哺乳动物体细胞手工克隆研究进展

采用化学去核和无透明带技术相结合,对哺乳动物卵母细胞进行处理,使通过该方法获得的去核无透明带卵母细胞作为受体,进行体细胞核移植,从而获得克隆动物。该方法完全避免了传统核移植的显微操作及其繁琐程序,是纯粹的手工克隆,它的成功将会大大简化核移植程序,提高核移植总效率,同时提高核移植的生产力。论文对手工克隆的研究进展,手工克隆的机理,手工操作的体细胞核移植方法及影响手工克隆的因素进行综述。     

影响体细胞核移植效率的因素

哺乳动物体细胞核移植 (克隆 )是近年来迅速发展起来的一项新技术 ,对濒危动物保护、优良种畜快速扩群以及核质关系的研究、药物试验等诸多领域都具有重大意义。但体细胞核移植是一项程序繁杂的工作 ,每一步操作所采用的试剂、材料和方案等都会影响到核移植效率 ,因而其影响因素十分众多。文章根据目前已有资料 ,论述了卵母细胞来源、卵母细胞与供体细胞的胞质容量、卵母细胞的去核方案、体细胞供体动物的年龄、供体细胞的组织来源与传代次数及供体细胞的冷藏、冷冻和所处的细胞周期阶段对核移植效率的影响。另外 ,对重组胚的融合 -激活方案、核移植方案及重构胚的培养方案对核移植效率的影响也作了简要论述。     

第1只克隆的濒危动物夭折

世界上第 1只通过不同物种间体细胞核移植技术克隆的濒危动物一种原产于东南亚的野牛(gaur) (报刊上称为白肢野牛 ?)今年 1月 8日在美国出生 ,但 2 d后死亡。据报道 ,其死亡原因是由于感染了产荚膜的梭状芽胞杆菌 (Clostridium perfringens) ,而与采取的克隆程序无关。对于精子、卵子来源有限 ,而代理母亲比较难找的濒危动物来说 ,为挽救这些动物 ,采取常用的繁殖技术和同种间的细胞核移植克隆技术都受到了一定的限制 ,因此人们发展了不同物种间的细胞核移植。这只被克隆的命名为Noah的野牛是通过将 1只雄性野牛的皮肤细胞与家牛的去核卵细…     

延边黄牛体细胞核移植的研究进展

牛体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一套极其复杂的技术体系,它包括卵母细胞的成熟、供核细胞的准备、卵母细胞的显微操作、细胞融合、卵母细胞激活和胚胎培养。因此,许多因素影响着核移植胚胎发育。虽然陆续有克隆牛出生的报道,但是克隆效率依然低下。本综述对延边黄牛体细胞核移植体系的6个方面进行简单综述,以期为探究延边黄牛体细胞克隆的最优化条件、建立最优化的培养体系、提高克隆效率提供参考。     

猪体细胞核移植的影响因素

动物体细胞核移植技术对于优良种畜的复制、动物遗传多样性保存及濒危动物挽救、转基因动物培养以及人类疾病的治疗都具有重要的意义;近几年猪体细胞核移植研究取得了一定的进展,但总体看来核移植效率还很低,还需要对一些关键技术的深入研究和不断完善核移植操作程序,通过对猪体细胞核移植的关键技术及影响因素进行探讨与分析,以其加快猪体细胞核移植技术的研究,提高猪体细胞核移植的效率,进一步促进猪体细胞核移植技术在生产中应用。     

哺乳动物细胞核移植(克隆)研究进展(下)

５．１．２种间核移植 种间核移植是将来源于不同种的供体细胞重组在一起进行核质杂交技术。ＭｃＧｒａｔｈ和Ｓｏｌｔｅｒ（１９８６）首先进行了不同种间小鼠受精卵原核互换试验。Ｗｏｌｆ和Ｋｒａｃｅｍｅｒ（１９９２）获得了不同属间（野牛×牛、羊×牛）的核质杂交囊胚,梅祺和邹贤刚（１９９３）以小鼠早期胚胎为供体细胞核,兔去核卵母细胞为受体胞质,获得不同目间核质杂交的囊胚,可见,如果种间核移植进一步完善,就可挽救像大熊猫这样的珍贵物种。 ５．１．３胚胎干细胞核移植 胚胎干（ＥＳ）细胞,是早期胚胎或原始生殖细胞（…     

动物克隆技术

动物克隆技术,即动物核移植技术,是通过显微操作,电融合等实验手段,将发育到一定阶段的核供体(胚胎细胞或体细胞)的细胞核取出,注入相应发育阶段的去核的原核胚或成熟卵母细胞中,再将重构胚的胚胎移植,到相应生理状态的动物体内,达到大量生产遗传同质动物的一种生物工程技术。1动物克隆技术的应用克隆技术对畜牧业的发展将产生重大影响。利用动物克隆技术,可缩短育种年限。据报道,自1987年牛胚胎细胞移植成功,牛克隆胚胎的重复克隆已达6个世代,并获得第三代克隆牛,由一枚胚胎反复克隆已得到近200枚克隆胚胎,母牛繁殖后代数可以呈几何基数增…     

小白鼠颗粒细胞核移植操作问题的探讨

小白鼠颗粒细胞核移植技术是指将小白鼠的颗粒细胞,通过显微手术和细胞融合的方法,移植到一个去核卵母细胞中,构成重组胚胎(克隆胚胎),然后移植给受体,获得与核供体基因型相同的后代(克隆动物)的生物技术。目前,在核移植操作过程中还存在着许多问题,影响了核移植的效率。1供体和受体细胞的获取1.1超数排卵超数排卵是核移植中获取供体和受体细胞的关键技术。小白鼠的超数排卵常用孕马血清促性腺激素(PMSG)和人绒毛膜促性腺激素(hCG)[1]。由于小白鼠的个体差异以及不同的饲养环境,注射激素的剂量有所不同,剂量过大或过小都有可能影响超数排…     

家畜胚胎细胞核移植研究进展

引言细胞核移植技术(nuclear transplantation)就是将成熟卵母细胞的核除去后移入其他细胞核,使卵母细胞不经过精子穿透等有性过程就可被激活、正常分裂并发育成新的个体。所以,核移植技术可使细胞核供体(nu-     

家兔胚胎细胞核移植的研究现状

胚胎细胞核移植技术(核移植)是指将不同发育时期的胚胎细胞核以显微手术及细胞融合的方法移植到去核卵母细胞或受精卵中,并使重组胚胎发育至产仔的过程。通过此技术,不仅可以生产出大量的克隆动物,而且对于研究动物胚胎的发育机理也具有重要的作用。 早在1905年,Spemann就证明,蝾螈早期胚胎的卵裂球具有功能相同的核,并在1938年提出了核移植的设想;按这一设想,1952年Berggs和King首次获得了两栖类美洲豹蛙的核移植后代。到80年代,核移植技术在哺乳动物中也相继获得成功,目前已取得了绵羊、牛、小鼠、兔、猪、山羊的核移植后代。而且核移植技术也成功地用于研究细胞的核质关系,配子发光过程中核的相互作用等方面。     

Research Advances on Somatic Cell Nuclear Transfer in Yanbian Yellow Cattle

Bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT) is a sophisticated technique system,including oocyte maturation,donor cell preparation and oocytes microscopic operation,fusion,activation and culture.Although the birth of cloning cattle has been reported recently,the efficiency of somatic cell cloning has remained lowly.In order to establish the optimization somatic cell nuclear transfer system of Yanbian Yellow cattle,this review summarized only from 6 main aspects mentioned above in this field.     

Handmade cloning:recent advances,potential and pitfalls

Handmade cloning(HMC) is the most awaited,simple and micromanipulator-free version of somatic cell nuclear transfer(SCNT).The requirement of expensive micromanipulators and skilled expertise is eliminated in this technique,proving it as a major revolution in the field of embryology.During the past years,many modifications have been incorporated in this technique to boost its efficiency.This alternative approach to micromanipulator based traditional cloning(TC) works wonder in generating comparable or even higher birth rates in addition to declining costs drastically and enabling cryopreservation.This technique is not only applicable to intraspecies nuclear transfer but also to interspecies nuclear transfer(iSCNT) thus permitting conservation of endangered species.It also offers unique possibilities for automation of SCNT which aims at production of transgenic animals that can cure certain human diseases by producing therapeutics hence,providing a healthier future for the wellbeing of humans.The present review aims at highlighting certain aspects of HMC including recent advancements in procedure and factors involved in elevating its efficiency besides covering the potentials and pitfalls of this technique.     

The perspective of the incompatible of nucleus and mitochondria in interspecies somatic cell nuclear transfer for endangered species

Taking into account the latest Red List of the International Union for Conservation of Nature in which 25% of all mammals are threatened with extinction, somatic cell nuclear transfer (SCNT) could be a beneficial tool and holds a lot of potential for aiding the conservation of endangered, exotic or even extinct animal species if somatic cells of such animals are available. In the case of shortage and sparse amount of wild animal oocytes, interspecies somatic cell nuclear transfer (iSCNT), where the recipient ooplasm and donor nucleus are derived from different species, is the alternative SCNT technique. The successful application of iSCNT, resulting in the production of live offspring, was confirmed in several combination of closely related species. When nucleus donor cells and recipient oocytes have been used in many other combinations, very often with a very distant taxonomical relation iSCNT resulted only in the very early stages of cloned embryo development. Problems encountered during iSCNT related to mitochondrial DNA (mtDNA)/genomic DNA incompatibility, mtDNA heteroplasmy, embryonic genome activation of the donor nucleus by the recipient oocyte and availability of suitable foster mothers for iSCNT embryos. Implementing assisted reproductive technologies, including iSCNT, to conservation programmes also raises concerns that the production of genetically identical populations might cause problems with inbreeding. The article aims at presenting achievements, limitations and perspectives of iSCNT in maintaining animal biodiversity.     

Cloning of the short-tailed Gyeongju Donggyeong dog via SCNT: conserving phenotypic inheritance

Somatic cell nuclear transfer is a useful tool to maintain genetic information of animals. The Gyeongju Donggyeong dog is a breed registered as natural monument in Korea. The unique feature of the Donggyeong dog is its tail, as the Donggyeong dog can be classified as either short tailed or tailless. The aim of this study was to preserve the Donggyeong dog’s unique feature by cloning. Fibroblasts were obtained from a short-tailed Donggyeong dog. In vivo matured oocytes were enucleated, microinjected with a donor cell and fused electrically. Reconstructed embryos were transferred to six recipient dogs. One surrogate became pregnant, and one short-tailed Donggyeong dog was delivered. This study demonstrated that the phenotype of the Donggyeong dog could be conserved by somatic cell nuclear transfer.     

小鼠卵母细胞化学去核及手工构建核移植胚胎

为优化脱羰秋水仙碱（DC）诱导去核程序,研究以DC去核卵母细胞为核受体的、无透明带体细胞核移植方法在小鼠体细胞核移植中的应用,试验比较了乙醇、SrCl2两种激活方法及脱羰秋水仙碱处理开始时间对小鼠MⅡ期卵母细胞去核效率的影响;将DC诱导去核成功的卵母细胞去除透明带,与胎儿成纤维细胞粘合、电融合和SrCl2激活后,体外培养重构胚。结果显示,7%乙醇激活后0 min起始DC处理可得到最高的诱导去核率（66.4%）;而在8 mmol/L SrCl2中激活15 min后用DC处理可得到最高的诱导去核率（64.3%）;目前重构胚可以体外发育到8-细胞。试验结果首次证明了SrCl2在小鼠卵母细胞DC诱导去核中的作用效果与乙醇相当,初步证明了将DC诱导去核技术与无透明带技术相结合手工克隆生产小鼠重构胚的可能性,它的成功将大大简化核移植程序。     

哺乳动物异种体细胞核移植技术的应用及影响因素

哺乳动物异种体细胞核移植技术是在同种细胞核移植技术基础上发展起来的动物生殖技术,其在濒危动物保护、人类胚胎干细胞及生物基础学科研究等方面已展现出美好的前景.目前,该技术处于发展阶段,还存在很多值得研究的问题.文章介绍了动物异种体细胞核移植技术在国内外的研究现状,分析了影响异种体细胞核移植技术发展的因素,并对该技术的发展前景进行了展望.     

异种动物核移植研究进展

异种核移植作为新型发展起来的动物繁殖技术 ,在畜牧生产、医学、生物学领域愈来愈表现出其巨大的价值。人们以前已经进行了一系列的探索 ,如在供体细胞方面 ,人们尝试使用了包括肝脏细胞、乳腺细胞在内的各种类型的细胞 ,并采取各种措施处理供体细胞 ;而对于受体细胞多采用卵泡 -卵丘复合体进行体外培养或通过超排获得 ;比较各种融合方法 ,目前多采用电融合方法 ,也较化学融合、病毒介导融合等方法简单 ;至于重构胚的培养则多采用培养液体外培养的方法 ,此方法操作简单 ,也比较容易观察记录实验过程。同时也指出异种核移植仍存在如克隆的效率很低等一系列急待解决的问题