细胞外环境中分化抑制物对动物胚胎干细胞克隆率的影响

介绍了饲养层、条件培养基、分化抑制因子对哺乳动物胚胎干细胞分离与克隆的影响，并探讨了白血病抑制因子影响胚胎干细胞克隆的机理。     

细胞外环境中分化抑制物对动物胚胎干细胞克隆率的影响

介绍了饲养层、条件培养基、分化抑制因子对哺乳动物胚胎干细胞分离与克隆的影响，并探讨了白血病抑制因子影响胚胎干细胞克隆的机理。     

昆明小白鼠胚胎干细胞分离培养的影响因素

为了研究影响胚胎干细胞(ESC)体外分离克隆的因素,试验采用3~5日龄大鼠心肌细胞制成心肌细胞条件培养基(RH-CM),比较了4种培养体系对小鼠胚胎干细胞体外培养的影响,并分析比较了不同饲养层对胚胎干细胞分离克隆造成的影响。结果表明:添加重组鼠白血病抑制因子和心肌细胞条件培养基在胚胎贴壁率、内细胞团(ICM)形成率和原代胚胎干细胞集落形成率以及抑制分化的过程中起到的作用显著优于未添加任何诱导成分的培养基;作为饲养层,小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)分离培养胚胎干细胞的效果优于小鼠睾丸支持细胞(MS)。     

小鼠胚胎干细胞培养相关影响因素的研究

本实验主要探讨饲养层、白血病抑制因子(LIF)、水、血清对小鼠胚胎干细胞培养的影响。结果表明:饲养层细胞在小鼠胚胎干细胞的分化抑制过程中有一定作用,而起主导作用的是外源白血病抑制因子;;经亚沸处理的MilliQ水,能显著提高小鼠胚胎干细胞保持未分化状态的能力;;血清的品质对小鼠胚胎干细胞的培养效果影响显著(p<0.05)。     

鸡胚胎干细胞及其应用研究进展

鸡胚胎干细胞是一种多能性干细胞,从X期胚盘分离胚盘细胞或早期鸡胚的生殖嵴分离原始生殖细胞,经体外长期抑制分化培养可得到鸡胚胎干细胞。为维持细胞在培养过程中的未分化状态,需要采用饲养层细胞培养,同时设计合理的培养液配方并添加多种抑制分化或促进增殖的细胞因子。通过碱性磷酸酶活性检测、胚胎表面特异性抗原检测、分化试验及嵌合体试验等方法,可对鸡胚胎干细胞进行准确鉴定。文章主要就鸡胚胎干细胞的分离、培养与鉴定方法的研究进展及其应用前景进行简要综述,为进一步发展更高效的鸡胚胎干细胞培养体系并应用于生产实践提供一定的借鉴。     

饲养层细胞对胚胎干细胞的影响及其分离培养的影响因素

胚胎干细胞及其相关研究是生命科学领域中最有活力、最有影响力、最有应用前景的研究方向之一，它与遗传工程，转基因技术等相结合具有重大的理论意义与实践价值。饲养层细胞在胚胎干细胞分离培养的过程中起着异常重要的作用。作者结合实践经验就饲养层细胞对胚胎干细胞的影响进行了概述，介绍了饲养层细胞的分类，并分析了饲养层细胞分离培养的影响因素。     

类ES细胞自然分化为跳动的类心肌细胞的观察

胚胎干细胞简称ES细胞，是一种存在于尚未着床的早期胚胎中来分化的原始细胞，从早期胚胎中培养胚胎干细胞，首先必须分离培养出胚胎的内细胞团（即ICM团)。自1981年Evans、Kaufman及Martin等成功地培养出小鼠ES细胞以来．以胎鼠成纤维细胞(MEF)制作饲养层，培养早期胚胎．分离ICM团，进而在抑制分化的条件下，不断地进行     

类ES细胞持续培养的上清液对小鼠囊胚ICM团形成的影响

胚胎干细胞是一种存在于动物早期胚胎中、具有分化全能性的细胞。维持这种细胞的分化全能性与不断扩增的前提条件是：培养环境中必须存在抑制其分化、促进其生长的因子。因此，寻找胚胎干细胞促生长与抑分化因子，是胚胎干细胞研究的重要内容之一。1988年Williams等人发现了能诱导髓样白血病细胞向正常分化的LIF，也能抑制胚胎干     

不同因素对山羊原始生殖嵴细胞体外分离培养与克隆的影响

从本地槐山羊胎儿中,将原始生殖细胞与其生殖嵴周围组织细胞共同分离,经传代培养后获得了具有干细胞特征的山羊胚胎生殖(EG)细胞。结果表明:高糖DMEM培养基和低糖DMEM培养基相比较,低糖DMEM更适宜于山羊EG细胞的分离与克隆;EG细胞在山羊胎儿成纤维细胞饲养层上生长效果较好,可传4代或5代,而在小鼠成纤维细胞饲养层上EG细胞仅传3代;联合添加白血病抑制因子(LIF)、干细胞因子(SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)能显著提高山羊EG细胞分离与克隆的效率;胎龄为30～45d的胎儿原代培养时可获得大量的细胞集落,克隆培养可传至5代,适合做山羊EG细胞的分离培养。     

人胚胎原始生殖细胞的原代培养

从5－9周人胚胎生殖嵴中消化分离原生殖细胞（PGC），将其置于经过丝裂霉素C处理过的单层小鼠胚胎成纤维细胞（PMEF）饲养层上培养。结果，经过培养形成的克隆以及克隆的生长方式基本符合小鼠胚胎干细胞（ES）的特性，表现为细胞核大，细胞排列紧密，界限不清，集落边缘可见分化的成纤维细胞等；将其接种于裸鼠皮下，经过29d生长，得到具有3个胚层组织结构的畸胎瘤。     

小鼠ES细胞条件培养基对绵羊类胚胎干细胞克隆、传代的影响

本研究以无血清培养基为基础培养液,旨在探求小鼠ES细胞条件培养液(ESCCM)和2种不同饲养层对绵羊类ES细胞分离、克隆效率的影响.绵羊内细胞团从胚胎中分离得到后,分别以小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)和绵羊胎儿成纤维细胞(SEF)为饲养层进行培养.结果在MEF饲养层上,绵羊类ES细胞在ESCCM新培养系统中可稳定传至第10代,而使用基础培养液最多传至5代.而在SEF饲养层上,绵羊类ES细胞在ESCCM新培养系统中仅能传至3代.表明使用ESCCM和MEF能促进绵羊类ES细胞的分离和克隆.对类ES细胞进行核型分析、AKP染色及体外分化能力检测,证实所分离的类ES细胞符合ES细胞的主要特征,而且发现这些类ES细胞可以表达胚胎干细胞关键转录因子Nanog.结果表明,ESCCM可显著提高绵羊类ES细胞的分离克隆效率,原因可能是小鼠ES细胞在生长过程中可能分泌某些重要的细胞因子,从而达到促进绵羊ES细胞增殖的作用.且MEF比SEF更适合于绵羊类ES细胞的分离和传代.     

不同体外培养条件对家兔早期囊胚贴壁行为的影响

采集家兔自然交配后96h的早期囊胚，以低糖DMEM＋150mL／L胎牛血清＋0．1mmol／L非必需氨基酸＋100IU／mL青霉素＋100IU／mL链霉素为基础培养基，比较了不同胚胎处理方法、不同饲养层以及培养液中添加不同成分对兔早期囊胚贴壁和增殖的影响，以完善兔胚胎干细胞的建系方法。结果表明，以胚胎分割法和链霉蛋白酶-E（proteinaseE）处理掉黏蛋白及部分透明带的胚胎容易贴壁和增殖；在小鼠成纤维细胞饲养层和兔胎儿成纤维细胞饲养层上，胚胎的脱带率差别不大，但在小鼠成纤维细胞饲养层上贴壁率明显提高，且贴壁后内细胞团增殖较快；添加胰岛素、白血病抑制因子和伊巯基乙醇均利于抑制ES的分化和促进内细胞团的增殖。     

胚胎干细胞分离和克隆影响因素的研究进展

胚胎干细胞ES是从早期胚胎或原始生殖细胞中分离出来的能够在体外进行传代培养,而不分化的全能性细胞,ES细胞最主要的生物学特征是具有发育的全能性或多能性,ES细胞能在体外培养、增殖、传代、冻存和诱导分化,是研究生物发育、行为和建立人体疾病模型的理想工具,本文重点论述了影响胚胎干细胞分离和克隆的因素。并展望了胚胎干细胞的应用前景。     

哺乳动物胚胎干细胞应用研究进展

胚胎干细胞是从哺乳动物着床前胚胎的内细胞团体外分离培养而建立的克隆细胞系 ,具有在体外不分化的无限增殖能力。利用胚胎干细胞建立体外分化模型 ,并建立各种基因改变的胚胎干细胞系 ,以求发现某些基因或因子在胚胎发育早期对不同类型细胞或组织分化形成的作用。本文就胚胎干细胞的研究进展做一综述。1　胚胎干细胞的分离、培养与鉴定关于胚胎干细胞的建系 ,最早由Ｅｖａｎｓ等 ( 1 981 )报道。小鼠受精后 2 5天切除卵巢 ,使囊胚延缓着床 ,收集并体外培养这种囊胚 ,4天后滋养层细胞贴壁生长 ,挑出内细胞团 ,胰蛋白酶处理使细胞分散 ,小…     

精原干细胞体外培养及影响因素

影响精原干细胞体外培养的主要因素有温度、饲养层细胞、细胞因子包括分化抑制因子(LIF)和生长因子(SCF和bFGF)等。本文拟对其研究进展和精原干细胞体外培养所涉及到的精原干细胞的鉴定和分离纯化技术的研究进展进行综述。     

某些因素对牛和小鼠类胚胎干细胞分离与培养的影响

以荷斯坦牛胚胎和小鼠胚胎为材料 ,研究了犊牛血清、饲养层、培养液、添加物和消化液对牛胚胎干细胞和小鼠胚胎干细胞克隆效率的影响。结果表明 ,在 2 4h内使小鼠胚胎贴壁率达 86 %以上的犊牛血清可用于小鼠和牛胚胎干细胞的分离 ;在 ES细胞分离与克隆中 ,以 15 %～ 2 0 %犊牛血清为宜 ,在 DMEM(L)培养基中添加 0 .1μmol/LNa2 Se O3 0 .1mmol/Lβ-巯基乙醇 10 μg/L IGF 10 0 0 IU/m L L IF,能显著提高牛 ES细胞分离与克隆效率 ;在TCM199、DMEM(高糖 )和 DMEM(低糖 ) 3种培养基中 ,低糖 DMEM更适宜于牛 ES细胞的分离 ;优秀胚胎形成的团状 ICM更适宜于分离与克隆 ES细胞 ,在 37℃用低浓度消化液处理 ICM或 ES细胞集落 ,再以机械将其离散为细胞小块 ,ES细胞克隆效率最高。     

昆明小鼠胚胎干细胞培养体系的优化

为了更高效地分离昆明小鼠胚胎干细胞,本研究从饲养层、胚胎发育阶段和培养液方面进行优化。将3代以内的小鼠胎儿成纤维细胞(MEF)用丝裂霉素C处理后,分别按1×104、1×105、1×106·mL-1密度接种,以H-DMEM+15%KSR+LIF为培养液,观察不同密度饲养层对昆明小鼠胚胎干细胞(ES细胞)生长的影响,并研究胚胎发育阶段和培养液中分别添加干细胞生长因子(SCF)、SCF+胰岛素对昆明小鼠ES细胞分离克隆的影响。结果显示,胚胎在密度为1×105·mL-1的饲养层上,F1代和F2代ES细胞克隆形成率均显著高于其他2组(P<0.05)。囊胚的F2代ES细胞克隆形成率显著高于桑椹胚(P<0.05),培养液中添加SCF显著提高昆明小鼠胚胎贴壁率(P<0.05),同时添加SCF和胰岛素得到昆明小鼠最高胚胎贴壁率及F1、F2代ES细胞克隆形成率。所分离的ES细胞显示AKP染色强阳性,Oct-4、SSEA-1的免疫荧光检测阳性,具有ES细胞的特点。由此认为,发育至囊胚的胚胎在MEF密度为1×105·mL-1上,培养液中同时添加SCF和胰岛素更适合昆明小鼠ES细胞的分离培养。     

动物胚胎干细胞的研究概况

胚胎干细胞（ES细胞）是从早期胚胎内细胞团（ICM）或原始生殖细胞（PGCs）经体外分化抑制培养分离克隆的,ES细胞在动物克隆、转基因动物生产、细胞工程、组织工程、临床克隆治疗和发育生物学等的研究应用中起着重要的作用.为此,介绍胚胎干细胞的生物学特性,国内外研究进展和研究动态,阐明建立ES细胞系的技术要点以及ES细胞的应用及发展前景.     

猪胚胎干细胞的分离克隆

本文从分化抑制物、培养基的选择，内细胞团的分离，胚胎干细胞的分离及鉴定方法等方面系统地综述了猪胚胎干细胞分离克隆的研究进展；并对其未来的应用前景进行展望。     

鸡胚胎干细胞的离体培养与鉴定

为探讨鸡胚胎干细胞的培养条件及鉴定方法,本试验以鸡胚成纤维细胞为饲养层,以高糖DMEM为基础培养基并添加SCF、bFGF、mLIF等抑制分化的细胞因子,离体培养鸡x期胚盘细胞。结果显示,该培养体系可以获得典型的呈集落状生长的细胞克隆,传至第4代仍可检测到胚胎干细胞的特定表面抗原SSEA-1;细胞克隆经悬滴——悬浮培养可形成拟胚体,并检测到中、内、外3个胚层的特异性基因CH-T、TTR、和β-activin的表达。结果表明,本试验培养出具有多分化潜能的鸡胚胎干细胞。