氟化钠对附睾形态结构及紧密连接相关基因表达的影响

为了研究氟对小鼠附睾结构形态及紧密连接相关基因的影响,将60只健康雄性小鼠随机分成4组,对照组饮用蒸馏水,3个氟处理组分别饮用含氟化钠（NaF） 25、50和100 mg/L的蒸馏水。染氟60 d,取小鼠股骨,采用氟离子选择电极法测其氟含量;取右侧附睾制作石蜡切片,HE染色后进行组织形态结构观察;左侧附睾提取RNA,采用实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）检测紧密连接相关基因的表达。结果显示,与对照组相比,氟处理组小鼠股骨氟含量随摄氟剂量的增加呈剂量依赖性,其中50、100 mg/L剂量组差异极显著（P<0.01）;氟处理组附睾尾管腔厚度极显著增厚（P<0.01）;紧密连接相关基因Claudin-2 mRNA表达量极显著下降（P<0.01）,100 mg/L剂量组ZO-1 mRNA表达量显著下降（P<0.05）。摄入过量NaF影响附睾形态及其紧密连接相关基因的表达,从而可能对血-附睾屏障造成损伤。     

胰高血糖素样肽-2对断奶仔猪肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响

本文旨在研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对离体培养的断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白相关基因表达的影响,探讨GLP-2调节肠道黏膜屏障的可能机制。将断奶仔猪空肠组织块置于含0、1×10-8、1×10-7mol/L的GLP-2的细胞培养液中进行培养,考察不同GLP-2添加水平对断奶仔猪空肠上皮丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路细胞外调节蛋白激酶丝裂原活化蛋白激酶激酶1/2(MEK1/2)、p90核糖体S6蛋白激酶(p90RSK)以及紧密连接蛋白ZO-1、Oc-cludin、Claudin-1基因表达的影响,待确定出GLP-2能有效促进紧密连接蛋白相关基因表达的剂量后,再向培养液中添加MEK1/2的特异性阻断剂U0126,考察阻断MAPK经典通路后紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达的变化。结果表明,与对照组相比,将空肠组织块置于含1×10-7和1×10-8mol/L GLP-2的培养液中培养72 h均能显著促进MEK1/2、p90RSK以及紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量(P<0.05),除ZO-1的基因之外,上述各蛋白的基因mRNA相对表达量还随着GLP-2浓度的增高而升高(P<0.05);向1×10-7mol/L的GLP-2组添加U0126阻断p90RSK、ERK1/2的基因表达后,紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因mRNA相对表达量也显著下降(P<0.05)。由此可知,GLP-2能够促进断奶仔猪空肠上皮紧密连接蛋白ZO-1、Occludin、Claudin-1的基因表达,而MAPK通路可能是GLP-2调控肠道紧密连接蛋白基因表达的重要信号通路之一。     

腹水综合征肉鸡空肠黏膜组织结构及相关基因表达分析

试验旨在研究肉鸡腹水综合征发生发展过程中空肠核因子κB （NF-κB）及紧密连接蛋白（闭合蛋白（occludin）、紧密连接蛋白-1（claudin-1）和胞质紧密黏连蛋白1（zonula occluden 1,ZO-1）） mRNA相对表达量,以及绒毛长度、隐窝深度和绒隐比的变化,为肉鸡腹水综合征的防治提供理论依据。选取40羽1日龄罗斯肉鸡常规饲养7 d后,随机分为对照组和模型组（饲料添加3%猪油和4%鱼粉,饮水添加0.12% NaCl,9~11℃低温饲养）,35日龄检测体重,并取心脏组织测腹水心脏指数,取空肠组织以HE染色切片测量绒毛长度和隐窝深度,实时荧光定量PCR检测空肠NF-κB和紧密连接蛋白的基因表达量。结果表明,与对照组相比,模型组肉鸡体重极显著下降（P<0.01）,腹水心脏指数极显著升高（P<0.01）,空肠绒毛长度、绒隐比极显著下降（P<0.01）,隐窝深度极显著升高（P<0.01）,NF-κB mRNA相对表达量极显著升高（P<0.01）,occludin、claudin-1和ZO-1 mRNA相对表达量极显著下降（P<0.01）。表明肠道黏膜结构与功能异常及肠通透性增高促进了肉鸡腹水综合征的发生发展。     

黄芩苷对脂多糖诱导后仔猪的血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC的影响

本研究利用脂多糖（LPS）诱导建立仔猪免疫损伤模型，研究黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接蛋白表达量和MLCK-MLC信号通路变化的影响，并探讨其保护机制。试验选取42头健康仔猪，分为空白对照组（A组）、LPS模型组（B组）、LPS+丙酮酸乙酯处理组（C组）、LPS+氟尼辛葡甲胺处理组（D）和LPS+黄芩苷处理组（剂量分别为25、50和100 mg/kg，E、F、G组）。饲喂7 d后，攻毒前0.5 h进行药物处理，处理组及模型组腹腔注射LPS，空白对照组注射等量生理盐水，LPS诱导6 h后再次给药。试验1 d后，采集主动脉血管样品2份，通过免疫组化及免疫荧光观察血管中紧密连接蛋白（闭锁小带蛋白-1（ZO-1）、密封蛋白-1（Claudin-1）和闭合蛋白（Occludin））的表达变化；Western blotting法测定血管MLCK-MLC信号通路相关蛋白（肌球蛋白轻链激酶（MLCK）、肌球蛋白轻链2（MLC2）和磷酸化肌球蛋白轻链2（p-MLC2））的表达量。结果表明，LPS诱导后，仔猪血管中ZO-1、Claudin-1和Occludin蛋白表达量均极显著降低（P<0.01），黄芩苷处理能明显提高仔猪血管紧密连接蛋白的表达量。LPS模型组MLCK和p-MLC2蛋白表达量均极显著升高（P<0.01），黄芩苷能显著下调MLCK和p-MLC2表达量（P<0.05），各组间MLC2表达量差异不显著（P>0.05）。综上所述，LPS能引起仔猪的血管损伤，激活MLCK-MLC信号通路，影响紧密连接蛋白表达量及功能，黄芩苷对LPS诱导的仔猪血管紧密连接损伤具有保护作用。本试验结果为黄芩苷用于治疗猪的炎性血管损伤提供了科学依据。     

Study on Relationship between Intestinal Epithelium Tight Junction Proteins mRNA Expression and Piglets Weaning Diarrhea

The experiment was carried out to compare diarrhea status between Min pig and Landrace pig in a week after weaning, detect two varieties piglets jejunum, ileum and colon tight proteins Zonula occludens-1(ZO-1)and Occludin mRNA expression before and after weaning. The intention was to discuss the relationship between tight proteins expression and piglets weaning diarrhea. The results showed that Min piglets diarrhea rate, diarrhea frequency were very significantly lower than Landrace pig within one week after weaning (P<0.01), diarrhea days was significantly lower than Landrace pig within one week after weaning (P<0.05);Min piglets not weaning group ileum and colon ZO-1 and Occludin mRNA expression was very significantly higher than Landrace pig not weaning group (P<0.01);Min piglets weaning diarrhea group ileum and colon ZO-1 and Occludin mRNA expression was significantly higher than weaning health group (P<0.05). The results indicated that Min piglets intestinal tight junction proteins mRNA high expression before weaning might be had relation with guarantee piglets intestinal health and decrease occurrence diarrhea;Min pig fast recover intestinal mucosa function and rehabilitation by increased tight junction proteins mRNA expression after weaning. So tight junction proteins mRNA high expression before and after weaning had an important significance for piglets to resist weaning diarrhea.     

氟对雄性小鼠生长发育及性腺中氟含量的影响

本试验旨在研究氟对性成熟期雄性小鼠生长发育及性腺中氟含量的影响。将40只健康昆明雄性小鼠随机分为4组,即低、中、高3个染氟组和对照组,其中染氟组分别饮水摄入氟化钠30、70和150 mg/L,对照组饮用蒸馏水,染氟期间,观察动物的一般状况,每周记录小鼠体重,49 d后,收集血液、股骨、睾丸、附睾和精囊腺,测定其氟含量。与对照组相比,各染氟组体重均无显著差异(P＞0.05),高氟组小鼠体增重显著低于对照组(P＜0.05);各染氟组股骨氟含量均显著高于对照组(P＜0.05),睾丸和附睾中氟含量随摄氟剂量的增加呈剂量依赖性,且高氟组显著升高(P＜0.05),血清与精囊腺中氟含量与对照组相比无显著差异(P＞0.05)。结果表明,高氟对性成熟期雄性小鼠生长发育有抑制作用,且突破了血睾屏障和血-附睾屏障进而对生殖系统产生影响。     

黄芪多糖对肠炎雏鸡小肠黏膜损伤的保护作用

【目的】探究黄芪多糖(Astragalus polysaccharide, APS)对雏鸡肠道形态和局部黏膜免疫的影响,阐明APS减轻肠炎雏鸡肠黏膜损伤的作用机制。【方法】在构建LPS诱导肠炎模型试验中,选取15只14日龄SPF雏鸡随机分为3组：对照组(Con)、低剂量脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)模型组(D_L)和高剂量脂多糖模型组(D_H),每组5只。对照组灌喂生理盐水,D_L和D_H组分别灌喂1和2 mg/kg BW LPS,连续处理3 d,取小肠组织,采用HE染色法观察小肠病理变化,采用实时荧光定量PCR检测白介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor α,TNF-α)mRNA表达量,筛选构建肠炎模型的最佳LPS剂量。在APS对肠黏膜损伤的保护试验中,将20只7日龄雏鸡分为4组：对照组(C)、脂多糖炎症组(L)、黄芪多糖组(A)和黄芪多糖抑制炎症组(A+L),每组5只。A和A+L组从7日龄到试验结束每...     

还原型谷胱甘肽对氟中毒小鼠附睾的影响

试验旨在研究还原型谷胱甘肽（reduced glutathione,GSH）对氟中毒小鼠附睾的影响。将50只3周龄ICR雄性小鼠随机分为5组,分别为对照组和4组染氟组。对照组饮用蒸馏水,染氟组分别供给含100 mg/L NaF的蒸馏水,自由饮水30 d。之后在染氟组中选择3组每日分别灌胃200、400和800 mg/（kg·只）GSH,同时各组小鼠再自由饮含氟水30 d。试验结束后,摘取小鼠附睾进行活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、GSH含量及谷胱甘肽过氧化物酶（GPx）、谷胱甘肽硫转移酶（GSTs）和谷胱甘肽还原酶（GR）活性检测,同时制作石蜡切片,HE染色后进行组织形态结构分析。结果显示,与对照组相比,100 mg/L NaF组精子密度、精子活力、GSH含量、GPx和GR活性均显著下降（P<0.05）,而GSH添加组较100 mg/L NaF组均有所升高;100 mg/L NaF组精子畸形率、ROS和MDA含量较对照组均显著升高（P<0.05）,而GSH添加组较100 mg/L NaF组均降低,其中800 mg/kg GSH组效果明显。与对照组相比,100 mg/L NaF组附睾头、附睾体及附睾尾管腔厚度升高,管腔内精子数量下降;GSH添加组附睾头、附睾体及附睾尾的管腔厚度与管腔内精子数量都有所恢复,其中800 mg/kg GSH组效果较好。综上所述,添加GSH后氟中毒小鼠谷胱甘肽抗氧化系统酶活性有所升高,附睾组织形态结构一定程度上有所恢复,对附睾有一定的改善作用。     

凉茶渣替代象草对育肥牛空肠组织形态、屏障功能以及菌群结构的影响

本试验旨在研究凉茶渣替代象草对育肥牛空肠组织形态、屏障功能以及菌群结构的影响.选取120头健康且体重相近的西门塔尔杂交肉牛,随机分为2个组,分别为对照组(饲喂基础饲粮)、试验组(50％凉茶渣替代部分象草),每组3个重复,每个重复20头.试验期共67 d,包括7 d的预试期,60 d的正试期.在试验期结束后,采集试验牛血...     

氟对小鼠附睾中成熟精子超微结构的影响

本试验探讨了氟对小鼠附睾中成熟精子超微结构的影响,为氟的生殖毒性研究与检测提供依据。选取8周龄性成熟雄性昆明小鼠20只,随机分为4组,对照组小鼠饮用蒸馏水,低、中和高氟组小鼠分别饮用含25、50和100 mg/L氟化钠的蒸馏水,于45 d后断颈处死小鼠,取小鼠附睾尾,经2.5%戊二醛固定后,采用透射电镜观察小鼠附睾中成熟精子的超微结构变化。与对照组相比,低氟组小鼠精子头部质膜断裂,部分脱落,个别线粒体肿胀、形态模糊;中氟组精子头部质膜脱落,顶体部分缺失,线粒体形状不规则,嵴间腔扩大;高氟组精子头部质膜脱落,线粒体排列不规则,出现空泡化,嵴结构模糊。结果表明,氟暴露小鼠附睾中成熟精子头、尾部中段均有不同程度的结构改变,尤以线粒体出现较明显的异常,且氟浓度越高,精子超微结构损伤越严重。     

不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及相关基因表达的影响

为研究不同生物素水平对3T3-L1脂肪细胞脂肪分解及相关基因表达的影响，本试验利用三联诱导法将3T3-L1细胞经诱导分化为3T3-L1脂肪细胞。当3T3-L1脂肪细胞密集后分别采用0（对照组）、0.2、0.5、1.0 μmol/L生物素处理，分别在12、24与48 h时检测细胞上清液中甘油释放量、脂肪甘油三酯水解酶（ATGL）、激素敏感性脂肪酶（HSL）、脂滴包被蛋白A （perilipin A）及脂肪分化相关蛋白（ADRP）相对表达量。结果显示，在12 h时，1.0 μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组（P<0.01），0.5、1.0 μmol/L组HSL基因mRNA相对表达量显著低于对照组（P<0.05），1.0 μmol/L组perilipin A、ADRP基因mRNA相对表达量均极显著高于对照组与0.2 μmol/L组（P<0.01）；在24 h时，各试验组甘油释放量、1.0 μmol/L组ATGL基因mRNA相对表达量均极显著低于对照组（P<0.01），0.5、1.0 μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量极显著高于对照组与0.2 μmol/L组（P<0.01）；1.0 μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于其他组（P<0.01）；在48 h时，1.0 μmol/L组甘油释放量、ATGL基因mRNA相对表达量均极显著或显著低于对照组（P<0.01；P<0.05），1.0 μmol/L组perilipin A基因mRNA相对表达量显著高于对照组与0.2 μmol/L组（P<0.05），0.5、1.0 μmol/L组ADRP基因mRNA相对表达量极显著高于对照组（P<0.01）。综上所述，生物素可通过促进perilipin A与ADRP表达，同时抑制ATGL与HSL表达，达到抑制脂肪分解的效果，且浓度为1.0 μmol/L时效果最佳。     

植物精油和柠檬酸复合物对肉鸡肠道屏障功能及炎症反应的影响

本试验通过研究饲粮中添加不同水平植物精油和柠檬酸复合物对肉鸡肠道屏障功能、血清细胞因子含量和关键免疫蛋白基因表达的影响,旨在探索植物精油和柠檬酸复合物在肉鸡生产上的适宜添加剂量。选用1日龄健康科宝肉鸡1 344只,随机分为4组（每组12个重复,每个重复28只鸡）,对照组饲喂基础饲粮,3个试验组（T1、T2、T3）分别饲喂添加0.8、1.0和1.5 kg/t的包被植物精油和柠檬酸复合物试验饲粮,试验期为42 d。试验结束当天,每个重复选取6只接近平均体重的肉鸡翅静脉采血,然后屠宰并取空肠、脾脏、肠系膜淋巴结（MLNs）。分别测定血清中D-乳酸（D-LA）、细胞因子的含量及二胺氧化酶（DAO）活性;并对空肠黏膜紧密连接蛋白以及脾脏和MLNs中Toll样受体（TLRs）的mRNA表达量进行测定。结果表明：与对照组相比,T2组肉鸡血清中D-LA含量和DAO活性均极显著降低（P<0.01）;T3组肉鸡血清中D-LA含量和DAO活性均显著降低（P<0.05）。T2和T3组肉鸡空肠封闭蛋白1（Claudin-1）的mRNA相对表达量均显著升高（P<0.05）,T2组闭合小环蛋白1（ZO-1）的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。T1组血清中IL-1β含量显著降低（P<0.05）,MLNs中TLR4 mRNA表达量显著降低（P<0.05）;T2组血清中IL-1β含量极显著降低（P<0.01）,IL-2含量显著提高（P<0.05）,脾脏和MLNs中TLR4 mRNA相对表达量极显著或显著降低（P<0.01;P<0.05）;T3组血清中IL-1β含量极显著降低（P<0.01）,TNF-α含量显著降低（P<0.05）,IL-2含量显著升高（P<0.05）,脾脏和MLNs中TLR4 mRNA相对表达量极显著降低（P<0.01）。与T1组相比,T2组血清中D-LA含量和DAO活性均显著降低（P<0.05）,TNF-α含量显著降低（P<0.05）;T3组血清中IL-1β含量显著降低（P<0.05）。综上所述,饲粮中添加植物精油和柠檬酸复合物能够提高肉鸡肠道紧密连接蛋白的表达,降低肠道通透性,下调促炎细胞因子的表达,进而增强肠道屏障功能,缓解机体炎症。根据本试验结果,推荐科宝肉鸡饲粮植物精油和柠檬酸复合物适宜添加量为1.0 kg/t。     

三味清热类中药水提物对肉仔鸡肠道菌群和黏膜屏障功能的影响

为了研究单味中药对肠道菌群和肠黏膜损伤的调节和修复作用,选用金银花、连翘和紫花地丁三味清热类中药对大肠杆菌所致肉仔鸡肠道菌群失调和黏膜屏障功能障碍进行治疗,为单味中药在提高肠道细菌的有益菌群和保护肠黏膜屏障提供可靠的理论依据。选取100只1日龄雄性肉仔鸡,分成5组,每组20只,空白组正常饲喂,模型组和中药组于15~17 d腹腔注射大肠杆菌O₇₈（1.0×10⁶ CFU/mL）,1 mL/只。中药组在第18天开始饮用中药,连续7 d,各中药组动物给药量为生药量1 g/kg。在给药后第7和14天,每组取6只鸡心脏釆血,采用ELISA法按照试剂盒说明进行D-乳酸（D-LA）、二胺氧化酶（DAO）和内毒素（ET）的检测。采集空肠肠段和盲肠。采用实时荧光定量PCR检测空肠紧密连接蛋白（（闭合小环蛋白-1（ZO-1）、闭锁蛋白（Occludin）和闭合蛋白-1（Claudin-1））的mRNA的相对表达量。盲肠送检测公司检测中药对盲肠菌群多样性的影响。试验结果表明,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低给药后第7和14天肉仔鸡血清（DAO活性）、D-LA和ET含量。在给药后第7天,金银花组ZO-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）;连翘组Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）;在给药后第14天,金银花组ZO-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,紫花地丁组ZO-1和Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）,连翘组ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量显著升高（P<0.05）。金银花、紫花地丁和连翘均可提高给药后第7天厚壁菌门占比（P<0.05）,金银花、紫花地丁可提高给药后第14天拟杆菌门占比（P<0.05）,金银花、紫花地丁抑制给药后第7和14天变形菌门的增殖,紫花地丁和连翘抑制给药后第7天放线菌门的生长（P<0.05）,连翘、金银花可以显著提高给药后7和14 d乳酸杆菌占比,紫花地丁可以显著提高给药后7 d乳酸杆菌占比（P<0.05）,紫花地丁显著提高给药后第14天未分类毛螺旋菌种相关菌属的占比。综上,金银花、紫花地丁和连翘均可以降低肉仔鸡血清DAO活性、D-LA和ET含量,减少毒素入侵。金银花可以提高ZO-1、Occludin的mRNA相对表达量,连翘可提高ZO-1、Claudin-1和Occludin的mRNA相对表达量,保护肠道黏膜;紫花地丁可提高ZO-1、Claudin-1的mRNA相对表达量。金银花、紫花地丁和连翘均可使肠道OTU数目增多,在不同程度上促进有益菌群繁殖,抑制致病菌群生长,具有调节肠道菌群结构的作用。     

鼠源重组UBC13蛋白对脂多糖诱导的小鼠急性炎症的影响

试验旨在探讨鼠源重组UBC13蛋白对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的小鼠急性炎症的影响。将24只SPF雌性小鼠随机分成4组:PBS组,LPS模型组,重组UBC13蛋白高、低剂量组(分别为100和25μg/只),每组6只。LPS模型组与各蛋白剂量组腹腔注射20 mg/kg LPS,PBS组腹腔注射等体积PBS;注射结束1 h后,各蛋白组按相应剂量背部皮下多点注射重组UBC13蛋白,PBS组与LPS模型组注射等体积PBS。给予蛋白24 h后处死小鼠。收集小鼠肺脏、脾脏、胸腺及肝脏组织,计算脏器指数,HE染色观察组织病理学变化,实时荧光定量PCR检测肺脏、脾脏、胸腺和肝脏中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA的相对表达量,以及肺脏中iNOS mRNA的相对表达量,综合评价鼠源重组UBC13蛋白对LPS诱导小鼠急性炎症的影响。结果显示,与PBS组相比,LPS模型组小鼠肺脏、脾脏及肝脏指数均显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),且肺脏、脾脏和肝脏组织均出现病理变化。实时荧光定量PCR结果显示,与PBS组相比,LPS模型组肺脏、脾脏、胸腺和肝脏中IL-1β、TNF-α、IL-6 mRNA相对表达量均极显著升高(P<0.01),肺脏中iNOS mRNA相对表达量也极显著升高(P<0.01);与LPS模型组相比,UBC13蛋白高剂量组肺脏、脾脏和肝脏中病理变化明显改善,肺脏、肝脏、脾脏中IL-1β、TNF-α、IL-6及肺脏中iNOS mRNA表达量均极显著降低(P<0.01);胸腺中TNF-αmRNA表达量显著降低(P<0.05),IL-6 mRNA和IL-1β表达量极显著降低(P<0.01)。表明鼠源重组UBC13蛋白可下调炎性因子的表达,从而改善LPS诱导的小鼠急性炎症反应。     

沙门菌感染小鼠氧化应激模型的建立及其分子机制研究

试验旨在建立鼠伤寒沙门菌诱导的昆明小鼠氧化应激模型并探讨其分子机制。将18只小鼠随机分为3组,每组6只,分别灌胃生理盐水（对照组）、低剂量沙门菌菌液（试验组1）和高剂量沙门菌菌液（试验组2）。灌胃24 h后解剖小鼠并采集样品,检测血清氧化应激指标,观察肝脏、十二指肠、空肠和回肠切片并评分,测定肝脏和十二指肠抗氧化酶、抗氧化信号通路关键蛋白和紧密连接蛋白的mRNA表达量。结果表明,与对照组相比,试验组2小鼠血清中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GPx1）活力显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,而丙二醛（MDA）含量极显著上升（P<0.01）;试验组1和2小鼠十二指肠表现为绒毛断裂脱落和肠道固有层溃疡坏死,肝脏出现炎性细胞浸润、肝索紊乱和点状坏死;试验组2小鼠十二指肠和肝脏中锰超氧化物歧化酶（SOD2）、GPx1、血红素加氧酶（HO-1）、自噬相关蛋白（p62）、核因子E2相关因子2（Nrf2） mRNA表达量显著或极显著降低（P<0.05;P<0.01）,十二指肠闭锁小带蛋白1（ZO-1）和密封蛋白（OCLN）以及肝脏ZO-1和紧密连接蛋白-8（CLDN8） mRNA表达量极显著降低（P<0.01）。综合上述试验结果,使用高剂量沙门菌成功建立了小鼠氧化应激模型,并发现高剂量沙门菌可能通过降低p62和Nrf2的转录来抑制十二指肠和肝脏中抗氧化酶的表达,造成十二指肠和肝脏细胞屏障功能损伤。     

绵羊附睾褪黑素受体1的表达与定位

为研究褪黑素受体1（MT1）在不同年龄绵羊附睾中的表达模式，选用幼龄绵羊（2~3月龄）、青年绵羊（6~8月龄）和成年绵羊（2~3岁）的附睾，采用实时荧光定量PCR和免疫组化技术检测不同年龄绵羊附睾各部位MT1基因mRNA的表达量和MT1的分布情况。结果表明：幼龄绵羊附睾尾MT1基因的转录水平极显著高于附睾头和附睾体（P<0.01）；青年绵羊附睾体和附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头（P<0.05）；成年绵羊附睾尾MT1基因的转录水平显著高于附睾头和附睾体（P<0.05），附睾各部位MT1基因的转录水平随年龄增长呈明显降低趋势；定位结果显示，MT1在各年龄组绵羊附睾的各个部位均有分布，且主要分布在附睾上皮细胞中。综合上述结果，不同年龄绵羊附睾的不同部位均有MT1表达和分布，并随年龄增长各部位的表达量降低，相同年龄绵羊附睾尾MT1的表达水平较高。     

白藜芦醇通过激活去乙酰化酶1/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶信号通路影响牛脂肪细胞凋亡

本试验旨在研究植物提取物白藜芦醇(RES)对牛皮下脂肪细胞凋亡率以及去乙酰化酶1(SIRT1)/腺苷一磷酸激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路关键因子的mRNA和蛋白质表达量的影响。选取18月龄鲁西黄牛的皮下前体脂肪细胞,在细胞分化的第0天,更换为RES浓度分别为0(对照)、100、200和400μmol/L的培养液处理48 h,每组设3个重复。应用Hoechst33342染色检测细胞凋亡的形态学变化,流式细胞分析仪检测细胞凋亡率,荧光定量PCR(q PCR)和免疫印迹试验(Western-blot)分别检测SIRT1/AMPK信号通路上的关键因子SIRT1、A MPKα、叉头转录因子1(Fox O1)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)的mRNA和蛋白质表达量,并利用油红O染色鉴定脂肪细胞。结果表明,与对照组相比:不同浓度RES处理后的牛皮下脂肪细胞凋亡率均极显著增高(P0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3、Bax的mRNA表达量均显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Bcl-2的mRNA表达量极显著降低(P0.01);不同浓度RES处理后的SIRT1、AMPKα、caspase-3的蛋白质表达量均显著或极显著提高(P0.05或P0.01);200和400μmol/L RES处理后,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量显著或极显著提高(P0.05或P0.01),Bax的蛋白质表达量极显著提高(P0.01),Bcl-2的蛋白质表达量极显著降低(P0.01)。100μmol/L RES处理后时,Fox O1的mRNA和蛋白质表达量以及Bcl-2、Bax的蛋白质表达量均与对照组差异不显著(P0.05)。由此可见,RES通过激活SIRT1/AM PK信号通路,同时激活通路下游的Fox O1,促进了牛皮下脂肪细胞的凋亡,为通过营养调控技术降低牛皮下脂肪沉积提供了一定的理论基础。     

枣多糖提取物对环磷酰胺所致的蛋雏鸡肠黏膜机械损伤的修复作用

选取体质量相近且健康的1日龄京红1号蛋鸡750只,适应饲养6 d后随机分为5组,每组6个重复,每个重复25只鸡。Ⅰ组为空白对照组,在8~10日龄注射0.35 mL生理盐水,饲喂基础日粮。Ⅱ~Ⅴ组在8~10日龄时注射100 mg/kg环磷酰胺(Cy),1次/d,诱导肠黏膜机械屏障损伤,分别在基础日粮中添加0,400,800,1 600 mg/kg枣多糖提取物(jujube polysaccharide extract, JPE),试验期5周。结果显示,Cy可使闭合蛋白(Claudin-1)和咬合蛋白(Occludin)两种紧密连接蛋白表达量极显著降低(P<0.01),而JPE则可以通过抑制白介素(IL)-1β和肿瘤坏因子(TNF)-α的分泌,促进黏蛋白(Mucin)-2的表达来促进紧密连接蛋白的表达,且800~1 600 mg/kg效果较好。由此得出,JPE可以显著缓解Cy所致的肠黏膜机械屏障损伤,降低空肠的通透性,抑制有害物质进入肠道,保护肠道屏障的完整性,增强免疫屏障功能。     

蜂胶对细菌脂多糖刺激下奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接蛋白的影响

本试验旨在研究中国蜂胶乙醇提取物（ethanol extract of Chinese propolis，EECP）对细菌脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）刺激下体外培养奶牛乳腺上皮细胞炎症相关基因mRNA转录水平和紧密连接渗透性的影响。EECP中总酚酸和总黄酮含量测定采用福林酚法和硝酸铝法，并建立LPS诱导奶牛乳腺上皮细胞（bovine mammary epithelial cells，MAC-T）炎症模型，采用CCK-8法测定EECP对MAC-T相对增殖率的影响，利用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）评估EECP对LPS诱导的MAC-T细胞炎症相关因子（IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β）相对mRNA转录水平；以及对紧密连接蛋白（occludin、ZO-1）相对mRNA转录水平进行检测，并进一步利用免疫荧光技术对紧密连接膜蛋白进行定位，确定EECP对LPS诱导MAC-T细胞炎症紧密连接渗透性的影响。结果显示：EECP中总酚酸含量为106.35 mg没食子酸当量（GAE）·g^-1、总黄酮含量为320.85 mg芦丁当量（RE）·g^-1；CCK-8结果显示EECP的安全浓度为0~15 μg·mL^-1，并可有效提高LPS刺激下MAC-T的活力；LPS刺激显著增加了细胞炎症相关因子IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β mRNA的转录量（P<0.001）；但2.5~15.0 μg·mL^-1 EECP预处理显著降低了IL-6、IL-8、TNF-α和IL-1β mRNA的转录量；与此类似，LPS刺激显著抑制了紧密连接蛋白基因（occludin、ZO-1）mRNA的转录量（P<0.01），而EECP预处理后紧密连接蛋白基因（occludin和ZO-1）mRNA的转录量显著增加（P<0.05）；免疫荧光染色试验也证实EECP能通过上调紧密连接蛋白（occludin、ZO-1）的表达，缓解LPS诱导的乳腺上皮细胞屏障功能紊乱。该结果证实，EECP对细菌脂多糖诱导奶牛乳腺上皮细胞炎症具有良好的保护作用，这为利用中国蜂胶预防奶牛乳腺炎提供了试验基础。     

辣木叶总黄酮对小鼠溃疡性结肠炎防治作用的研究

【目的】以葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的溃疡性结肠炎(UC)小鼠为模型,探究辣木叶总黄酮(MOLF)对UC的防治作用。【方法】将50只BALB/c小鼠随机分为5组:对照组、DSS组(模型组)和MOLF-L(25 mg/kg)、MOLF-M(50 mg/kg)、MOLF-H(100 mg/kg)处理组,每组10只。小鼠通过饮用4% DSS诱导UC模型,各MOLF处理组灌胃相应剂量药物0.2 mL,对照组和DSS组灌以等体积的生理盐水,每天1次,连续7 d。每天记录各组疾病活动指数(DAI),在末次给药的次日经眼眶静脉丛采血,分离血清测定白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-10(IL-10)、高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和内毒素(LPS)含量;小鼠脱颈处死后取结肠组织进行HE染色观察组织形态、PAS染色观察组织杯状细胞数量变化;实时荧光定量PCR法检测结肠组织中IL-1β、TNF-α、IL-10、HMGB1 mRNA表达水平;免疫荧光法检测肠黏膜闭锁连接蛋白-1(ZO-1)和闭合蛋白(Occludin)表达情况;Western blotting分析凋亡相关蛋白cleaved-caspase 3、Bcl-2、Bax的表达水平。【结果】UC小鼠造模成功,DSS组小鼠体内LPS、炎性因子含量、cleaved-caspase 3和Bax蛋白表达量与对照组相比差异极显著(P＜0.01);不同剂量MOLF均可以改善UC小鼠体内炎症状况,尤以MOLF-H组效果最佳:与DSS组相比,DAI评分以及血清中LPS含量极显著降低(P＜0.01),小鼠血清和结肠组织中促炎因子IL-1β、TNF-α、HMGB1含量和mRNA表达量均极显著降低(P＜0.01),抗炎因子IL-10的表达量极显著升高(P＜0.01),且cleaved-caspase 3和Bax的表达量极显著上调,Bcl-2的表达量极显著下调(P＜0.01)。此外,MOLF可以改善结肠黏膜水肿、炎性细胞浸润情况,维持杯状细胞数量及其形态,增加ZO-1和Occludin蛋白表达量,且这些作用具有剂量依赖性。【结论】MOLF对DSS诱导的UC具有显著的防治作用,这可能与其抑制炎症并维护肠黏膜屏障的完整性有关。