系最远,有遗传分化趋势。利用Fst和π法对3个保种群进行选择信号分析,发现有104个受选择基因广泛参与生殖机能、免疫系统、胚胎发育、脂质代谢等条目以及生殖激素、内/外分泌、信号传递等通路,其中部分基因提示麦洼牦牛的繁殖、肉质、毛色性状以及应激反应得到了人工选择,如PPP3CC、KCNMA1、ROCK2、GNAQ、MEF2C、KIT等。现有的麦洼牦牛保种策略是可行的,研究结果为未来麦洼牦牛的保种选育和遗传改良提供了参考依据。     

利用微卫星遗传标记评估5个西藏牦牛群体遗传多样性及群体结构

【目的】 评估当前西藏主要牦牛群体遗传多样性，梳理不同地区群体间遗传结构，明确西藏5个牦牛群体（阿里牦牛、斯布牦牛、娘亚牦牛、类乌齐牦牛和帕里牦牛）的保种情况和种群间系统发育关系。【方法】 利用13个微卫星标记（SSR）对5个牦牛群体共计195个个体进行基因分型，并对各群体的等位基因数量、基因杂合度、多态信息含量及群体间遗传距离等遗传参数进行评估。【结果】 阿里牦牛群体等位基因数最多（6.43），类乌齐牦牛等位基因数最少（5.00）；观测杂合度范围为0.5311（娘亚牦牛）~0.5995（类乌齐牦牛）。各群体内偏离Hardy-Weinberg平衡的位点数为5（类乌齐牦牛）~9（阿里牦牛）个；群体内近交系数最高为0.172（阿里牦牛），且4个群体（阿里牦牛、娘亚牦牛、斯布牦牛和帕里牦牛）存在显著近交风险（P<0.05）。从遗传结构来看，所有群体间均为显著遗传分歧（P<0.05），STRUCTURE分析结果显示，5个牦牛群体划分为3个簇，其中阿里牦牛较其他牦牛群体具有更为丰富的遗传背景。系统发育树结果表明，不同群体间系统发育关系相对独立，且与种群栖息地分布不一致。主坐标分析（PCoA）结果显示，不同群体间部分个体存在较近亲缘关系，表明不同群体间存在遗传物质交流。【结论】 5个西藏牦牛群体具有丰富的遗传多样性水平，且种群系统发育关系相对独立，但多数群体存在群体事件风险。本研究不仅有助于明确西藏牦牛地方种群遗传多样性水平，同时可为今后的保种策略提升提供理论参考。     

Romilly Hills羊遗传多样性的微卫星分析

利用 1 0个微卫星标记对新疆兵团农七师从南非引进的罗米丽 (RomillyHills)绵羊和中国美利奴羊 (新疆军垦型 )遗传多样性进行了检测。统计了两群体的等位基因组成、平均有效等位基因数 (E)和平均基因纯合率 ,利用等位基因频率计算出两群体的平均遗传杂合度 (h)、多态信息含量 (PIC)。结果表明 1 0个微卫星位点在RomillyHills羊、中国美利奴羊群体中的平均多态信息含量分别为 0 5952和 0 5859,除BM1 82 4、MAF65外均为高度多态 ,可作为有效的遗传标记用于两品种绵羊遗传多样性分析 ;RomillyHills羊的群体遗传变异大于中国美利奴羊 ,其遗传多样性相对丰富 ,有较大的选育潜力。     

牦牛乳中上皮粘蛋白MUC1的遗传多态性研究

采用SDS－PAGE研究了108头麦洼牦牛和98头九龙牦牛乳MUC1的生化遗传特性，结果表明；牦牛乳MUC1呈现出多态性，表现为一条或两条迁移率不同的区带。SAS－PAGE分析发现4种分子量的MUC1区带，依次为A：208kd,B;200kd,C:196kd,D185kd，分子量大于荷斯坦牛。麦洼牦牛MUC1基因座受A、B、C、D4个复等位基因支配，有9种基因型；九龙牦牛乳MUC1基因座受A、C、D3个复等位基因支配，显示5种基因型，两品种牦牛乳MUC1基因型分布差异极显著（P＜0.01），并且均偏离哈代－温伯格定律（P＜0.01），麦洼牦牛乳MUC1基因座遗传变异程序大于九龙牦牛。     

野生天山马鹿哈密种群微卫星遗传多样性

为了解野生天山马鹿哈密种群的微卫星多态性,本文选用5对微卫星标记引物,利用粪便DNA分析法、PCR和复合电泳银染技术,通过计算基因频率（JP）、有效等位基因数（M）、群体杂合度（1te）、多态信息含量（PIC）和遗传距离,对冬季采集的201份天山马鹿粪便进行了研究,评价了其遗传多样性和系统进化分析。结果表明：成功提取I）NA的194份粪便分属140个体;种群平均等位基因4．200±0．837;平均有效等位基因数3．2167±0．0236;平均多态信息含量0．6332±0．0017;平均期望杂合度0．694±0．035;平均观察杂合度0．792±O．063。整个种群没显著偏离Hardy—Weinberg平衡,种群剧定系数Fis为一0．238。从此可见,野生天山马鹿哈密种群具有比较丰富的遗传多样性.