现代商品仔猪传代肾细胞株的培育与应用研究

细胞系是动物病毒分离培养的重要载体。本研究以现代商品化仔猪肾脏为原始材料,拟培育新的细胞系用于动物病毒的分离和培养。利用胰酶消化法和差速贴壁相结合方法,分离纯化仔猪肾上皮细胞,并在体外进行传代培养和筛选。结果显示,试验成功得到一株可以连续传代的细胞株,命名为SDPK-D,且已在体外连续传代90代。SDPK-D细胞株F33和F83代倍增时间分别为40.9和32.7 h,细胞活率分别为97.55%和98.86%,8 h细胞贴壁率分别为91.67%和97.06%。在该细胞株接种猪伪狂犬病病毒（PRV）、猪流感病毒（SIV）、猪流行性腹泻病毒（PEDV）阳性病料均出现明显的细胞病变。本研究首次针对现代商品猪培育出一株可以在体外连续传代的细胞株,并对多种动物病毒敏感,为相关动物病毒的分离培养提供了新的细胞系选择。     

果寡糖对仔猪细胞免疫功能影响的研究

试验选用约克×荣昌二元杂交仔猪20头,随机分为2组,每组10头。在试验Ⅰ组的基础日粮中添加0.75%的果寡糖,试验Ⅱ组为对照组,饲喂基础日粮。试验期为60 d,分别在30和60日龄2次前腔静脉采血,测定其仔猪的E-玫瑰花环率和植物血凝素淋巴细胞转化率,来监测仔猪免疫功能的变化情况。试验结果表明,30日龄时,试验Ⅰ组仔猪的E-玫瑰花环率（22.46%）与试验Ⅱ组（15.63%）相比,差异不显著（P＞0.05）;试验Ⅰ组仔猪的植物血凝素淋巴细胞转化率（45.22%）与试验Ⅱ组（40.55%）相比,差异显著（P＜0.05）。60日龄时,试验Ⅰ组仔猪的E-玫瑰花环率和植物血凝素淋巴细胞转化率（25.74%,44.32%）与试验Ⅱ组（11.92%,40.22%）相比,差异极显著（P＜0.01）。因此,日粮中添加果寡糖能显著地提高仔猪淋巴细胞的免疫功能。     

补料对哺乳仔猪生长发育影响的研究初报

本试验主要研究三种不同乳猪料对仔猪生长发育、成活率、采食量、发病情况的影响。结果表明仔猪补饲料的好坏与仔猪成活率、生长发育有密切关系,且质量越高效果越好。     

黄鳍鲷肝细胞体外培养研究

以黄鳍鲷肝脏细胞为材料 ,研究其肝细胞体外培养适宜的 p H、血清浓度、谷氨酰胺等条件 ,并进行传代培养试验。结果表明 ,培养液为 :MEM含 2 0 %小牛血清、15 g/ L L-谷氨酰胺及 p H 6 .9～ 7.1时 ,在 2 3℃中静置培养 ,黄鳍鲷肝细胞生长良好 ,3～ 5 d长满单层 ,细胞主要为成纤维细胞状 ,并能顺利传代。细胞动力学试验表明 :传代细胞 1～ 2代为适应期 ,3～ 5代为旺盛期 ,6代之后表现出衰老现象     

仔猪保温箱的改良与应用效果研究

为探讨研制更为有效合理的仔猪保温装置,降低养猪成本,提高养猪效益,本试验对普通仔猪保温箱进行了改良,即采用了PTC材料进行供热,并采取了热风循环式（G1）及直接供热式（G2）与我场原用红外灯和电热板供热作对照,对比其应用效果。结果表明：改良组二种供热方式均能提高仔猪成活率,降低仔猪发病率,提高断奶窝重,节约能耗,而且以G1的综合效益为最佳,第二组G2次之。试验表明PTC热风循环式仔猪保温箱值得推广使用。     

添加MPF日粮对仔猪生产性能的影响

 在仔猪日粮中添加微生物发酵植物单细胞蛋白饲料（MPF）,研究MPF对仔猪生长性能的影响。85只体重相近的45日龄仔猪随机分为2组,每组40只,对照组饲喂基础日粮,试验组在饲喂基础日粮的基础上添加单细胞的饲料。试验结果表明,试验组仔猪每只日平均增重497.22 g,料肉比2.12,分别比对照组高15.48%和7.56% （P<0.05）;剖检仔猪内脏器官无实质性病理变化;血常规和肝功能无显著变化,肾功能和甲状腺功能T-3差异显著（P<0.05）,其他指标差异不显著（P>0.05）;生产成本分析表明,试验组与对照组提高经济效益9.86%。结果提示,MPF可代替仔猪日粮中50%的豆粕,在生产中极具推广价值。     

黄芩甙对断奶仔猪生产性能和免疫机能的影响研究

将96头杜×长×大三元杂交断奶仔猪随机分为4组,每组设3个重复。第1组为对照组,饲喂基础日粮;第2组在基础日粮中添加0.006%的喹乙醇;第3组在基础日粮中添加0.05%的黄芩甙;第4组在基础日粮中添加0.006%的喹乙醇和0.05%的黄芩甙,探讨黄芩甙与仔猪免疫机能的关系。结果表明:第2、3、4组血清中总蛋白I、gG水平与第1组相比有升高的趋势(P>0.05);第2、4组的白球比值显著低于第1组(P<0.05),3组白球比值也低于1组(P>0.05);第2、3、4组T3、C4、GH水平显著高于第1组(P<0.05),而C3、T4水平有升高的趋势,但差异不显著(P>0.05),皮质醇含量显著低于第1组(P<0.05)。试验结果表明,在早期断奶仔猪日粮中添加黄芩甙具有改善免疫机能的作用,有助于提高仔猪抗病力。     

仔猪脐疝治疗方法的探讨

为探索预防、治疗仔猪脐疝简便而有效的方法,笔者用保守法成功治愈9头病例,通过对病例和病史资料进行分析,并同其他保守和手术治疗方法相比较,总结出各种方法的适应症和优缺点。结果表明,先天性脐疝与遗传和断脐方法有关,后天性脐疝发生的根本原因是腹压过大。可复性疝应优先采取保守疗法,不可复性疝应积极进行手术治疗。预防措施为早期淘汰相关有害基因,规范断脐方法及饲养管理过程中尽可能消除或减缓一切使腹压增大的因素。     

猪水肿病大肠杆菌FedF的B细胞抗原表位预测

目的是预测致猪水肿病主要毒力因子FedF的B细胞抗原表位。方法为基于FedF的蛋白基因组序列,采用Oarnicr-Robson法、Chou-Fasman法和Karplus-Schulz法预测其结构蛋白的二级结构柔性区域,Kyte-Doolittle方案预测其蛋白的亲水性,Emini方案预测其蛋白结构的表面可能性,Jameson-Wolf方案预测其蛋白结构的抗原指数,同时使用BepiPrcd在线分析预测其可能的B细胞抗原表位,综合以上方法最终预测FedF可能的B细胞表位。结果显示,经过分析推测FedF最有可能的B细胞表位位于FedF蛋白N端第51．57、115．122,148．153、199．206、225：232、254．259区段内。     

复合酸化剂和益生素对仔猪腹泻防治效果研究

仔猪腹泻是猪场的常发疾病。选择32-33 d,均重8.2 kg的仔猪35头,在配合饲料中分别添加0.5%复合酸、1.5%益生素、0.5%复合酸＋1.5%益生素进行了对比试验。结果发现,添加1.5%益生素可显著提高仔猪采食量（P〈0.05）,分别单独添加复合酸和益生素仔猪末重最佳（P〈0.05）。两种添加剂均可显著降低腹泻率（P〈0.05）。未发现添加复合酸和益生素对生产性能的加性效应,可能与该添加剂的使用剂量有关。     

谷氨酰胺的生物学功能及其在断奶仔猪中的应用

文中概述了谷氨酰胺的营养生理功能及对动物机体免疫功能的影响。谷胺酰胺对早期断奶仔猪胰腺及小肠胰蛋白酶活性,肠道结构和功能,血浆内毒素水平,饲喂生大豆后肠道通透性的影响及对早期断奶仔猪腹泻的影响,以及对骨骼肌中DNA、RNA浓度的影响。     

仔猪免疫保护机制及早期断奶对仔猪免疫机能的影响

从仔猪免疫保护机制的结构 ,功能特点出发 ,分析了早期断奶对仔猪免疫机能的影响 ,为乳猪料的开发和免疫调节剂的应用提供理论基础。     

细胞培养技术在鸡球虫研究中的应用

球虫的细胞培养是球虫在体外合适的细胞体系中进行发育的过程,能让人们在"无控"和"透明"环境下研究抗球虫药物的作用机制和虫体发育机制等.目前,该技术已在球虫学研究中广泛应用,主要集中于细胞培养体系优化、抗球虫制剂的疗效、虫体入侵相关蛋白功能研究以及检测手段的优化等方面.论文从以上几个方面综述细胞培养技术在鸡球虫学研究中的...     

复合微生态制剂在断奶仔猪生产中的应用研究

试验旨在研究复合微生态制剂产品肽菌素对断奶仔猪生长性能、腹泻率及微生物菌群等的影响。试验选取45头定远黑断奶仔猪,随机分为3个组,对照组饲喂基础日粮,试验组在基础日粮中分别添加0.1%、0.2%的肽菌素,每个组3个重复,每个重复为5头猪。饲养试验期为21d。试验结果表明:①试验组1和试验组2的日增重分别比对照组提高了22.5%和12.9%(差异显著,P<0.05);料肉比分别降低了7.87%(差异显著,P<0.05)和4.49%(差异不显著,P>0.05)。②在14d时,试验组1和试验组2的大肠杆菌数比对照组低5.87%和7.02%,均差异显著(P<0.05);在21d时,试验组1与试验组2的乳酸杆菌数分别高出对照组4.18%和4.79%(P<0.05),大肠杆菌数分别比对照组低6.68%和7.84%(P<0.05)。③试验组1和试验组2的IgG水平分别比对照组提高了18.5%和22.4%,均差异显著(P<0.05);试验组1和试验组2的总蛋白含量比对照组提高了9.46%和7.21%,血清尿素氮分别比对照组降低了22.9%和25.1%(P<0.05)。④在14d时,试验组1和试验组2的SIgA水平分别比对照组提高了27.8%和30.6%(P<0.05);在21d时,分别比对照组提高了33.0%和30.1%(P<0.05)。⑤在14d时,试验组1和试验组2的蛋白酶分别比对照组提高了84.0%和99.3%(P<0.01),淀粉酶分别提高了3.98%和7.65%(P>0.05);在21d时,试验组1和试验组2的蛋白酶分别比对照组提高了77.4%和91.2%(P<0.01),淀粉酶分别提高了13.1%和14.3%(P>0.05)。由此可以得出,肽菌素能够减少断奶仔猪的腹泻率,提高其生长性能,还能够改善其微生物菌群,增强其免疫功能。     

绿色仔猪料使用效果的研究

试验组仔猪喂给以复合酸化剂、香味混合剂、酶制剂、低聚糖、益生素等替代抗生素的全价料，对照组喂给添加抗生素的全价料。试验结果表明，复合酸化剂、香味混合剂、酶制剂、低聚糖、益生素等替代抗生素是可行的，试验组的全价料可以提高仔猪的生产性能。     

污染的霉形体在传代细胞内增殖的观察

对霉形体进入DK传代细胞内,并进行增殖的情况,作了详细的电镜观察.结果如下:(1)霉形体靠近传代细胞膜表面呈串珠样排列;霉形体与传代细胞膜表面接触部位融合增厚,电子密度增高,向内凹陷,将霉形体裹入细胞质,形成由膜结构包着的包涵体.(2)在传代细胞质中,除可见由膜结构包裹着的霉形体性包涵体外,还可见没有任何膜包着的散在的霉形体,并且均可见到霉形体的裂殖增殖相和出芽增殖相.(3)在传代细胞核的核周池和核质中,均见到典型的霉形体及其裂殖增殖相.(4)霉形体在传代细胞中大量的增殖,致使细胞崩解,霉形体即被释放出来.(5)霉形体使传代细胞出现严重的超微病变.本文还讨论了传代细胞培养污染霉形体后难以救治的根本原因是,霉形体在传代细胞内增殖,故仅仅着眼于消除培养液中的霉形体是不能达到预期结果的.     

霉形体在原代细胞内增殖的观察

对接种霉形体的原代细胞进行了电镜观察,结果如下:(1)进入细胞内的霉形体,不仅能以包涵体形式存在,也可以散在形式分布,同时还能进入粗面内质网等细胞器内.吸附在细胞膜上的霉形体、包涵体内的霉形体和散在于细胞质中的霉形体均可增殖,而进入细胞核内的霉形体未观察到增殖相.(2)在原代细胞内,正在进行出芽增殖的较大型霉形体内有一个线粒体.(3)进入细胞质中的霉形体,除具有出芽增殖和裂殖增殖形式外,在较大型霉形体内还观察到数个小球形霉形体.霉形体同时可以两种或3种方式增殖.(4)感染霉形体的细胞发生严重的空泡化,细胞体积增大.     

柔嫩艾美球虫（Eimeria tenella）体外细胞培养

试验比较了玻璃珠层析法,ＤＥＡＥ纤维素层析法,Ｇ３漏斗过滤法３种提纯柔嫩艾美球虫（Ｅｉｍｅｒｉａｔｅｎｅｌｌａ）子孢子的方法,柱高８ｃｍ,直径２００μｍ的玻璃株柱用ｐＨ８．０的Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ缓冲液作洗脱提纯子孢子,回收率为６４．１％,子孢子洗脱高峰期集中,且易于无菌操作,柱高５ｃｍ的ＤＥＡＥ纤维素柱用ｐＨ８．０的甘氨酸缓冲液作洗脱液,提纯子孢子回收率为６３．２％,但严格无菌操作困难,Ｇ３漏斗法易     

Development of a Cell Culture Method for Quantal Assay of Strain I-2 of Newcastle Disease Virus

Repeated titrations of strains of Newcastle disease virus (NDV) are more conveniently undertaken in cell cultures rather than in embryonated eggs. This is relatively easy with mesogenic and velogenic strains that are cytopathic to various cell lines, but is difficult with avirulent Australian isolates that are poorly cytopathic. Strain V4 for example has been shown to be pathogenic iin vitro only to of chicken embryo liver cells. Strain I-2 was reported to produce cytopathic effect (CPE) on chicken embryo kidney (CEK) cells. The present studies confirmed this observation and developed a quantal assay. CEK cells infected with strain I-2 developed CPE characterized by degeneration, rounding, granularity and vacuolation, and the formation of synctia. End points were readily established by microscopic examination of fixed and stained cells. In virus infectivity studies on strain I-2, where multiple titrations are required and where large numbers of samples are used, titration using CEK cell grown in microtitre plates is recommended. Such studies may not be feasible in embryonated eggs.     

仔猪小肠上皮细胞的体外培养及猪流行性腹泻病毒对其感染性研究

本研究旨在建立一种操作简单的仔猪小肠上皮细胞体外培养体系,为猪流行性腹泻病毒（porcine epidemic diarrhea virus,PEDV）的相关研究提供材料。研究以未吃初乳的新生仔猪作为肠道供体,采用肠腔面刮取肠黏膜和机械分离分散的方式进行原代细胞的体外分离。采用0.1%胰蛋白酶差速消化法进行仔猪小肠上皮细胞的纯化;比较新生弱仔猪和正常仔猪作为供体对原代小肠上皮细胞活性的影响;MTT法比较不同代次原代细胞的增殖活性;免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR方法检测PEDV毒株CV777在原代小肠上皮细胞感染和增殖情况。结果显示,本研究建立的体外分离培养方法能获得增殖活性良好的原代小肠上皮细胞,具有明显的S型细胞增殖曲线。通过胰酶差速消化可得到纯度高、形态单一的小肠上皮细胞,同时细胞连续传代5次仍保持良好的增殖活性。弱仔猪和正常仔猪分离培养的小肠上皮细胞的增殖活性比较显示,两者并没有明显区别,这为降低原代细胞培养的成本提供新的思路。免疫荧光和实时荧光定量RT-PCR结果显示,PEDV可感染本方法分离培养的仔猪原代小肠上皮细胞,并在其中进行复制增殖。本研究建立了一种操作简单、实用性强、成本较低的仔猪原代小肠上皮细胞体外培养方法,该方法培养的原代细胞可作为PEDV分离培养和相关研究的基础材料。