Seroprevalence of Hepatitis E Virus in Human and Pigs in Pig Farms from Guangdong Province,Southern China

Hepatitis E is caused by hepatitis E virus (HEV), which has been classified into four genotypes. Genotypes 3 and 4 are regarded as zoonotic pathogens. Accumulating researches indicate that genotype 4 is the main HEV strain circulating in China, and there are high levels of seropositive pigs and human in some provinces of China. In this study, serum samples from pigs and from human occupationally exposed to pigs were obtained from pig farms in Guangdong Province, in subtropical southern China, in order to investigate for the first time the prevalence of anti-HEV immunoglobulin G (IgG) in the region. Antibodies against HEV were detected by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) using a commercially marketed kit. The results showed that high numbers of pigs (74/94; 78.7%) and human (50/94; 53.2%) from three pig farms in Guangdong Province were positive for anti-HEV IgG. The correlation coefficient relating the prevalence in pigs and human on different farms was 0.920. The seropositive rate in males (human) was 48.8% (20/41) and that in females was 47.7% (9/19), which showed no statistically significant difference. These data indicated that there was a high prevalence of anti-HEV antibodies in pigs and in human with occupational exposure to pigs. The risk of infection with HEV in both human and pigs in Guangdong Province appeared to be age-dependent, to a certain extent. This study provided basic data for further researches on HEV and was a reminder that more attention should be paid to HEV infection both in pigs and workers on pig farms in the study region.     

兔出血症病毒主要结构多肽的纯化及免疫保护性试验

人工感染ＲＨＤＶ－ＮＪ株病死兔肝经－５０℃反复冻融,氯仿处理,ＰＥＧ沉淀、差速离心,Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ－４Ｂ柱层析得纯化病毒,纯化ＲＨＤＶ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＣｕＣｌ２负染色后,切取主要结构多肽ＶＰ１（６４．５ＫＤ）凝胶带,除去ＣｕＣｌ２和ＳＤＳ获得ＶＰ１,高效液相色谱鉴定只有一个蛋白峰,Ｗｅｓｔｅｒｎ－Ｂｌｏｔｔｉｎｇ,ＨＡ和ＨＩ结果显示纯化ＶＰ１具有良好的抗原表位稳定性。无母源抗体的３月龄兔１     

Drug metabolism in the newborn rabbit

A number of drugs that are metabolized through the action of enzymes present in liver microsomes in the adult rabbit are not metabolized in livers of newborn rabbits. The development of metabolic pathways during a period of 4 weeks is presented. Evidence is given for the presence in livers of baby rabbits of inhibitors of some of these drug-enzyme systems.     

上海某猪场发现基因3型和基因4型戊型肝炎病毒共存

在对猪戊型肝炎流行病调查过程中,通过Nested RT-PCR方法,扩增基因组ORF2的150 bp目的片段,测序并进行分析。结果表明:某猪场同时存在3型和4型HEV,这是我国首次在同一个猪场发现不同基因型HEV共同感染的报道。对基因3型HEV在该猪场流行趋势进行跟踪调查,基因3型阳性率最高达20%,最低4%,平均11.5%;基因4型最高阳性率30%,最低20%,平均23.5%。此研究结果提示基因3型HEV在该猪场与基因4型相比在竞争感染中不占主导优势。     

辽宁省猪血凝性脑脊髓炎病毒抗体的血清学调查

摘要： 从辽宁省各地区采集猪血清样本,应用血凝和血凝抑制试验检测血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)抗体。结果,910份样品中有451份呈现HEV抗体阳性反应,阳性率为49.6%;抽检了10个规模化养猪场共280份样品,阳性率高达70.0%;抽查了不同年龄阶段猪血清样品,种母猪阳性率最高,为73.8%,仔猪次之,为67.5%,育肥猪最低,为37.0%。调查证明辽宁省各地区普遍存在HEV感染,被采集血清的成年猪未表现临床症状,说明HEV在本地区的猪群中主要表现为隐性感染,仔猪有少数出现症状,诊断为HEV与猪瘟或猪繁殖与呼吸综合征等混合感染。关键词：血凝性脑脊髓炎病毒;血清学调查;猪;     

河南地区猪戊型肝炎病毒的检测及基因序列分析

对从河南省郑州、洛阳、新乡、焦作、周口等5地市采集的133份血清样品进行戊型肝炎病毒( Hepatitis EVirus,HEV) IgG抗体分析;通过反转录聚合酶链式反应的方法(RT-PCR)对从郑州、中牟、新郑、济源、濮阳等5个地市采集的200份粪便样品进行HEV RNA检测.检测结果表明,79.70％的血清为HE...     

黑龙江省家畜血清HEV抗体和抗原水平的检测

[目的]探索黑龙江省戊型肝炎病毒（HEV）在家畜中的分布情况。[方法]采用酶联免疫吸附试验法（EusA）,检测来自黑龙江省2个地区血清样品3月龄以上大猪719份、3月龄以下小猪840份、牛505份、羊515份HEV抗原和抗体阳性率。[结果]猪群抗体水平最高,猪群（89．71％）可能比其他种群更容易感染HEV（P〈O．001）。黑龙江省共检测出HEYAg阳性血清样品猪59份,牛3份,羊1份。与吉林、辽宁相比,黑龙江省猪群HEV感染率较高。[结论]黑龙江省猪群感染HEV较为普遍,且大猪感染率高于小猪。     

卵巢打点注射质粒pIRES2-EGFP生产转基因兔的研究

本研究以绿色荧光蛋白为报告基因,转染兔卵母细胞,探索建立操作方便、效率高、成本低、可定量生产转基因兔的可行性方法.选择14只成年新西兰雌兔,每侧卵巢内分别打点注射0.25 mL 0.5～0.8 mg/mL的质粒,注射后第3日、第16日和第31日进行人工辅助配种;卵巢注射后第3日、第16日和31日随机各取1只雌兔卵巢做冰冻切片,置荧光显微镜下观察绿色荧光;应用PCR 和 Southern 杂交检测转基因新生仔兔阳性率.结果经荧光显微镜观察,卵巢注射后第3日配种的雌兔卵巢冰冻切片及48 h以后的胚胎呈现绿色荧光;卵巢注射报告基因后第3日配种的雌兔后代阳性率最高,PCR 和 Southern 杂交检测结果分别为72.7 %和45.5 %;第31日配种的后代阳性率最低,分别为36.8 %和15.8 %;第16日配种、第3日配种和第31日配种雌兔的阳性后代数量呈递减趋势.卵巢注射后第3日配种,虽然后代阳性率较高,但是其产仔数最少.实验结果表明,用注射器直接对卵巢打点注射外源基因生产转基因兔的方法操作简便、高效,为日后大规模制备一些大型家畜的转基因后代奠定了基础.     

荧光抗体对水貂链球菌病诊断的研究

为了把荧光抗体诊断法应用于水貂链球菌病的诊断,用兔抗水貂链球菌荧光抗体检测了20例人工感染,10例自然感染和10例健康水貂的实质脏器。人工感染水貂脾脏检出率为100％(20/20),肝脏和心脏各为55％(11/20),自然感染水貂脾脏、肝脏和心脏检出率均为100％(10/10),其他脏器不易检出病原体。对照组建康水貂各实质脏器均呈阴性反应。试验结果表明:水貂的脾脏、肝脏和心脏可作为直接免疫荧光抗体检测的首选器官。应用此法检测病料可在2小时内报告病原学诊断结果。     

温州地区家兔球虫病流行病学调查

为掌握温州地区家兔球虫病的流行情况,采用麦克马斯特虫卵计数法(McMasters method)和饱和盐水漂浮法,对采集的595份家兔粪便样品中兔球虫种类和感染情况进行调查分析。结果表明,温州地区兔球虫平均感染率达771%,全部为混合感染,感染球虫种类多为3～5种。各月龄段均有不同程度的感染,以1～3月龄幼兔感染率最高,达977%,多数呈中度或重度感染。调查共检出10种兔艾美耳球虫,以无残艾美耳球虫、穿孔艾美耳球虫、肠艾美耳球虫和大型艾美耳球虫为优势虫种。     

不同日月龄兔感染RHDV后圆小囊的比较病理学观察

为探讨圆小囊在免体全身抗感染免疫中的功能作用，采用组织病理学及免疫组织化学方法，对比观察了2日龄、1月龄及2月龄实验免感染RHDV后圆小囊的病理变化，同时采用ELISA方法对实验兔的血清及肝、肾、脾中的RHDV含量进行了测定，重点对实验兔圆小囊黏膜上皮内淋巴细胞(IEL)进行了统计比较，结果显示：2月龄以内兔人工感染RHDV后，临症表现、剖检及组织病理学观察均未见异常。血清及RHDV的靶器官肝、脾、肾中均未检测出RHDV抗原。2月龄以上兔感染RHDV后，无论从临床症状，还是大体剖检，组织病理学观察，均出现了明显的病理学改变，而且感染后血清RHDV抗原检测呈阳性反应。圆小囊、肝、脾、肾等组织器官都呈现RHDV免疫组化强阳性反应。2月龄以内的乳兔及仔兔感染RHDV后，圆小囊虽未出现明显的形态结构改变，免疫组化染色也未见RHDV抗原阳性反应物，但IEL明显增多，2日龄兔IEL由1．2％增加到4．2％；1月龄兔的IEL由10．1％增加到26．1％。1月龄仔兔还表现出固有层中淋巴细胞明显增多。     

动物性食品中4种药物残留的检测

为了解北京地区动物性食品中兽药残留情况,随机抽查北京京郊几家猪场、鸡场和商场,检测4种药物(盐酸克伦特罗、氯霉素、磺胺类、氯羟吡啶)的残留情况。盐酸克伦特罗检测采用酶联免疫法(ELISA),取206份猪肝、240份猪尿测定盐酸克伦特罗残留,阳性数分别为19、23,阳性率分别为9.22％、9.58％;氯霉素检测采用酶联免疫法,取150份鸡肝测定氯霉素残留,阳性数为15,阳性率为10.00％。磺胺类药物和氨羟吡啶检测采用高效液相色谱法(HPLC),取50份猪肝、50份鸡肝测定磺胺类药物残留,结果全为阴性;取100份鸡肝测定氯羟吡啶残留,结果全为阴性。检测结果不容乐观。     

上海地区生猪屠宰产品中共存基因3型和4戊型肝炎病毒

调查了上海市部分规模化屠宰场生猪屠宰产品中戊型肝炎病毒的携带状况.从4个屠宰场采集60份猪胆汁、60份猪肝脏、印份猪脾脏、60份猪肠系膜淋巴结、160份猪粪便及61份猪血清样品.利用巢式简并引物和RT-PCR技术,检测样品中HEV RNA,并对阳性扩增子进行克隆测序,序列用生物信息学软件分析.结果表明:样品戊型肝炎病毒RNA阳性率为1.08%(5/461).其中胆汁检出率为3.3%(2/60)、粪样为o.6%(1/60)、血清3.2%(2/61)、肝脏、脾脏和肠系膜淋巴结未检测到HEY RNA.序列系统进化分析结果显示,5株HEV中3株为基因3型HEV,同源性为90.7%-98.6%;2株为基因4型,同源性为94.9%.结果证实屠宰场生猪携带的HEV主要存在于胆汁和血清中.因此提示.屠宰场在屠宰时要妥善处理生猪血清和胆汁以防污染其他屠宰产品.研究在屠宰生猪中检测到基因3型HEV RNA.结果提示,至少在较为局限的群体中基因3型和4型病毒可以共存.     

上海地区宠物犬中戊型肝炎病毒流行病学调查

[目的]为探讨宠物犬在戊型肝炎病毒(HEV)流行环节中的作用提供依据。[方法]以散养宠物犬为研究对象,从上海地区及其周边地区随机采集70份血清样品,通过双抗原夹心ELISA试验检测抗HEV抗体,分析不同品种和不同性别宠物犬中血清抗HEV抗体阳性率。利用反转录巢式PCR检测血清中病毒核酸。[结果]在70份宠物犬血清样品中,15份样品中抗HEV抗体呈阳性,阳性率为21.4%。上海地区宠物犬阳性率为27.5%,高于上海周边地区。在供试的宠物犬品种中,杜宾犬的HEV抗体阳性率较高(33.3%),其他品种宠物犬为11.1%～25.0%。雌性宠物犬中HEV阳性率为34.4%,显著高于雄性宠物犬。在各种宠物犬中未检测到HEV核酸颗粒。[结论]宠物犬对HEV敏感,在HE流行环节中具有不容忽视的作用。     

兔出血症病毒人工感染兔的病理学研究

采用兔出血症病毒贵州分离株人工感染家兔,观察其临床表现、病理形态学及病理组织学变化。结果,临床表现:体温升高、被毛蓬乱、抽搐、呼吸困难等症状;肝,心、脾、肾等实质性器官出血或淤血,其中肝和肾有部分坏死;组织病理变化表现:肝、肾等实质性器官充满红细胞、大量中性粒细胞和淋巴细胞。贵州毒株具有高致病潜力。     

皖南某野生动物园戊型肝炎跨种感染的分析

从皖南某野生动物园采集包括鸟类在内的22种动物粪便样品共计38份,采用RT-nPCR法检测HEV。结果表明,28.9%的粪样呈HEV RNA阳性,其中包括多种鸟类粪样。对所有11个HEV分离株的基因序列分析表明,它们均属基因4型,同源性为96%~100%。这提示,在该野生动物中心发生了HEV的跨种间感染,并且哺乳动物HEV可以在自然条件下感染鸟类。     

苦马豆素对家兔肝脏抗氧化功能的影响

为了探讨苦马豆素对家兔肝脏抗氧化功能的影响,进一步揭示苦马豆素的毒性作用机理,将24只家兔随机分为4组,即对照组、试验Ⅰ组、试验Ⅱ组和试验Ⅲ组。将小花棘豆全草粉碎后,按Ⅰ组添加15%(含苦马豆素30 mg/kg)、Ⅱ组添加30%(含苦马豆素60 mg/kg)、Ⅲ组添加45%(含苦马豆素90 mg/kg)的比例制作混合饲料,饲喂至典型临床症状出现为止。攻毒后第14、35、71-70 d每次每组随机采集2只家兔的肝脏组织,检测机体SOD、GSH-Px、CAT和NOS活性及MDA、NEFA、·OH和NO含量的变化。结果显示,与正常对照组相比,试验组家兔肝脏SOD、GSH-Px、CAT等抗氧化物酶的活性极显著下降(P﹤0.01),而MDA、NEFA、·OH和NO含量极显著上升(P﹤0.01)。结果表明,不同浓度苦马豆素对家兔肝脏抗氧化功能有显著影响,且具有一定的时间效应和剂量效应关系,长期低剂量摄入苦马豆素可引起家兔机体不同程度的肝损伤。     

WHBE兔遗传特异性的RAPD分析

应用随机扩增多态DNA技术(RAPD)对WHBE兔、日本大耳白兔和新西兰兔进行了遗传分析.用10个随机引物对其基因组DNA进行PCR扩增.根据电泳结果选用其中8个引物扩增的条带进行遗传分析,共检测到107条扩增片段,其中多态性片段32条,占29.91%,反映了家兔品系间的遗传变异.多态性统计分析表明,WHBE免和日本大耳白兔的遗传相似度最高,为0.7948.其中4个引物既可扩增出3个品系共同的DNA条带,也可扩增出不同品系的特征条带,表明WHBE兔与日本大耳白兔和新西兰兔之间有遗传的相似性,也存在遗传差异.这些结果表明应用RAPD技术可以很好地检测家兔不同品系间以及同一品系不同个体间的亲缘关系.     

四川省部分民族地区牦牛勾端螺旋体病的流行病学调查

勾体病是一种重要的人兽共患病,但牦牛勾体病在国内迄今未见报道.80.6—82.9月份,四川省红原、若尔盖和理县发生了牦牛勾体病的散发和流行.流行的特点:1.流行时间长,从晚春到秋季,冬季仍有散发病例;2.流行地区以高寒的一些草地县为主;3.主要为牦牛患病,以繁殖的母牦牛和犊牛发病率高;4.发病率是10%;致死率为30%;5.自牛群随机采集187份牦牛血清样品,与13群标准抗原作 MAT,结果有53份样品为阳性(阳性率28.3%)。显凝试验的抗体为8个血清型,塔拉索夫、拜伦,秋季热、乌尔夫、犬、巴叶赞、波摩那和七日热等型.6.从患病的牦牛中分离出波摩那勾体两株.牦牛勾体病的临床特征,常呈现发热、腹泻、角膜斑翳、视力障碍或失明,以及出血性素质.这些症状出现愈早死亡率愈高.及时使用青霉素、链霉素注射,疗效很好.尸体剖检所见:皮下组织、胃肠道粘膜、肾包囊、心包膜、肺及淋巴结均出现淤血肿胀及出血性斑点,肝、肾有坏死灶.     

牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法的建立

【目的】建立高通量牛布鲁氏菌间接ELISA诊断方法,为科学高效诊断牛布鲁氏菌病提供技术手段。【方法】以提纯的猪布鲁氏菌S2株脂多糖(LPS)作为包被抗原,采用棋盘滴定法确定了抗原包被浓度、包被液、抗原包被时间、封闭液、样品稀释液、血清稀释倍数、兔抗牛酶标抗体稀释液、兔抗牛酶标抗体稀释浓度、最佳TMB底物反应时间等参数,初步建立了牛布鲁氏菌间接ELSIA方法。并用上述条件初步建立的方法对176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌病阴性血清进行检测。检测结果经SPSS17.0软件分析,构建受试者工作特征曲线(ROC)及曲线下面积,确定敏感性和特异性;通过Youden指数确定阴阳性判定的临界点。使用质控阴、阳性血清评价试剂盒的批内和批间重复性。用本研究建立的ELISA试剂盒及商品化试剂盒同时对临床上1 200份牛血清样本进行比对检测,比较其符合率。【结果】通过棋盘法确定的试剂盒中各组分的最佳条件为:抗原包被浓度为10μg·m L-1,最适包被液为碳酸盐缓冲液,最佳包被时间为2—8℃、16 h,最适血清稀释度为1﹕50,最佳封闭液为含有3%明胶的PBST,最佳样品稀释液为含有0.5%蔗糖的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体稀释液为含有5%马血清的PBST,最佳兔抗牛酶标抗体工作浓度为1﹕20 000,最佳TMB底物反应时间为15 min。按上述条件建立的间接ELISA方法检测176份牛布鲁氏菌病阳性血清和132份牛布鲁氏菌阴性血清,并统计结果后使用SPSS17.0软件分析该方法受试者工作特征曲线(ROC)线下面积为0.98。最佳判定临界点为样本OD值/阳性OD值(S/P)×100%=20%。在此临界值上时,敏感性为97.7%,特异性为95.5%。对1 200份临床样本的比对检测显示,本研究建立的间接ELISA方法与进口商品化试剂盒的总符合率为96.25%。【结论】建立了特异性和敏感性良好的牛布鲁氏菌间接ELISA抗体检测方法。