肝片吸虫抗原的研究

肝片吸虫病是人畜共患寄生虫病之一,常以慢性亚临床的形式出现,较难从临床症状上作出早期诊断。传统的粪便检查法在虫体移行的2一4个月期间查不到虫卵,必须待虫体在宿主肝、胆管中发育成熟后,才有虫卵随粪便排出体外,即使在显症期也只有50％的病人可从粪便或十二指肠引流物中找到虫卵,家畜的虫卵检出率更低。因此,早期确证就需要免疫学诊断。免疫学诊断中,由于肝片吸虫抗原成分复杂,包括有14种多糖,10种脂蛋白,6种糖蛋白,它们在宿主体内各自产生免疫反应,势必分散功能性抗原的作用’‘’。所以,选择合适的抗原是肝片吸虫病免…     

肝片吸虫免疫显性抗原基因的筛选及鉴定

为筛选出特异的肝片吸虫诊断候选抗原,拓展诊断靶标,利用肝片吸虫阳性血清筛选肝片吸虫cDNA表达文库,获得肝片吸虫特异性抗原基因,采用RT-PCR技术扩增目的基因,连接表达载体pET-32a(+),构建重组质粒,转化入感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG对重组蛋白进行诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blot技术对蛋白表达情况进行鉴定。结果显示:经筛选获得了17个肝片吸虫免疫显性抗原基因,其中假定蛋白Fh010935为肝片吸虫特异性抗原基因;扩增得到的Fh010935核苷酸序列大小为144 bp,编码48个氨基酸,A+T含量为55.56%;Fh010935蛋白由1个α-螺旋,2个β-折叠和3个β-转角构成,具有3个抗原表位,推测该蛋白可能具有较好的抗原性;重组蛋白主要以包涵体形式表达,分子量大小约24 ku,可以被肝片吸虫感染阳性血清特异性识别,具有较好的反应原性。提示:假定蛋白Fh010935可作为肝片吸虫病诊断候选抗原,为疾病诊断制剂的开发提供前期基础。     

肝片吸虫免疫显性抗原基因的筛选及鉴定

为筛选出特异的肝片吸虫诊断候选抗原,拓展诊断靶标,利用肝片吸虫阳性血清筛选肝片吸虫cDNA表达文库,获得肝片吸虫特异性抗原基因,采用RT-PCR技术扩增目的基因,连接表达载体pET-32a(+),构建重组质粒,转化入感受态细胞BL21(DE3)中,利用IPTG对重组蛋白进行诱导表达,通过SDS-PAGE及Western blot技术对蛋白表达情况进行鉴定。结果显示:经筛选获得了17个肝片吸虫免疫显性抗原基因,其中假定蛋白Fh010935为肝片吸虫特异性抗原基因;扩增得到的Fh010935核苷酸序列大小为144 bp,编码48个氨基酸,A+T含量为55.56%;Fh010935蛋白由1个α-螺旋,2个β-折叠和3个β-转角构成,具有3个抗原表位,推测该蛋白可能具有较好的抗原性;重组蛋白主要以包涵体形式表达,分子量大小约24 ku,可以被肝片吸虫感染阳性血清特异性识别,具有较好的反应原性。提示:假定蛋白Fh010935可作为肝片吸虫病诊断候选抗原,为疾病诊断制剂的开发提供前期基础。     

片形吸虫分泌排泄抗原和虫体抗原的分析

用牛源肝片吸虫（南京）、牛源大片吸虫（广西）和羊源肝片吸虫（实验感染）制备可溶性虫体抗原（BA）和和分泌排泄抗原（ES），以SDS－PAGE电泳分析比较，结果显示，3株虫体可溶性虫体抗原至少有20条以上的主要蛋白条带，分子量集中于10－90KD之间，它们之间无显著差异，而3株分泌排泄抗原蛋白成分较简单，明显可分的条带不超过5条，分子量集中于10－30KD之间，且均拥有26－28KD的蛋白成分，提示该蛋白应为片形吸虫ES抗原的主要免疫成分。     

肝片吸虫分泌排泄抗原及主要多肽对动物模型的免疫保护

体外培养肝片中吸虫成虫,制备收集其分泌排泄抗原（ＥＳ抗原）。通过制备性ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳方法分离纯化分泌排泄抗原中免疫印迹信号最强的两种多肽－１８．６ＫＤ和１７．２ＫＤ多肽。用分泌排泄抗原和两种多肽分别对动物模型进行免疫保护性试验。大鼠和家兔经抗原免疫后,口服攻击新鲜活性肝片吸虫囊蚴,攻击感染的第６０天解剖动物,统计活虫数并计算减虫率。试验结果显示：肝片吸虫的ＥＳ抗原和１８．６ＫＤ及１７．２     

胰吸虫与肝片形吸虫成虫抗原的酶联免疫印迹分析

用SDS-PAGE和酶联免疫印迹试验(ELIB)分析胰吸虫成虫(EP）及其与肝片形吸虫成虫(Fh)交叉／共同抗原的分子量和免疫活性。SDS-PAGE结果显示，胰吸虫和肝片形吸虫成虫抗原的多肽均达30余条，EP抗原分子量在123kd以下，主带4条；Fb抗原分子量在83kd以下，主带4条；两者具相同分子量的多肽6条。ELIB结果显示，抗原与同源抗血清呈现颜色较深、数量较多的区带，而与异源抗血清则呈现数量不等的交叉／共同反应区带，表明两虫之间存在交叉／共同抗原性多肽。     

用几种电泳方法分析牦牛肝片吸虫不同部位抗原

应用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等电聚焦电泳（ＩＥＦ）及双向电泳三种电泳方法分析牦牛肝片吸虫成虫四种抗原（头抗原－ＨＡ、体抗原－ＢＡ、体表抗原ＳＡ、分泌排泄抗原－ＥＳ）。ＳＤＳ－ＰＡＧＥ结果表明，ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ分子量在１２～１００ｋＤ之间，ＥＳ在１２．３～２６ｋＤ之间，蛋白质染色ＢＡ、ＨＡ、ＳＡ、ＥＳ分别显示２５、２４、１８、９条带；ＩＥＦ分析肝片吸虫分别得３４、３３、２８、２２条带，主要由酸性蛋白质组成，主要谱带在ｐＩ４．２０～６．５５内；双向电泳分析ＢＡ、ＥＳ多肽斑点为６９、３０个     

牦牛肝片吸虫分泌排泄抗原的生化特性和免疫印迹分析

肝片吸虫的分泌排泄抗原（ＥＳ抗原）在诊断及诱导机体产生抗体方面具有重要作用。本文对寄生于牦牛的肝片吸虫ＥＳ抗原的蛋白质组成及其生化特性进行了分析。ＳＤＳ聚丙烯酰胺凝胶电泳显示ＥＳ抗原共有９条带,主要由１２－２６ＫＤ的小分子量蛋白质组成;糖蛋白及脂蛋白染色后发现ＥＳ抗原中糖蛋白极少,而含有较多的脂蛋白;等电聚焦电泳结果显示ＥＳ抗原有２２条带,几乎全部是酸性蛋白,ｐＩ主要集中在４．２５～５．２５范围内;双向电泳共检出３０个多肽,主要分布在ｐＩ４．５～７．０之间;免疫印迹分析结果表明：ＥＳ抗原中分子量为１６．２ＫＤ～１８．６ＫＤ的蛋白质是主要的抗原成分,其中１７．２ＫＤ多肽具有最强的免疫原性。     

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原（ＥＳＡg）的酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测人工感染肝 吸虫的山羊血清中特异性ＩgＧ抗体动态变化。ＥＳＡg用量为１３．８ug/孔，抗体稀释１ ０００倍，二抗１：２０００稀释（３．５ug/孔），ＨＲＰ标记的葡萄球菌Ａ蛋白（ＳＰＡ＊）工作浓度为１：４０。检测结果表明，２组实验山羊（第１组每只羊口服２００ 个 囊蚴，第２组每只羊口服５００个囊蚴）在感染后第３周血清中的持异ＩgＧ即开始升高最     

肝片形吸虫和巨片形吸虫同工酶的分析

同工酶与基因和遗传有着密切的关系，生物种类的不同可表现为某些同工防的数量和种类的变化。因此，它可作为一项生化指标，研究生物的分化情况。本文对人畜共患的两种片吸虫的同工配进行研究，发现二者的某些同工酶存在明显差异。1．材料与方法1．1材料来源成虫采自福州市屠宰场宰杀的黄牛和山羊的胆囊和胆管中，分别选出典型的肝片形吸虫和巨片形吸虫的成虫。本研究所使用的试剂均系分析纯。1．2匀浆制各：将典型的肝片形吸虫和巨片形吸虫的成虫分别用生理盐水洗3次，成虫用pH74的缓冲液在冰水浴中研磨5分钟，高速离心（1200转／分）10分…     

羊肝片吸虫的诊断及治疗

羊肝片形吸虫又称肝蛭病,是由肝片形吸虫寄生在羊的肝脏胆管引起的一种蠕虫病,多呈区域性、地方性流行,幼虫寄生在肠内经一段时间钻出肠壁向肝脏移行,也就是幼虫的第四期,危害最为严重,进入肝脏导致发病致使羊大量死亡,该病慢性和隐性症状的患病羊可因消瘦,发育不良及毛、乳产量和有些生产性能呈显著降低而造成严重经济损失。     

肝片吸虫感染致斑纹角马死亡案例调查

首次报道了国内圈养斑纹角马肝片吸虫病确诊病例。诊断依据：（1）提示性临床症状：贫、消瘦、营养不良;（2）尸体剖检特征性病理变化：胆管显著扩张和胆管内挤排出大量肝片吸虫成虫的虫体;（3）肝片吸虫感染强度测定：运用麦克马斯特法测定了病死角马肝片吸虫感染强度为1 600个/g;（4）中间宿主调查：角马的饲养区内发现大量椎实螺,椎实螺体内含有大量的肝片吸虫尾蚴;（5）组织病理学检查：细支气管和肺泡腔内见有童虫的虫体结构。首次证实了角马肝片吸虫感染时,童虫在移行过程中可误移至肺,导致肺的病理变化。该病的发生与环境潮湿多水、环境中存在大量椎实螺而未被重视有关。肝片吸虫宿主范围广,应重视易感动物的生活环境,定期粪检确定感染率和感染强度,以及选择有效的药物防治,这是科学预防该病的关键。     

山羊水肿梭菌与肝片吸虫混合感染的诊断

山羊水肿梭菌病，也称羊黑疫．又名传染性坏死性肝炎(Infections necrotic hepatitis)，它是由B型诺维氏梭菌引起的山羊和绵羊的一种高度致死性毒血症，并以肝实质发生坏死性病灶为其主要特征。山羊水肿梭菌常与肝片吸虫混合感染。现将1例山羊水肿梭菌与肝片吸虫混合感染病例的发病情况、病理剖检变化、实验室检查及动物回归试验作简要介绍，供广大临床兽医工作者和养羊专业户参考。     

肝片吸虫的特性及肝片吸虫病的预防与治疗

肝片吸虫病是一种寄生虫病,主要是由肝片吸虫寄生在牛羊等反刍动物肝脏、胆管内引发的。该病的感染率高,发病率为10%~100%,能引起急性、慢性的肝炎或胆管炎,并可继发全身的中毒和营养障碍,不仅影响羊的生长发育,而且导致羊的生产性能显著降低,病情严重者能够引起羊只的大批死亡,危害非常严重。在充分查阅资料和调研的基础上,阐明肝片吸虫的发育特征、对羊致病的危害性与规律,并提出预防和治疗的措施,以供养羊户参考。     

大鼠感染肝片吸虫后某些免疫介质变化的研究

３０只成年大鼠随机分成感染组和对照组，感染组每只习一次口服２５个肝片吸虫囊蚴。通过整体和肝脏离体灌流的方法研究大鼠在感染肝片吸虫后机体免疫功能的变化以及一些免疫介质在抗肝片吸虫和诱导肝损伤中的作用。结果发现，大鼠抗肝片吸虫ＥＳ抗原特异抗体（ＩgＧ）从感染后第２周开始显著升高，第８周回落到与对照组相当水平。感染组大鼠血浆 和肝组织匀浆中ＮＯ水平虽高于对照组，但差异不显著（P〈０．０５），而离体肝脏灌流     

分泌抗肝片吸虫单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

用纯化的肝片吸虫可溶抗原免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与骨髓细胞融合，经ＥＬＩＳＡ筛选和３次克隆化培养后获得３株分泌抗肝片吸虫单克隆抗体的杂交瘤细胞。３株杂交瘤细胞分泌的特异性单克隆抗体经ＥＬＩＳＡ检测均属ＩｇＧ１亚类，上述杂交瘤细胞经反复冻存、复苏和连续传代培养，证实其分泌抗体的性质稳定。     

急性感染肝片吸虫水牛的某些免疫反应研究

本实验选用12头体重为300－500kg，年龄2－3岁的雄性去势水牛，经粪便检查和Dot-ELISA检测确认为无肝片吸虫感染后，随机分为感染组（n=9）和对照组（n=3）。感染组每头水牛1次性经口感染1600个肝片吸虫囊蚴。实验期间由专人饲养，自由采食青干草和饮水。每周定时颈静脉采血，测定外周血淋巴细胞增殖反应、白细胞介素－2（IL－2）水平、T和B淋巴细胞比例、IgG水平以及血清蛋白总量和比例。结果表明：感染组水牛的T淋巴细胞刺激指数在感染后2－8周高于对照组，但刺激指数和IL－2与对照组均无显著性差异。感染组水牛的外周血T淋巴细胞比例从感染后第1周显著下降，以后一直在低于对照组水平波动，而淋巴细胞从感染后第1周开始显著升高，且一直在高于对照组范围内波动。感染组水牛的α-球蛋白、β－球蛋白与对照组相比均无显著性差异，而白蛋白从第5周开始显著下降，以后维持在低于对照组的水平范围波动；γ－球蛋白从第5周显著高于对照组，以后于对照组范围波动。感染组水牛的抗ES抗原（分泌－排泄抗原）的IgG抗体水平从第2周升高，并持续至实验结束。结果提示：体液免疫应答反应是水牛抗肝片吸虫感染的重要机制。     

临洮县绵羊肝片吸虫的感染调查

为了解临洮县绵羊肝片吸虫感染情况,2016～2020年,采用蠕虫剖检术检查屠宰绵羊（生产淘汰的成年羊）6610只,发现绵羊肝片吸虫感染率为49.7%,感染最高的南部阴湿区68.4%,最低的干旱山区23.7%。受降雨量的影响,感染最高的年份2019年59.7%,最低的为2016年37.7%。数据显示,成年绵羊肝片吸虫的感染率比较高,呈地方流行性,严重危害羊产业发展。加强科普宣传培训,宣传肝片吸虫潜在性的危害,提高群众认识,定期驱虫预防,及早治疗十分必要。     

应用肝片吸虫ES抗原检测实验感染山羊IgG的动态水平

用肝片吸虫排泄分泌抗原 ( ESA g)的酶联免疫吸附试验 ( ELISA)检测人工感染肝片吸虫的山羊血清中特异性 Ig G抗体动态变化。ESAg用量为 13.8μg/孔 ,抗体稀释 10 0 0倍 ,二抗 1∶ 2 0 0 0稀释 ( 3.5μg/孔 ) ,HRP标记的葡萄球菌 A蛋白 ( SPA* )工作浓度为 1∶ 4 0。检测结果表明 ,2组实验山羊 (第 1组每只羊口服2 0 0个囊蚴 ,第 2组每只羊口服 50 0个囊蚴 )在感染后第 3周血清中的特异 Ig G即开始升高 ,呈现动态变化趋势 ;第 2组于第 6周 ( 42 d) Ig G水平升到高峰 ,随后稍有下降 ,第 1组于第 9周 ( 6 3d) Ig G水平升到最高峰 ,随后又稍有下降 ,一直呈波动趋势 ;在试验的 3～ 17周期间 ,总体上虽第 2组抗体水平比第 1组高 ,统计分析无显著差异 ( P >0 .0 5) ,但均比对照组保持较高的水平 ,有显著差异 ( P <0 .0 5或 P <0 .0 1) ,表明山羊在肝片吸虫入侵后 ,很快产生了高水平的体液免疫 ,而 Ig G的波动可能与虫体的移行有关 ,与虫卵数量则无关。