家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

自Whittingham(1977)首次成功的报道冷冻-解冻的小鼠卵母细胞活仔以来，国内外诸多学者对家畜及人的卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前，已有小鼠、家兔、牛等动物以及人的卵母细胞冷冻成功，并得到了后代。在国内，山羊、绵羊、猪等家畜的卵母细胞冷冻保存也已有报道。随着胚胎工程技术的不断发展，卵母细胞的冷冻保存越来越受到重视，这将推动卵母细胞的冷冻保存取得更大进展。     

家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

自Whittingham(1977)首次成功的报道冷冻-解冻的小鼠卵母细胞活仔以来,国内外诸多学者对家畜及人的卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前,已有小鼠、家兔、牛等动物以及人的卵母细胞冷冻成功,并得到了后代。在国内,山羊、绵羊、猪等家畜的卵母细胞冷冻保存也已有报道。随着胚胎工程技术的不断发展,卵母细胞的冷冻保存越来越受到重视,这将推动卵母细胞的冷冻保存取得更大进展。1抗冻保护剂在卵母细胞和胚胎的冷冻保存时,需使用抗冻保护剂,它可以改变细胞在冷冻过程中的物理化学环境,减轻或避免冷冻、解冻过程中的冷冻损伤。抗冻保护剂主要为一…     

绵羊卵母细胞的玻璃化冷冻保存

玻璃化法是近几年才建立起来的一种细胞、胚胎及卵母细胞的冷冻保存技术。Nekagata和Shaw分别于1989年和1991年用此化法冷冻保存小鼠成熟卵母细胞,取得理想结果。本实验对玻璃化法冷冻保存绵羊卵巢内卵母细胞作了尝试。1 材料与方法从屠宰后东北细毛羊取出卵巢,用注射器从直径2～6mm的卵泡中抽取卵丘—卵母细胞复合体,选择正常的用成熟培养液(M199+10%FCS)洗2次后,转入VS_1(20.5%(w/v)二甲基亚砜,     

小鼠未成熟卵母细胞OPS法冷冻保存技术的研究

试验用OPS法对小鼠未成熟卵母细胞进行玻璃化冷冻保存研究,并对解冻后小鼠未成熟卵母细胞的成熟情况进行观察。结果表明:小鼠未成熟卵母细胞在10%EG、10%DMSO前处理后,在EFS30、EFS40、EDFS30和EDFS40中平衡15～45s进行冷冻保存,使卵母细胞解冻后的形态正常率最高达92.4%,与对照组无显著差异(P>0.05),成熟率达40.5%。     

羊卵母细胞冷冻保存研究进展

哺乳动物卵母细胞冷冻保存不仅对于濒危物种的保存具有重要意义,而且可以对胚胎生物技术的发展、生物资源保护与利用以及人类辅助受精技术的研究等具有重要意义,同时为基础研究提供大量可利用的材料.卵母细胞玻璃化冷冻保存的应用前景非常广阔,利用卵母细胞玻璃化冷冻保存技术建立"卵子库"不仅可以解决目前卵母细胞来源短缺的问题,还可以使其它生物技术如体外受精、克隆和转基因动物生产不受时间和空间的限制,并且代替家畜的活体保种和濒危动物遗传种质资源保存.在人类医学上,卵母细胞的冷冻保存将会为那些由于病理或其他原因而造成不孕的病人提供一个挽救生育的机会.     

小鼠卵母细胞冷冻保存技术研究进展

卵母细胞的冷冻保存是动物繁殖技术领域生殖细胞冷冻的研究热点。在此介绍了小鼠卵母细胞冷冻保存的研究进展，阐述了小鼠卵母细胞冷冻保存的原理，探讨了冷冻保护剂的作用机理。最后，对小鼠卵母细胞的冷冻保存方法及其原理进行了概括。     

小鼠卵母细胞SSV法冷冻保存技术的研究

试验用2种前处理液(10%EG和10%EG 10%DMSO)和4种玻璃化冷冻液(EFS30、EFS40、EDFS30和EDFS40)对小鼠卵母细胞进行玻璃化(SSV)法冷冻保存,研究小鼠卵母细胞冷冻后的发育潜力。结果表明:小鼠未成熟卵母细胞形态正常率最高可达92.3%,成熟率达57.2%;成熟卵母细胞形态正常率最高可达91.5%。     

家畜卵母细胞冷冻保存研究进展

通过随时随地提供具有发育能力的卵母细胞,卵母细胞冷冻保存将赋予体外受精、核移植、转基因等胚胎工程技术的极大灵活性。本文综述了冷冻保存对家畜卵母细胞发育能力的影响。     

昆明小鼠成熟卵母细胞冷冻保存方案的优化与改进

5-6周龄雌性昆明小鼠的成熟卵母细胞,在不同前处理液(10% EG或10% EG 10% DMSO)中平衡5 min,然后在冷冻溶液(EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40)中平衡30 s后进行开放式拉长麦管法(OPS,open pulled straw)和固体表面冷冻法(SSV,solid-surface vitrification)玻璃化冷冻保存研究.试验结果表明:玻璃化冷冻中,多种抗冻保护剂组合使用的效果优于使用单一抗冻保护剂,而且EDFS冷冻液冷冻保存小鼠卵母细胞的效果好于EFS,尤其是EDFS30;SSV法冷冻保存小鼠成熟卵母细胞效果优于OPS法.     

猪卵母细胞冷冻保存效果的评判

建立快速、准确、有效的猪卵母细胞冷冻保存效果的判定方法,将有助于促进猪卵母细胞冷冻保存的研究,从而提高猪卵母细胞冷冻保存效果,为哺乳动物配子和胚胎工程方面的研究提供大量优质卵母细胞。作者主要介绍通过形态学观察结果和发育潜力来判定猪卵母细胞冷冻保存效果的一些方法,如检查冷冻解冻后猪卵母细胞形态和超微结构正常情况,或进行体外成熟、体外受精、孤雌激活、显微受精,然后据此对猪的卵母细胞冷冻保存效果进行评判。     

卵母细胞冷冻保存研究进展

1977年Whittingham首次成功报道冷冻一解冻小鼠MⅡ期卵母细胞产仔,自此许多学者对多种动物及人卵母细胞冷冻保存进行了研究。目前小鼠、家兔、牛、马、山羊、绵羊及猪等动物卵母细胞的冷冻保存均有报道,而世界上已经有100多个冷冻卵母细胞的婴儿出生。卵母细胞的冷冻保存可为体外受精、核移植、转基因动物的研制提供更方便的材料来源;[第一段]     

羊卵母细胞冷冻保存研究进展

近年来,绵羊、山羊胚胎工程技术的快速发展致使对卵母细胞的需求量越来越大。此外,作为家畜种质资源保护体系的组成部分,卵母细胞也是保存优秀雌性家畜遗传资源的重要方式之一。然而,作为胚胎生物技术的重要环节,由于其自身特殊的结构功能特点,卵母细胞对低温和冷冻极其敏感,其冷冻保存研究水平远低于胚胎。因此,如何提高冷冻保存卵母细胞质量是低温生物学和胚胎生物技术研究领域的热点和难点。针对目前绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存的最新研究进展和存在问题进行综述,同时针对如何进一步提高绵羊、山羊卵母细胞冷冻保存质量提出建议,以期为之后的研究工作提供理论指导。     

哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻研究进展

哺乳动物GV期卵母细胞的玻璃化冷冻保存技术为家畜胚胎生物技术提供了卵子库,有利于濒危动物和珍稀野生动物遗传资源的长期保存,是维持物种多样性乃至人类生殖力保存的重要途径。至今,玻璃化冷冻技术已成功用于多种哺乳动物GV期卵母细胞的冷冻保存。与此同时,玻璃化冷冻会对GV期卵母细胞产生的细胞学损伤及表观遗传的影响,成为制约其应用潜力的关键瓶颈。本文综述了近年来哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻的研究进展,并对冷冻损伤及对策进行了系统分析,为哺乳动物GV期卵母细胞玻璃化冷冻的后续研究提供参考。     

玻璃化冷冻对小鼠GV期卵母细胞发育能力的影响

试验首次采用OPS法玻璃化冷冻小鼠GV期卵母细胞(不带卵丘细胞,下同),同时尝试用EDFS30对小鼠卵巢进行细管法玻璃化冷冻,以研究GV期卵母细胞冷冻后的发育潜力。首先,利用MEM培养和MEM-腔前卵泡培养新鲜GV期卵母细胞,并把较好的培养方式用于冷冻后培养试验。2种培养方式培养24h后新鲜GV期卵母细胞成熟率无显著性差异;OPS法冷冻的GV期卵母细胞解冻后成熟率及体外受精后卵裂率与对照组差异不显著(P>0.05)。细管法冷冻卵巢组织的GV期卵母细胞成熟率极显著低于对照组(P<0.01),其受精后未获得受精卵。结果表明:OPS法可有效地冷冻保存小鼠GV期卵母细胞,而细管法冷冻小鼠卵巢对GV期卵母细胞损伤较大。     

昆明小鼠成熟卵母细胞冷冻保存的试验研究

试验选用5-6周龄雌性昆明小鼠的成熟卵母细胞，在不同前处理液（10％EG或10％EG＋10％DMSO）中平衡5min，然后在冷冻溶液（EFS30、EFS40、EDFS30或EDFS40）中平衡30s后进行OPS法和SSV法玻璃化冷冻保存。试验结果表明：（1）小鼠成熟卵母细胞的OPS法冷冻保存，用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率为75．8％，激活后卵裂率为47．8％；在EDFS30中冷冻保存，解冻后形态正常率为87．2％，卵裂率为62．0％；在EDFS40中冷冻保存，解冻后形态正常率为86．6％，卵裂率为57．4％，与对照组（99．0％和80．5％）相比，差异极显著（P〈0．01）。（2）小鼠成熟卵母细胞的SSV法冷冻保存，用EFS冷冻的卵母细胞解冻后形态正常率为82．7％，卵裂率为47．1％；在EDFS30中冷冻保存，解冻后形态正常率为91．5％，卵裂率为57．5％；在EDFS40中冷冻保存，解冻后形态正常率最高为85．1％，卵裂率为55．9％，与对照组（99．0％和80．5％）相比，差异极显著（P〈0．01）。（3）OPS法和SSV法冷冻小鼠成熟卵母细胞解冻后形态正常率为86．5％和91．6％，卵裂率为53．8％和55．6％．与对照绢相比。差异极显著（P〈0．01）。     

牛冻卵体外受精产犊

近年来牛冻胚己商业化应用,如果牛卵母细胞能冷冻保存,则对建立胚胎库及提高遗传改良技术将是很有利的。本试验的目的是建立一种卵母细胞冷冻方法,即一步加入或除去高渗冷冻保护剂来冷冻保存未成熟牛卵母细胞。1 卵母细胞冷冻1.1 未成熟卵母细胞冷冻从屠宰场取回牛卵巢,用生理盐水保存,2小时内带到实验室。从卵巢吸出卵母细胞,用改进的磷酸盐缓冲液(m-PBS)洗两次,在含有 Hepes 缓冲液的 TCM199+10%超排     

猪卵母细胞OPS玻璃化冷冻保存的研究

为了研究猪卵母细胞的开放性拉长脉管(OPS)玻璃化冷冻保存,试验采用不同的冷冻保护剂对比生发泡期(GV期)(体外成熟12 h)和成熟期(MⅡ期)(体外成熟48 h)猪卵母细胞的冷冻保存效果。结果表明:GV期猪卵母细胞的冷冻保存效果要优于MⅡ期和未经体外培养的猪卵母细胞;不同的冷冻保护剂相比,5%PVP+梯度乙二醇的冷冻保存效果最好。     

哺乳动物卵母细胞低温存活的影响因素

哺乳动物卵母细胞的有效冷冻保存,会大大提高众多繁殖技术的实用性。那些最初用于哺乳动物卵裂期胚胎的平衡和非平衡冷冻保存方法,已经用于卵母细胞,但受精率和发育率显著低于没有冷冻的卵母细胞。在家畜上还未曾有过从冷冻卵母细胞发育到幼畜的研究报导。细胞骨架元素、减数分裂纺锤体和其它卵皮质组分,对遇冷和防冻剂的敏感性,不利于卵母细胞冷冻保存。降温过程中其它物理因素也会影响卵母细胞的存活。那些影响卵母细胞渗透反应和冷冻生物学反应的生物物理参数的估计将日益重要,有助于创造新的冷冻方法。     

小鼠精子冷冻降温时对精子的影响

无论是长期保存精子 (冷冻保存 )还是短期保存精子 (冷藏保存 )都是家畜繁殖的常用技术之一。目前精子冷冻保存技术已经建立 ,虽然这项技术在其他家畜繁殖上还未能商业化。但精液冷冻已经成为牛育种产业的一个组成部分。对精子冷冻技术相比 ,精子的短期保存技术发展则较慢。最近有研究证明 ,猴子附睾内精子 5℃保存 2 4ｈ ,仍能保持其受精能力。还有一些研究发现 ,将小鼠精子冷却至 4℃或 4℃保存 5天或 7ｄ后精子仍具有受精能力。甚至精子在 4℃保存 2 0ｄ后经精子直接注射仍然能生出后代。小鼠死亡后 2 2～2 4℃保存精子仍然能使卵母细胞…     

绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存实验

采用玻璃化冷冻保存方法，对375个成熟的绵羊卵母细胞进行冷冻，解冻后进行体外受精。结果为：形态完好率94.4％，卵裂114个，36个受精卵达到早期桑葚胚的阶段。实验的目的在于尝试绵羊卵母细胞玻璃化冷冻保存的可能性，相信绵羊卵母细胞冷冻保存问题最终会得到解决。