蜂王浆高产蜜蜂与意大利蜜蜂哺育蜂唾液腺蛋白质组分析

【目的】比较蜂王浆高产蜜蜂（浆蜂,Apis mellifera liguatica）和意大利蜜蜂（意蜂,Apis mellifera liguatica）哺育蜂头唾腺、胸唾腺的蛋白质组差异,揭示唾液腺调控蜂王浆生产的分子基础,为解析浆蜂蜂王浆高产机理提供依据。【方法】解剖浆蜂、意蜂哺育蜂头唾腺和胸唾腺,提取蛋白质、液内酶切并进行液相色谱与串联质谱蛋白质组分析。采用MaxQuant软件对质谱数据定量和定性分析,利用Perseus软件对结果进行生物信息学分析。使用SignalP预测分泌性蛋白。利用ClueGO软件对唾液腺蛋白质组进行生物学进程和代谢通路富集分析。【结果】浆蜂和意蜂哺育蜂唾液腺共鉴定到2 335个蛋白,其中头唾腺1 823个,胸唾腺1 922个。浆蜂、意蜂头唾腺和胸唾腺核心蛋白表达谱相似,主要参与RNA代谢、核酸代谢、ATP代谢、蛋白质的翻译、翻译调控和分解代谢,为腺体行使生物学功能提供了必要的代谢能和核酸、蛋白质等原料。浆蜂、意蜂哺育蜂头唾腺和胸唾腺主成分分析（PCA）显示二者唾液腺分子基础在选育过程中出现了一定程度的分化。意蜂、浆蜂头唾腺分别上调表达254和333个蛋白,意蜂小分子、碳水化合物代谢等通路上调,浆蜂有机氮化合物合成、细胞氧化还原稳态、氨基酸代谢、氧化还原等通路上调,证明浆蜂头唾腺细胞蛋白质合成、氨基酸代谢旺盛、供能加强。意蜂、浆蜂胸唾腺分别上调表达412和162个蛋白,意蜂氧化磷酸化、翻译调控等通路上调,浆蜂氧化磷酸化、对有毒物质的反应等通路上调,说明浆蜂胸唾腺细胞抗逆水平提高。浆蜂、意蜂唾液腺共鉴定到43个分泌性蛋白,其中有15个也在蜂王浆中得到鉴定,蜂王浆主蛋白1、2、3、4、5、7同时在头唾腺和胸唾腺中检出,表明头唾腺和胸唾腺均参与了蜂王浆主蛋白的合成;参与花蜜转化的α-葡萄糖苷酶和参与化学信息素合成与释放的气味结合蛋白3、13、17、21同时在头唾腺和胸唾腺中检出,为花蜜转化和信息素合成奠定了基础。蜂王浆主蛋白1、2、3、7,昆虫储存蛋白70a、110,气味结合蛋白3、13、17、21以及与幼虫先天免疫紧密相关的转铁蛋白、载脂蛋白III样蛋白均在浆蜂唾液腺中高表达,说明浆蜂唾液腺信息素和蜂王浆蛋白质合成较意蜂旺盛。【结论】浆蜂、意蜂唾液腺具有相似的核心蛋白质组以保证蜂王浆蛋白质、信息素和转化酶的合成与分泌。经过长期选育,浆蜂、意蜂唾液腺分子基础出现差异,浆蜂哺育蜂唾液腺较意蜂蛋白质合成、氨基酸代谢旺盛,细胞供能、抗逆性加强且分泌性蛋白普遍在浆蜂唾液腺上调表达,为浆蜂提供了更加持久和高效的蛋白质合成系统,促成了蜂王浆的高产。     

王浆高产蜜蜂和原种意大利蜜蜂咽下腺发育蛋白质组分析

 【目的】对王浆高产蜜蜂（浆蜂）（A. m. ligustica）和原种意大利蜜蜂（原意）（A. m. ligustica）1、3、6日龄工蜂咽下腺进行蛋白质组研究,揭示咽下腺在此阶段的发育特征。【方法】采用双向电泳方法对浆蜂和原意咽下腺进行蛋白质组研究,通过与已鉴定蛋白功能的咽下腺和蜂王浆蛋白质组图谱比较,推断部分蛋白的功能。【结果】浆蜂咽下腺在3个日龄表达的蛋白数（210、192、230）分别显著的高于原意（169、188、212）,两蜂种均在6日龄表达蛋白最多（P＜0.05）。浆蜂咽下腺3个日龄表达的共有蛋白数为119个,其中21个蛋白表达量随咽下腺的发育显著上调,14个蛋白显著下调;原意咽下腺3个日龄表达的共有蛋白数为107个,其中15个蛋白表达量随咽下腺的发育显著上调,19个蛋白显著下调（P＜0.05）。1日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为145个,其中28个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,14个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为65个,原意为24个;3日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为138个,其中31个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,19个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为54个,原意为50个;6日龄浆蜂和原意咽下腺共有蛋白为175个,其中44个蛋白点浆蜂表达量显著高于原意,25个蛋白点原意表达量显著高于浆蜂,浆蜂特有蛋白为55个,原意为37个（P＜0.05）。与原意相比,浆蜂咽下腺发育3个日龄特有蛋白点总数为72个。从3日龄开始在浆蜂和原意咽下腺的蛋白表达谱中出现大量的王浆主蛋白点。【结论】从工蜂羽化到6日龄这一阶段内,浆蜂咽下腺蛋白表达明显比原意活跃,6日龄是2蜂种表达最为活跃的阶段。咽下腺发育过程中的共有蛋白为咽下腺发育所必需的管家蛋白,但它们的表达模式存在较大差异。不同日龄的特异蛋白表明咽下腺在不同的发育阶段需要不同的蛋白来调控。两蜂种工蜂咽下腺都从3日龄就开始分泌蜂王浆。     

甘肃河西蜜蜂就地室外越冬的研究

连续四年蜜蜂就地室外越冬的试验研究表明:只要王好、群强、蜜足、安静,适时喂越冬饲料,适时适当的内外包装,蜜蜂就地室外越冬是成功的。损失率和下降率可以分别控制在10％和30％左右。3月下旬开始繁蜂,能达到及时授粉的要求。每群收蜜35—40公斤,繁蜂1:10—15倍(以脾计)。同时获得了投资少,成本低,方法简便易行,经济效益显著的效果。     

南疆日光温室桃树熊蜂授粉试验初报

以新疆南疆日光温室桃和油桃为研究对象,进行熊蜂授粉技术试验.结果表明,熊蜂具有适合为设施作物授粉的形态结构和独特的生物学特性,在南疆日光温室中,出巢活动温度9～12℃,比蜜蜂低5～6℃,日工作时间比蜜蜂长2～3 h;熊蜂授粉的座果率比蜜蜂和人工授粉分别提高9.5;和47.3;;单位面积产量比蜜蜂授粉提高15.3;,单果重提高14.7;,果实可溶性固形物含量提高9.9;,从而提高果实品质和商品性.由此可见,熊蜂更适合在南疆设施环境中为桃树授粉.     

不同人工育王方式对工蜂的形态差异影响

采集区域产卵和自然产卵2种不同人工育王方式培育下的蜜蜂(Apis L.)群各3群。参照Ruttner提出的38个蜜蜂形态指标进行测定,每群测定15只工蜂,每只测定40个指标。结果显示,18个跟蜜蜂体型大小相关的指标中,有15个指标试验组大于对照组,其中跗节长、第三腹板长的差异达到显著水平;而吻长、胫节长、跗节宽、第三腹板蜡镜长、第三腹板蜡镜斜长、第三腹板蜡镜间距、第六腹板长、第六腹板宽的差异达到极显著水平,说明控制蜂王在特定区域产卵的方法能使其后代工蜂的体型增大;而试验组的肘脉a和肘脉b都减小,11个翅脉角中有7个减小,后翅翅够数也减小,说明不同的育王方式能引起蜜蜂翅型和翅脉的变化,但多数差异不显著。在8个跟蜜蜂体色相关的指标中,试验组的小盾片颜色K、颜色B和喙的颜色Lab1均大于对照组,差异达到极显著水平,而试验组第四背板颜色小于对照组,差异达到极显著水平,说明不同的育王方式能引起蜜蜂体色不同程度的变化。由此表明,不同的人工育王方式能使后代工蜂的形态发生不同程度的改变,这为培育优质蜂王提供了参考。     

王浆高产蜜蜂和原种意大利蜜蜂雄蜂卵期发育蛋白质组分析

 【目的】比较王浆高产蜜蜂（Apis mellifera L.浆蜂）与原种意大利蜜蜂（Apis mellifera L. 原意）雄蜂卵期3 d发育阶段蛋白质组的特点。【方法】根据双向电泳所得表达谱,对两个蜂种雄蜂卵期发育的蛋白质的种类、等电点、分子量和表达量进行分析。【结果】浆蜂雄蜂卵期所表达的蛋白数（332、377和339）显著的高于相应日龄原意雄蜂卵期3个日龄所表达的蛋白数（283、305和293）（P＜0.05）,其中在两蜂种3个日龄共同表达的蛋白数为254个。通过雄蜂卵期3 d发育过程蛋白质表达谱的比较,两个蜂种分别检测到274、298 和285个共有蛋白。在这些共有蛋白中,浆蜂雄蜂分别有54、42和47个蛋白的表达量显著高于（P＜0.05）原意,18、75和61个蛋白显著低于（P＜0.05）原意。同时,浆蜂还检测到58、79和54个特异蛋白,而原种意大利蜜蜂也分别检测到9、7、8个特异蛋白。【结论】浆蜂和原意雄蜂卵期发育的蛋白质组表达谱存在显著差异,但都在2日龄蛋白表达最活跃;两个蜂种雄蜂卵期发育所表达的共有蛋白可能是其发育所必须的管家蛋白,但它们的表达模式存在较大差异,不同日龄的特异蛋白表明雄蜂卵在不同的发育阶段需要不同的蛋白来调控;浆蜂和原意雄蜂卵期表达的特异蛋白是否是与王浆高产相关的功能蛋白,有待进一步的研究。     

无刺蜂蜂胶乙醇提取物的体外抗氧化及抗炎活性

【目的】 无刺蜂(stingless bees)是热带和亚热带地区重要的授粉昆虫之一,以尾部无蛰针为典型特征,其蜂胶采集量较意大利蜜蜂（ Apis mellifera ligustica ）更多,然而其蜂胶活性研究却相对匮乏。本文以来源于马来西亚无刺蜂 ( Heterotrigona itama )采集蜂胶的乙醇提取物(ethanol extract of H. itama propolis, EEHI)为研究对象,旨在探究其体外抗氧化和抗炎活性。【方法】 采用福林酚法和硝酸铝法测定EEHI中总酚酸和总黄酮含量,并采用DPPH和ABTS ^+·自由基清除能力评价EEHI的体外抗氧化能力;在此基础上,采用细菌脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞RAW 264.7炎症模型,通过CCK-8法检测EEHI对细胞相对存活率的影响,在保证EEHI对细胞无细胞毒性作用基础上,分别采用Griess法和实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术评估EEHI对LPS诱导的RAW 264.7细胞中炎症介质一氧化氮（NO）释放量的影响以及其对炎症因子（ IL-1β 、 IL-10 和 INOS ）和抗氧化基因（ HO-1 ）信使RNA表达的影响;进一步利用免疫印迹和免疫荧光方法,以NF-κB炎症信号通路为切入点,研究EEHI对LPS诱导巨噬细胞中p-IκΒ α 和IκΒ α 蛋白表达以及NF-κB-p65蛋白移位的影响,从而探究EEHI潜在的抗炎机理。 【结果】 EEHI中总酚酸和总黄酮含量分别为54.70 mg GAE·g^-1和116.20 mg QE·g^-1;DPPH和ABTS^+·自由基清除能力IC₅₀值分别为275.60和 284.00 μg·mL^-1。EEHI对RAW 264.7细胞的安全浓度为0—40 μg·mL^-1。在LPS诱导的Raw 264.7细胞炎症模型中,相对于LPS刺激组,0—40 μg·mL^-1的EEHI以浓度依赖方式显著地抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞中NO的释放量,且降低了细胞中炎症因子 IL-1β 、 IL-10 和 INOS 的基因表达量,并增强了抗氧化基因 HO-1 的表达。进一步研究发现,0—40 μg·mL^-1的EEHI以浓度依赖方式显著抑制了LPS诱导的RAW 264.7细胞IκΒ α 蛋白的磷酸化,且40 μg·mL^-1的EEHI显著降低了NF-κB-p65蛋白的核移位现象,因此推测EEHI可能是通过抑制LPS诱导的NF-κB信号通路的激活进而发挥了体外抗炎活性。 【结论】 无刺蜂蜂胶乙醇提取物中含有大量多酚类化合物,具有较好的抗炎和抗氧化效果,极具开发利用价值。     

蜜蜂繁殖性状编码RNA和非编码RNA的研究进展

蜜蜂蜂王的繁殖性状是蜂群产生经济效益的基础性状，繁殖性状的分子机制研究是蜜蜂遗传育种领域的重要课题。在蜜蜂的重要繁殖活动产卵和卵巢激活过程中，编码RNA和非编码RNA发挥了重要作用。介绍了蜜蜂繁殖性状相关的信使RNA、小RNA、长链非编码RNA、环状RNA的基本特征和功能，综述了编码RNA和非编码RNA对蜜蜂卵巢激活和产卵过程的调控机制。蜜蜂繁殖性状RNA的研究对于阐明蜜蜂繁殖性状的分子遗传机制意义重大，也为挖掘繁殖性状分子标记基因、开展分子育种工作，进而提高蜜蜂繁殖性能、增加养蜂经济效益奠定基础。     

Comparative Analyses of Proteome Complement Between Worker Bee Larvae of High Royal Jelly Producing Bees (A. m. ligustica) and Carniolian Bees (A. m. carnica)

This study is to compare the protein composition of the high royal jelly producing bee (A. m. ligustica) with that of Carniolian bee (A. m. carnica) during their worker larval developmental stage. The experiment was carried out by two-dimensional gel electrophoresis. The results showed that significant higher numbers of total proteins (283) were detected in larvae of high royal jelly producing bees (Jelly bee) than those of Camiolian bees (152) on 2-d-old larvae. Among them, 110 proteins were presented on both strains of bee larvae, whereas 173 proteins were specific to larvae of Jelly bees, and 42 proteins were exclusive to Carniolian larvae. However, on the 4th d, a significant higher number of total proteins (290) were detected in larvae of Jelly bees than those of Camiolian bees (240), 163 proteins resolved to both bee larvae, and 127 proteins were specific to Jelly bees and 77 proteins to Camiolian bees. Until the 6th d, also a significant higher number of total proteins (236) were detected in larvae of Jelly bees than those of Carniolian bees (180), 132 proteins were constantly expressed in two bee larvae, whereas 104 and 48 proteins are unique to Jelly bee and Camiolian bee larvae, respectively. We tentatively concluded that the metabolic rate and gene expression of Jelly bees larvae is higher than those of Carniolian bees based proteins detected as total proteins and proteins specific to each stage of two strains of bee larvae. Proteins constantly expressed on 3 stages of larval development with some significant differences between two bee strains, and proteins unique to each stage expressed differences in term of quality and quantity, indicating that larval development needed house keeping and specific proteins to regulate its growth at different development phage, but the expression mold is different between two strains of larval development.     

葵花粉与黄豆粉不同配比饲料对蜜蜂初生重的影响

利用不同配比的葵花粉和黄豆粉饲料饲喂蜂群,测定后代工蜂的初生重。结果显示,饲喂100%葵花粉和饲喂＂75%葵花粉＋25%黄豆粉＂的蜂群,所育工蜂的初生重差异不显著;与饲喂＂70%葵花粉＋30%黄豆粉＂、＂65%葵花粉＋35%黄豆粉＂和饲喂100%黄豆粉的蜂群相比差异显著;本试验结果表明,不同比例花粉蛋白质营养水平对工蜂初生重具有显著的影响。     

王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.)卵期发育蛋白质组分析

 【目的】对中国特有王浆高产蜜蜂(Apis mellifera L.)工蜂的3 d卵期进行蛋白质组研究，以探明该蜂种卵期不同发育阶段蛋白质表达调控方面的一些特点。【方法】采用双向电泳法对王浆高产蜜蜂工蜂卵期蛋白质组进行研究。【结果】卵期发育的3 d中，按顺序分别检测到160个、195个、176个蛋白，这些蛋白的分子量在17～80 kD之间，等电点范围在4.00～8.40之间。其中44个蛋白在３ d的卵期中均有表达，36%的共有蛋白随卵期发育呈上调趋势，而14%的共有蛋白随卵期发育呈下调趋势，另有39%的共有蛋白表达量在2日龄达到顶峰。结果还显示每天分别有89个、77个和80个特异的蛋白表达。除共有及特有蛋白外，还有24个蛋白在1日龄和2日龄表达而在3日龄关闭；49个蛋白在2日龄和3日龄表达而在1日龄关闭；仅有3个蛋白斑点是在2日龄关闭，而在1日龄和3日龄表达。【结论】卵期发育是一个动态有序的基因调控与表达过程，且发育第2天的卵蛋白表达最活跃；卵期3 d中共有的表达显示这些蛋白是调控王浆高产蜜蜂卵期发育必需的保守蛋白；不同阶段表达的特异性蛋白说明不同发育阶段的卵需要特异的蛋白来调控。     

王浆高产蜜蜂（Apis mellifera L.）工蜂幼虫发育期蛋白质组分析

 【目的】20世纪90年代中国成功培育出的王浆高产蜜蜂（Apis mellifera L.）是当今世界最优良的蜂种,使中国的王浆年产量高达2 600多吨,占世界总产量的90%以上,稳居世界第一,通过对该蜂种不同发育日龄工蜂幼虫的蛋白质组进行研究,以探明其发育机理。【方法】采用双向电泳法对王浆高产蜜蜂（Apis mellifera L.）不同发育期的工蜂幼虫进行蛋白质组研究。【结果】在幼虫期6 d的发育过程中,2日龄、4日龄、6日龄幼虫中分别检测到了262、418、194个蛋白点。这些蛋白的分子量在12.2～88.2 kD的较大范围之间,等电点在pH 4.00～9.24之间。有84个蛋白在幼虫期整个发育过程中均有表达,其中33%呈上调趋势,21%呈下调趋势,46%蛋白的表达没有规律。2日龄、4日龄、6日龄幼虫中分别有88、209、63个特异表达的蛋白。除此之外,有84个蛋白在幼虫发育的6日龄表达关闭,而在2日龄和4日龄幼虫中表达;有41个蛋白在2日龄表达关闭,而在4日龄和6日龄中表达;仅有6个蛋白在4龄日表达关闭,而在2日龄和6日龄表达。【结论】幼虫的发育过程有大量基因参与表达和调控,是一个复杂而动态有序的过程,且发育到4日龄的幼虫蛋白表达最为活跃。幼虫整个发育过程中的共有蛋白是发育必需的保守蛋白。幼虫不同的发育阶段由不同的特异蛋白进行调控。     

Bees have rules

Honey bees frequently dance with some view of the sky, orienting themselves to the sun or natural patterns of polarized skylight. Three new conventions have been discovered in the dance language which are used in these circumstances to eliminate potential ambiguity in the dance message.     

Bees have magnetic remanence

Honey bees orient to the earth's magnetic field. This ability may be associated with a region of transversely oriented magnetic material in the front of the abdomen. The magnetic moment apparently develops in the pupal state and persists in the adults.     

电取蜂毒对意蜂温驯性的影响

用黑棉绒球测定意蜂攻击行为,研究巢门前和巢内电取蜂毒对意蜂温驯性的影响。结果表明:巢门前每5d和巢内每3d取毒1次,取毒组意蜂攻击测定球1min所留下的螫刺数比未取毒组分别少45.5％和24.3％;巢内每3d和每1d取毒1次,取毒后立即测定,取毒组的螯刺数比未取毒组分别少68.2％和63.6％;取毒后立即测定的螫刺数比2h后测定的分别少67.5％和66.2％。以上差异显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)。由此可见,电取蜂毒可使意蜂更温驯,取毒后意蜂的即刻状态最温驯。电取蜂毒不会给意蜂群开箱管理造成不便。     

Venom Collection from Honey Bees

A device that provides an electric shock makes it possible to collect pure venom from several thousand honey bees (Apis mellifera). The collection apparatus fits underneath the brood chamber of a colony of bees and may be moved from hive to hive. Each colony is "milked" for 5 minutes. An average of 20 hives must be "milked" to obtain 1 gram of venom. Under optimum conditions this quantity of venom is produced by 10,000 worker bees.     

电取蜂毒对意大利蜜蜂寿命的影响

３、６、９、１２、１５、１８、２１、２４、２７、３０日龄意蜂工蜂取毒后，其寿命均显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜０．０１）缩短．３－３０日龄取毒的工蜂总体寿命缩短９．４７％，差异极显著（Ｐ＜０．０１）．因此，利用意蜂生产蜂毒，应考虑工蜂寿命缩短问题．