禽致病性大肠杆菌外膜蛋白研究现状与进展

对近年来国内外关于大肠杆菌外膜蛋白的生理功能、致病作用、免疫原性以及疫苗开发等方面的研究现状及发展进行了综述.     

细菌外膜蛋白的研究现状

细／菌／外／膜／蛋／白／的／研／究／现／状赵香汝＊杨汉春（中国农业大学动物医学院，北京海淀１０００９４）外膜在细菌胞浆膜（内膜）和肽聚糖层的外侧，包围整个细菌，是革兰氏阴性菌细胞壁成分中所特有的结构，厚８～１０ｎｍ，约占细胞壁干重的８０％，是典型的非...     

细菌外膜蛋白的结构与功能

细菌外膜是典型，非对称性的磷脂双层结构、由脂质双层、微孔蛋白、脂蛋白、脂多糖组成，其主要成分为外膜蛋白（ＯＭＰ）。现状ＯＭＰ的结构、生理功能、免疫原性和致病作用机制进行论述。     

大肠杆菌外膜蛋白酶T研究进展

外膜蛋白酶T(Outer membrane protease T,OmpT)是大肠杆菌外膜的一种蛋白水解酶,是Omptin家族中第一个被解析结构的外膜蛋白,由10条反向平行的β折叠构成中空的桶状结构。OmpT能够识别两个连续的碱性氨基酸,并水解鱼精蛋白和血纤维蛋白溶酶原等。脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)对OmpT蛋白酶功能的激活具有重要作用。研究发现,OmpT对细菌的定植和黏附至关重要。文章围绕OmpT的结构、功能、毒力等方面综述该蛋白当前的研究进展。     

禽源多杀性巴氏菌外膜蛋白的提取及其对小鼠的免疫原性观察

用EDTA—溶菌酶系统处理无荚膜的5:A型禽多杀性巴氏菌,得到无粘肽层的细胞膜.蔗糖密度梯度离心,将细胞膜分成3部分.琥珀酸脱氢酶、还原型辅酶I-2,6 二氯酚靛酚(NADH-DICP)氧化还原酶和NADH氧化酶的活性以及脂多糖含量测定表明,这3部分分别是细胞内膜、细胞外膜和混合膜.用高压液相色谱法从分离的外膜中提纯外膜蛋白,获得2个主要成分P_1和P_2.将P_1和P_2分别免疫小鼠,其保护率分别为20%和90%.SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,P_2是一种主要的外膜蛋白,分子量为52000.     

新技术新产品

能分离出鸡大肠杆菌的新菌株 我国科研人员历经2年多的研制,“鸡大肠杆菌异型外膜蛋白细胞工程菌株的构建”,日前通过专家技术鉴定,并被确认为达到国内领先水平。鸡大肠杆菌病是鸡腹膜炎、输卵管炎、眼球炎、大肠杆菌败血病的总称,是危害养鸡业的严重疫病之一。科技工作者研制成的新型融合菌株,其稳定性     

陕西省部分禽源性大肠杆菌的外膜蛋白型

从陕西省部分优势血清型的禽源性大肠杆菌中提取外膜蛋白 (outer membrane protein,OMP) ,用 SDS- PAGE进行 OMP分型。 18株菌共产生了 3种 OMP型 ,其中 4株 O1菌株 ,4株 O2菌株 ,4株 O78菌株和 3株 O89菌株各属2个 OMP型 (OMP- 1,2型 ) ;3株 O75菌株属 3个 OMP型 (OMP- 1,2 ,3型 )。结果表明 ,陕西省分离的优势血清型禽源大肠杆菌具有多样性的 OMP型 ,且多种血清型间具有共同的 OMP型。     

鸡沙门氏菌外膜蛋白的免疫效果观察

用含ＥＤＴＡ的提取剂制备了鸡沙门氏菌外膜蛋白（ＯＭＰ），经琼脂扩散试验检测，与同源株抗血清出现特异性沉淀线，与不同源株出现完全同源和部分同源的沉淀线，经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析，ＯＭＰ抗原所含的蛋白质分子量介于１４～６７kＤ之间，并用电洗脱方法分别制备了分子量为２０～３０kＤ、３０～４３kＤ和４３～６７kＤ的ＯＭＰ抗原组分， 并将其用于免疫攻毒试验，结果表明，ＯＭＰ铝剂苗对鸡的死亡保护率为８９．４％，油剂     

支气管败血波氏杆菌外膜蛋白双向电泳图谱的建立

为建立支气管败血波氏杆菌(Bb)外膜蛋白(OMPs)双向电泳(2-DE)图谱,本研究利用碳酸钠法提取OMPs,并分别对裂解液、pH值、上样量、聚焦条件、染色方法等进行优化。2-DE结果表明,用裂解液5 MUrea、2 M Thiourea、2%CHAPS、2%SB3～10溶解蛋白,pH4～7的13 cm线性胶条考染上样量为750μg、银染上样量为75μg,聚焦条件为500 V,2 h,1 000 V,1 h,8 000 V,2∶30 h,8 000 V,4 h时,能获得聚焦良好、分离清晰的Bb OMPs图谱。本研究首次建立了Bb OMPs的2-DE图谱,为其蛋白质组学研究奠定了基础。     

革兰氏阴性菌外膜蛋白研究进展

外膜蛋白对细菌本身和宿主都具有重要的作用。本文综述了革兰氏阴性菌外膜蛋白的组成、结构、功能及遗传调控,外膜蛋白可作为大肠杆菌的克隆标志,在细菌的致病机理及免疫机理中都有重要作用,研制开发外膜蛋白疫苗具有广阔的应用前景,必将为细菌性疾病的防治提供有力的措施。     

病原性大肠杆菌人工感染鸡外膜蛋白抗体和脂多糖抗体的测定

以提纯的外膜蛋白（Ｏuter membuane puoteins,ＯＭＰs）作包被抗原,应用酶联免疫吸附试验（Ｅnzyme-linked immunosorbant assay,ＥＬＩＳＡ）,测定了禽病原性大肠杆菌Ｏ １８－５６６、Ｏ７８－１６６分离株人工感染鸡的ＯＭＰs抗体。上述分离株２次攻毒鸡的ＯＭＰs抗体高峰期在攻毒后的３～５周;同时,我们以间接血凝试验（Ｉndirict hemagglutination tist,ＩＨＴ）测定了其脂多糖（Ｌipopolysacchauide,ＬＰＳ）抗体,该抗     

8株鳖源变形杆菌外膜蛋白的比较

从 1 2批送检病鳖体内分离出 8株细菌 ,经形态学检查、生理生化特性测定、致病性测定和血清学鉴定 ,确定 7株为普通变形杆菌 ,1株为奇异变形杆菌。进一步采用十二烷基硫酸钠 (SDS)破菌法提取 8株鳖源变形杆菌的外膜蛋白 (OMP)进行SDS PAGE电泳 ,比较分析细菌OMP型。结果显示奇异变形杆菌的OMP型由 3条相对分子质量范围为 3 0× 1 0 4～4 3× 1 0 4的主要蛋白带组成 ;7株普通变形杆菌的主要外膜蛋白相对分子质量范围为 3 0× 1 0 4～6 7× 1 0 4,分属 2个OMP型 ,其中 4个分离株属OMP1型 ,由 4条主要蛋白带组成 ;其余 3个分离株属OMP2型 ,由 7条主要蛋白带组成。表明不同种变形杆菌的OMP型差异较大 ,同种不同株变形杆菌的OMP型相似 ,但蛋白带的迁移率及颜色深浅在菌株间仍有差异。此外 ,发现相对分子质量约为 4 3× 1 0 4的一条外膜蛋白带为所有菌株所共有 ,可能是变形杆菌属特异性抗原     

广东省猪大肠杆菌优势血清型O107外膜蛋白的提取

实验室从广东省鉴定的猪大肠杆菌优势血清型O₁₀₇中,选出一株有致病性菌株。通过细菌培养、超声波裂解、N—十二烷基肌氨酸钠处理和超速离心技术提取出大肠杆菌O₁₀₇的外膜蛋白。提取物经SDS—PAGE电泳检测后发现蛋白条带大小与预期的实验结果相同。     

鸭疫里氏杆菌外膜蛋白免疫原性研究

本研究采用超速离心法提取鸭疫里氏杆菌的外膜蛋白,在电镜下呈典型的双层泡状结构,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ电泳分析结果细菌的外膜蛋白的分子量在２１ＫＤ和１５１ＫＤ之间。经Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测表明,４４ＫＤ外膜蛋白与免疫鸭血清和自然感染后康复鸭血清出现较强的阳性反应,而感染发病的濒死鸭血清反应则很微弱。     

布鲁菌外膜蛋白及毒力因子研究进展

布鲁菌细胞膜的基本结构包括脂多糖和外膜蛋白,与细菌的毒力及免疫原性相关。文章描述了布鲁菌外膜蛋白分子结构的最新进展。该菌的外膜蛋白由第一组、第二组和第三组外膜蛋白构成。第一组外膜蛋白对维持布鲁菌外膜蛋白的结构起重要作用;第二组包括36 ku~38 ku外膜蛋白,为膜孔蛋白,由Omp2a和Omp2b基因编码,其中38 ku蛋白基因可能是一个与毒力相关的基因;第三组外膜蛋白包括31 ku和25 ku两个相关的蛋白,具有重要的免疫功能。31 ku蛋白属膜孔蛋白,25 ku蛋白还与毒力有关。文章也介绍了布鲁菌毒力因子研究的最新进展。     

气单胞菌外膜蛋白基因工程疫苗的研究进展

就气单胞菌外膜蛋白的基因工程亚单位疫苗、DNA疫苗、重组活载体疫苗等基因工程疫苗的研究现状、免疫方式以及不足之处进行了综述,以期为气单胞菌疫苗研制提供参考。     

EDTA对鸭疫里氏杆菌外膜蛋白表达及免疫原性的影响

用加入金属离子螯合剂EDTA的TSB(胰酪胨大豆肉汤)培养基,培养鸭疫里氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA)Ⅰ型,将未加入EDTA的TSB培养的RAⅠ型菌株作对照。比较后发现,加入EDTA组的外膜蛋白(OMPs)的SDS-PAGE图谱发生改变,从34 ku~100 ku增加了多条蛋白条带,特别是39 ku,60 ku和110 ku蛋白浓度较大。电泳胶经Western-blot(康复血清作为一抗,自制酶标兔抗鸭为二抗),与对照组相比,实验组增加了39 ku条带。实验证明,加入金属离子螯合剂EDTA对外膜蛋白的表达和免疫原性均有影响。