牦牛血液铜锌超氧化物歧化酶cDNA克隆测序

本试验从牦牛血液中提取总RNA,然后用AMV反转录酶对其进行反转录产生第一条cDNA链。根据奶牛Cu/Zn-SODcDNA序列（序列号：NM174615）设计一对PCR引物,对反转录后产生的第一条cDNA链进行PCR扩增,并克隆测序,测序结果为483bp。结果证实可从牦牛血液中提取到少量合成的铜锌超氧化物歧化酶的mRNA。     

锌对鹅铜锌超氧化物歧化酶和丙二醛含量影响变化的研究

试验选用120只1日龄鹅随机分成四组,A组喂以玉米、大豆为基础饲粮未加锌的饲料,另外3组在基础日粮中添加ZnSO4·H2O,使锌含量分别为40mg/kg(B组),110mg/kg(C组)和2000mg/kg(D组)。分别于15日龄、30日龄和55日龄测定铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)活性和丙二醛含量变化。结果表明,在鹅血清和肝脏中,A、D组CuZn-SOD活性低于B、C组,C组的MDA含量在四组中最低。在整个试验过程中脾脏CuZn-SOD活性和MDA含量没有太大变化。该结果揭示了锌能影响鹅的抗氧化防御系统,锌添加量为110mg/kg时,可提高鹅抗氧化水平。     

毕赤酵母表达铜锌超氧化物歧化酶中试工艺研究

正交设计优化铜锌超氧化物歧化酶毕赤酵母在摇瓶及30L发酵罐的诱导表达条件,用两步层析法纯化表达的目的蛋白,在不同温度下进行原液稳定性试验。用考马斯亮蓝检测蛋白含量,活性检测试剂盒检测目的蛋白活性。纯化后原液参照中华人民共和国药典三部2005版进行检测,用SDS-PAGE、HPLC检测纯度,免疫印迹法检测rhCu,Zn-SOD特异性,等点聚焦测定该酶等电点,地高辛法检测残余DNA含量,酶联免疫法测定残余蛋白含量。结果显示正交试验的大罐高密度发酵最适条件比摇瓶的最适条所获得的目的蛋白活性高8倍,纯化后,HPLC纯度为99.7%,原液比活性大于6.0×103 U/mg,各项检测指标达到生物制品检定标准。该酶在45、65、85、100℃的半衰期分别为240、120、30、15。具有良好的酶稳定性。本研究建立了发酵、纯化的中试工艺,获得高表达、高纯度及高比活的铜锌超氧化物歧化酶,为规模化生产奠定了基础。     

家蚕铜锌超氧化物歧化酶的分离纯化及其部分性质的研究

家蚕体液经热变性、DEAE 琼脂糖柱层析、SephacrylS 2 0 0凝胶过滤和等电点聚焦电泳纯化 ,获得达到均一程度的高活性的铜锌超氧化物歧化酶 (Cu .Zn SOD)。活性回收率为 35 % ,纯化倍数为 1911倍。测得该酶的分子量约为 32 0 0 0D ,亚基分子量约为 16 0 0 0D。该酶在紫外光区与可见光区的吸收峰分别为 2 70nm和 6 76nm。测得该酶的等电点为pH 7.15。     

大肠杆菌铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与序列测定

试验以E.coliMG1655的基因组DNA为模板,通过PCR技术扩增sodC基因,PCR产物经纯化回收后克隆至pMD18-T载体中,转化E.coliDH5α感受态细胞,筛选阳性克隆,提取质粒进行SacI和KpnI酶切及PCR扩增鉴定,并对sodC基因片段进行序列测定。试验成功克隆了sodC基因,获得的基因与报道的sodC基因序列同源性达到99.6%,为进一步构建重组表达载体奠定了基础。     

半定量RT-PCR法分析猪肝脏中铜锌超氧化物歧化酶mRNA表达水平

细胞内铜锌超氧化物歧化酶（CuZnSOD）是动物体内一种重要的抗氧化酶。本实验室构建了优化的半定量RT-PCR法，以18S rRNA为内标，研究猪肝脏组织中CuZnSOD基因mRNA表达水平。提取猪肝脏组织总RNA，经反转录后进行扩增，先寻求PCR线性扩增范围，确定RT．PCR的最佳循环数和Mg^2＋浓度。扩增后用VDS摄像系统扫描PCR扩增产物的电泳条带灰度。通过CuZnSOD PCR产物的灰度与18S rRNA PCR产物的灰度之比，即可计算出CuZnSOD mRNA的相对含量。     

柞蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆与表达分析

超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内的重要保护性酶类。采用RT-PCR方法克隆了柞蚕(Antheraea pernyi)铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)基因的ORF序列。生物信息学分析表明,该序列共编码154个氨基酸,具有Cu/Zn-SOD的保守性结构特征,与家蚕(Bombyxmori)、美国白蛾(Hyphantria cunea)、野桑蚕(Bombyx mandarina)以及果蝇(Drosophila melanogaster)Cu/Zn-SOD基因的同源性分别是81.5%、81.7%、81.5%、66.7%。柞蚕蛹经紫外线照射处理后用半定量PCR方法检测,发现照射不同时间脂肪体内Cu/Zn-SOD基因的转录水平存在差异,在照射5 min后开始增加,至10 min时为转录高峰,15 min时又呈下降趋势。     

野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶基因的克隆分析与原核表达

超氧化物歧化酶是野桑蚕保护酶体系的重要酶类。利用RT-PCR方法克隆出野桑蚕铜锌超氧化物歧化酶(Cu/Zn-SOD)cDNA(EMB I登陆号:AM410997),其开放阅读框ORF长465 bp,编码154个氨基酸。同源性及系统进化分析表明,推导出的氨基酸序列与3种果蝇的同源性平均为69.3%,与线虫为57%,各物种中与Cu/Zn结合的残基高度保守。利用ExPASy的ScanProsite以及PSort和TMpred对此编码的蛋白质结构和功能域分析,预测出其具有2段Cu/Zn-SOD特异序列,且该蛋白不存在信号肽以及跨膜区。将Cu/Zn-SOD cDNA克隆到pET-28 a(+)表达载体,测序鉴定后以IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳鉴定其表达的融合蛋白质分子量为19.4 kD。     

牦牛铜锌超氧化物歧化酶基因cDNA克隆测序及其分子进化研究

对牦牛Cu／Zn—SODcDNA进行克隆测序。所扩增片段长度为842bp,编码区长度为459bp。扩增片段与奶牛Cu／Zn-SODcDNA序列比较发现有16个碱基存在差异。通过与已知Cu／Zn-SODcDNA序列的7个物种：人、猪、鼠、大鼠、奶牛以及马的cDNA序列的比较构建了分子进化系统树。对所得序列的ORF分析发现,牦牛Cu／Zn—SOD由152个氨基酸组成,并对氨基酸序列进行了比对分析。     

铜锌超氧化物歧化酶的研究进展

铜锌超氧化物歧化酶是机体防御氧化损伤的一种十分重要的金属醇,能专一性地清除超氧阴离子自由基(O2-),在维持氧自由基平衡方面起着重要作用.本文综述了生物体内两种铜锌超氧化物歧化酶的分布、蛋白结构、生物学功能等方面的应用进展.     

牦牛铜锌超氧化物歧化酶基因cDNA克隆测序及其分子进化研究

对牦牛Cu/Zn-SOD cDNA进行克隆测序。所扩增片段长度为842bp,编码区长度为459bp。扩增片段与奶牛Cu/Zn-SOD cDNA序列比较发现有16个碱基存在差异。通过与已知Cu/Zn-SOD cDNA序列的7个物种:人、猪、鼠、大鼠、奶牛以及马的cDNA序列的比较构建了分子进化系统树。对所得序列的ORF分析发现,牦牛Cu/Zn-SOD由152个氨基酸组成,并对氨基酸序列进行了比对分析。     

维生素C对中华蜜蜂死亡率及其铜锌超氧化物歧化酶基因表达的影响

本研究以中华蜜蜂(Apis cerana cerana)为试验材料,通过笼养的方法饲养刚出房的中华蜜蜂,并饲喂不同剂量的维生素C(vitamin C,VC),检测其对中华蜜蜂死亡率及铜锌超氧化物歧化酶(Acc-SOD1)mRNA相对表达量的影响。结果表明,随着VC添加剂量的升高,中华蜜蜂的死亡率显著下降(P<0.05),Acc-SOD1相对表达量呈下降趋势,但差异不显著(P>0.05)。     

铜对猪原代肝细胞中铜锌超氧化物歧化酶和丙二醛活性的影响

肝细胞的体外培养是研究肝脏和肝细胞功能的有效途径。虽然体外培养的肝细胞不受完整机体所存在的神经体液调节作用的影响,但由于其便于施加各种试验因素,从而用于多方面的研究。试验拟在建立体外培养原代肝细胞模型的基础上,通过向体外培养的肝细胞模型中添加铜,观察肝细胞中铜锌超氧化物歧化酶(CuZn-SOD)和丙二醛(MDA)的活性变化,为探究高铜促生长机理提供试验依据。1材料与方法1.1材料1.1.1试验动物选用初生1~3日龄的“军牧1号”健康仔猪作为肝细胞供体,雌雄不限,体重0.5~1.0 kg,由吉林大学农学部大学动物繁育中心种猪场提供。1.1.2…     

蛋氨酸铜对猪血清铜锌含量及粪铜锌排泄量的影响

为了研究饲粮中添加蛋氨酸铜与硫酸铜对生长猪生长性能、养分消化率、血清铜锌含量及粪铜锌排泄量的影响。选择体重为17．17±2．34kg（P〉0．05）的二元杂交（长×大）生长阉公猪30头进行试验,试猪按完全随机区组设计,依体重和窝别随机分为5个处理,每个处理3个重复,每个重复2头猪,分别饲喂10、150、250mg／kg蛋氨酸铜和150、250mg／kg硫酸铜,试验期30d。结果表明：饲喂蛋氨酸铜组ADG、F／G及表观养分消化率具有明显的优势;血清铜含量随饲粮铜水平的提高而发生显著变化,而高铜组组间血清锌差异不显著;蛋氨酸组粪铜排泄量比硫酸铜组粪铜排泄量显著降低。说明：添加中等水平的有机蛋氨酸铜吸收利用率比高剂量硫酸铜高,且可减少粪铜、锌的排泄。     

蛋氨酸铜对猪血清铜锌含量及粪铜锌排泄量的影响

为了研究饲粮中添加蛋氨酸铜与硫酸铜对生长猪生长性能、养分消化率、血清铜锌含量及粪铜辞排泄量的影响.选择体重为17.17±2.34kg(P＞0.05)的二元杂交(长×大)生长阉公猪30头进行试验,试猪按完全随机区组设计,依体重和窝别随机分为5个处理,每个处理3个重复,每个重复2头猪,分别饲喂10、150、250mg/kg蛋氨酸铜和150、250mg/kg硫酸铜,试验期30 d.结果表明:饲喂蛋氨酸铜组ADG、F/G及表观养分消化率具有明显的优势;血清铜含量随饲粮铜水平的提高而发生显著变化,而高铜组组问血清锌差异不显著;蛋氨酸组粪铜排泄量比硫酸铜组粪铜排泄量显著降低.说明:添加中等水平的有机蛋氨酸铜吸收利用率比高剂量硫酸铜高,且可减少粪铜、锌的排泄.     

猪血铜锌超氧化物歧化酶的简化提纯

探索了一条简便制备SOD的工艺路线。通过60℃热变性、氯仿—乙醇沉淀和丙酮沉淀。结果从猪血红细胞中提取的SOD的比活达3400U·mg-1,总回收率为72%。该工艺操作简单,所需的仪器设备少,易于调控,适宜工业化生产。     

铜,锌,硒,碘复合微量元素饲喂泌乳牛的试验

根据本研究组已完成的《微量元素铜、锌、硒、碘单因子饲喂泌乳牛的试验》（见《中国奶牛》1998．630）,我们拟定了两个同时添加欠缺铜、锌、硒、碘等微量元素的复合配方。通过分组对比试验,测定这两配方对促进泌乳,改善饲料转化效率及降低成本的效果;同时测定试验牛血液和乳汁中铜、锌、硒、碘含量的变化,观测了乳中这些微量元素变动对人类营养的意义,以便取得饲喂泌乳牛效益最佳,对人类健康有利且实用的微量元素添加剂配方。1试验方法1．1试验牛的选择和分组选择泌乳量、血缘、体重近似的第三、四、五胎中国荷斯坦健康母牛各6头,…