鸡源大肠杆菌强毒株耐药基因的定位及耐药质粒消除

本试验对临床分离的多重耐药鸡源致病性大肠杆菌强毒株的耐药基因进行初步定位,为临床选择合适的治疗策略提供理论依据。从送检病死鸡的肝脏、心脏中分离鉴定致病菌,质粒提取试剂盒提取分离菌的耐药质粒,转化入基因工程菌JM109,通过质粒纯化、电泳和药敏试验对耐药基因进行了初步定位。并用艾叶水煮液对该菌株进行体外耐药质粒消除试验。结果分离鉴定到1株强毒力鸡源大肠杆菌,该菌呈多重耐药性,且仅对氟奇霉素和链霉素敏感;由质粒转化和药敏试验结果可初步将耐环丙沙星、青霉素、氧氟沙星、氟哌酸、林可霉素和复方新诺明的基因定位于耐药质粒上,并可随质粒的转移而使转化菌获得耐药性;用艾叶水煮液可使该菌的耐药质粒消除率达60%;质粒消除菌的药敏试验结果表明,消除耐药质粒的细菌恢复了对环丙沙星、青霉素、氧氟沙星、氟哌酸、林可霉素和复方新诺明的敏感性。本研究结果表明,分离菌的耐药基因分别位于质粒和染色体上,艾叶对耐药质粒有较强的消除作用,可作为临床治疗用药。     

猪致病性大肠杆菌耐药质粒检测及其中药消除作用研究

为探讨中药对河南省规模化养猪场致病性大肠杆菌(E.coli)耐药质粒消除的效果,本研究在对87个猪致病性E.coli分离株进行耐药质粒检测的基础上,将各分离株分别于含有不同浓度的石榴皮、黄芩、黄连等中药提取液的培养液中培养,进行耐药质粒消除试验;并采用影印培养法和纸片扩散法进行耐药性消除菌落筛选及其对抗菌药物敏感性恢复的检测.结果表明:各分离株均含有2个～8个质粒,大小约为1.0 kb～87.0 kb;经石榴皮、黄芩、黄连作用后,各分离株均可以获得数量不等的耐药性消除菌落,消除率为0.34％～16.2％,以黄连的平均消除率最高,为9.33％;在耐药性消除的各分离株中,有25个分离株未发生质粒消除,其余均消除了1条～3条质粒,并且对7种抗菌药物的平均敏感率由消除前的5.39％分别提高至60.4％、75.2％和76.5％.表明石榴皮、黄芩、黄连对猪致病性E.coli具有质粒消除和耐药性逆转作用,其中黄连作用效果最好.     

中草药对细菌耐药质粒的消除作用研究

动物养殖中常见病原菌对抗菌药物的耐药性呈逐年上升的趋势,引起了广大科研工作者的极大关注。病原菌耐药性的产生主要与质粒有关,质粒能够将耐药基因传递给环境中的其他细菌,进而引起多重耐药菌株的出现。本文就细菌耐药现状、细菌耐药性与质粒关系、中草药对细菌耐药质粒的消除效果、中草药消除耐药质粒的机理、存在的问题、中草药对耐药质粒消除的展望这些方面进行简单综述。     

大肠杆菌的耐药机制及中药对大肠杆菌R质粒消除作用的研究

抗生素的发展和广泛应用使许多细菌引起的疾病得到了一定的控制，但是其发病率和病死率仍居高不下。究其原因，与细菌耐药性（特别是多重耐药现象）的产生有一定的相关性。产生耐药的机制十分复杂，耐药性主要由染色体或耐药质粒（R质粒）介质，R质粒可通过接合、转化、转导等方式在不同菌株之间传递，使敏感菌成为耐药菌，造成了R质粒的流行。R质粒的传递使得耐药性在细菌间广泛播散，又使一部分体内正常菌群成为耐药基因库，大大增加了治疗和预防的困难。     

中药复方对猪场大肠杆菌病的治疗效果及对耐药质粒的消除作用

细菌的耐药性一直是专业人员研究的热点和世人关注的焦点。细菌耐药性主要由耐药质粒介导,从本文结果看,中药复方必须使细菌耐药质粒得以消除,才能使细菌恢复对抗生素的敏感性。中医药具有毒副作用小、无残留等优势,在细菌耐药性消除研究中具有重要的研究价值。     

细菌耐药质粒消除方法研究进展

常见的病原微生物多重耐药性的增加以及多重耐药菌株的出现,给动物养殖业造成了巨大的经济损失。细菌的耐药性与其自身携带的耐药质粒关系密切。论文从细菌耐药现状,细菌的耐药性和耐药质粒的关系,耐药质粒的物理、化学、中草药消除方法这几个方面进行综述,旨在寻求一种安全有效的消除方法消除耐药质粒,为今后相关的研究提供参考。     

复方紫花地丁对鸭大肠杆菌耐药质粒的消除作用

以复方紫花地丁制剂为消除剂、十二烷基硫酸钠为对照组消除剂，以鸭大肠杆菌耐药菌株为靶细菌，进行耐药质粒体外消除试验，通过质粒DNA抽提及琼脂糖凝胶电泳方法，观察紫花地丁注射液对该耐药菌株质粒的影响。结果提示：复方紫花地丁制剂对耐药鸭大肠杆菌作用24 h，其1/2 MIC、1/4 MIC、1/8 MIC的消除率分别为6.9%、8.6%、10.2%；延长作用时间至48 h，其1/2 MIC、1/4 MIC、1/8 MIC的消除率分别为7.1%、8.9%、11.3%。结果表明：复方紫花地丁制剂对鸭大肠杆菌耐药质粒有消除作用。在一定浓度范围内，剂量与功效呈反比。     

鸡大肠杆菌耐药质粒的研究进展

鸡大肠杆菌病是一种常见疾病,在治疗过程中容易产生耐药性,给养鸡业预防和治疗该病带来很大困难,本文就鸡大肠杆菌耐药质粒的研究概况进行综述.     

中草药消除大肠埃希氏菌耐药性及耐药质粒的研究

在系统鉴定和药敏试验的基础上,对９株大肠埃希氏菌多重耐药菌株进行而药基因定位,结果表明有４株菌株的氨苄青霉素基因位于质粒上。通过对中草药煎煮、水蒸气蒸馏等方法提取其有效成分,对耐药大肠埃希氏菌进行耐药性消除试验,结果发展大蒜油等对大肠埃希氏菌氨苄青霉素耐药性有消除作用;鱼腥草、紫草等对大肠埃希氏菌庆大霉素而药性及耐药质粒有消除作用,消除率分别为２．９８％和４．２０％。     

大肠杆菌耐药性及R质粒研究进展

大肠杆菌耐药性及Ｒ质粒研究进展赵静＊杨汉春（中国农业大学动物医学院，北京海淀１０００９４）随着抗生素应用于临床和生产，许多疾病得到了较好的控制，同时也出现了细菌的耐药问题，特别是多重耐药现象更加严重。关于大肠杆菌对抗菌药物的耐药性问题，已在世界范围内...     

大肠埃希菌耐药质粒消除剂研究进展

质粒消除剂是指通过抑制质粒的拷贝或复制使子代细茵中的质粒消失,并使其介导的耐药性也随之丧失的一些物质.自从质粒消除剂概念提出以来,对此研究越来越深入,并取得了一定的进展.论文就大肠埃希茵耐药质粒特征、耐药质粒消除方法及其作用机制的研究进展进行了综述,旨在探讨一种有效逆转耐药性的方法.     

鸡致病性大肠埃希氏菌耐氧氟沙星质粒的检测

对分离的２０株鸡致病性大肠杆菌进行了药敏实验,筛选出１３株耐氧量沙星（ＯＦＬ）的菌株。经质粒提取,电泳和转化实验,获得一株 粒倡导 的耐煌多重耐药菌株。该菌株对参试的１１种抗生素全部耐药菌株其中ＯＦＬＭＩＣＭ〉５０μｇ／ｍｌ。该菌Ｒ质粒电泳可见６条带,转化大肠杆菌ＤＨ５α,在２０μｇ／ｍｌＯＦＬ的ＬＢ学板筛选得到的转化子,该转化子含有原菌株中２．７ｋｂ的质粒,获得原菌株部分耐药性。连续转化５次,均     

猪源大肠杆菌耐药性质粒的监测研究

在１１５株猪大肠杆菌耐药性监测的基础上,提取耐药类型最普遍的５株耐药菌的质粒进行质粒指纹图谱分析。结果表明：同一来源、耐药类型相同的菌株有相似的质粒图谱,来源不同者,酶切图谱有提示出它们之间的同源性,说明质粒指纹图谱可作为流行病学调查的工具。     

河南省鸡致病性大肠杆菌耐庆大霉素质粒的检测分析

通过对12株100%耐庆大霉素的多重耐药菌株的质粒提取,电泳检测和转化试验,成功获得了2株由质粒介导的耐庆大霉素的多重耐药菌株。结果表明:同一质粒可编码一个至数个耐药性基因,不同质粒可以携带相同的耐药性基因,并且这些质粒可以传递多种耐药性。证明了菌株对庆大霉素的耐药性是由耐药性质粒介导的,细菌的抗药性与耐药性质粒的转移有很大关系。     

不同动物源大肠杆菌的耐药性调查

为了解畜禽源大肠杆菌的耐药状况,2011—2012年从患病和健康食品动物中分离鉴定大肠杆菌935株,包括健康猪源606株、患病猪源114株、患病鸡源51株、患病水禽源(鸭和鹅)164株。试验采用琼脂稀释法测定了不同动物来源的大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性。结果发现,大肠杆菌耐药严重,对大部分药物的耐药率超过70.0%,其中氨苄西林、复方新诺明和四环素的耐药率均达到了80.0%以上;仅对头孢西丁、黏菌素和阿米卡星较敏感,但患病水禽源大肠杆菌对阿米卡星的耐药率达到了52.4%,明显高于其他动物。健康畜禽源大肠杆菌对多数抗菌药的耐药率低于患病畜禽源大肠杆菌,表明抗菌药物的使用增加了病原菌对第3代头孢类药物和氟喹诺酮类药物的耐药率,势必增加临床治疗难度。     

禽源致病性大肠杆菌分离株R质粒的研究

从本室临床分离到的２０株禽源大肠杆菌，经药敏试验筛选到四株抗性菌株提取质粒ＤＮＡ，电泳分析表明菌株各存在数量不等（１－４个）的质粒ＤＮＡ条带。分别用试剂盒回收出５种大小不同的Ｒ质粒，分别转化大肠杆菌ＤＨ５α；但只有２０．５ｋｇ、９．４ｋｂ两种质粒转化成功，并获得了相应的抗药性，用含９．４ｋｂ质粒转化的大肠杆菌攻毒，可致死小鼠，说明该质粒可能携带有毒性基因。     

基于转录组学技术分析绿原酸对鸡源大肠杆菌抑菌及耐药消除的作用机制

为探究绿原酸对鸡源抗生素耐药大肠杆菌抑菌及耐药消除的作用机制,以影印法分离绿原酸浓度为1.25 mg/mL（亚抑菌浓度,1/2 MIC）的LB肉汤培养的第3代禽源大肠杆菌耐药逆转菌株,以微板法测定耐药逆转菌株的左氧氟沙星最小抑菌浓度（MIC）,并进一步通过转录组测序方法分析绿原酸消除大肠杆菌耐药性的分子机制。结果显示：耐药逆转菌株对左氧氟沙星的MIC由16 μg/mL降低至4~8 μg/mL,说明1.25 mg/mL的绿原酸可在一定程度上消除耐药大肠杆菌的左氧氟沙星耐药性。为进一步解析绿原酸对鸡源大肠杆菌耐药消除作用的分子机制,通过转录组测序方法对耐药性消除前后鸡源大肠杆菌基因表达水平进行对比分析发现：绿原酸作用后共有12个基因的表达量发生显著下调,通过荧光定量PCR验证结果基本一致。经过GO功能富集分析和KEGG代谢通路富集分析发现,差异表达基因在功能上集中于膜组成成分和DNA重组,在代谢通路富集中差异基因均与代谢相关,差异基因中bhsA、cysP为Coli-HB染色质转录RNA（GenBank登录号：CP020933）,oqxA、oqxR、emaA、pinR、xerD、folA、repA、repC、adhP、IS26为Coli-HB质粒1转录RNA（GenBank登录号：CP020934）。从差异表达基因的分布可以看出,绿原酸可以抑制细菌DNA重组、使细菌抗逆性减弱、抑制耐药基因活性等,在一定程度上消除大肠杆菌的左氧氟沙星耐药性,起到抑菌及耐药消除作用。