三种豆科牧草愈伤组织继代培养中抗褐化的研究

为解决3 种豆科牧草愈伤组织继代培养中的褐化问题,以‘新牧4 号’紫花苜蓿、普通红豆草和‘海法’三叶草愈伤组织为材料,探讨不同防褐化措施在3 种豆科牧草愈伤继代培养过程中抗褐化效果的影响。结果表明,在苜蓿和红豆草愈伤组织的继代培养中,对愈伤组织褐化抑制效果较好的是AgNO3,浓度为0.02 g/L 时,褐化率分别为13%、15%,愈伤组织褐化程度强弱依次是PVP＞柠檬酸＞AgNO3;在三叶草愈伤组织的继代培养中,对愈伤组织褐化抑制效果较好的是AgNO3,浓度为0.015 g/L时,褐化率为32%,愈伤组织褐化程度强弱依次是柠檬酸＞PVP＞AgNO3。一定浓度的AgNO3不仅能有效控制褐化,还在一定程度上促进了愈伤组织的生长。     

刺梨叶片愈伤组织诱导及抗褐化研究

为进一步优化刺梨叶片愈伤组织诱导条件,本试验以‘贵农1号’、‘贵农2号’、‘贵农5号’、‘贵农7号’4个不同基因型刺梨叶片为试材,采用组织培养法研究预处理、取样时间、植物生长调节剂、抗褐化剂对叶片愈伤组织诱导及降低褐化率的影响。结果表明：100 mg/LVc浸泡12 h后,可显著提高4个基因型叶片愈伤组织诱导率,降低其褐化率,其中‘贵农1号’诱导率最高为97.44 %;春季是不同基因型叶片最佳取材时间,3月份叶片愈伤组织诱导率均达到最高值且褐化率最低;适合‘贵农1号’和‘贵农2号’叶片愈伤组织诱导的植物生长调节剂组合为1.0 mg/L6-BA+0.5 mg/LNAA,而‘贵农5号’和‘贵农7号’叶片愈伤组织诱导最适宜的植物生长调节剂组合为1.0 mg/L6-BA+1.0 mg/LNAA+1.0 mg/LTDZ;3种抗褐化剂对4种基因型刺梨叶片愈伤组织增殖培养的效果大小为AgNO₃>柠檬酸>PVP;添加柠檬酸或AgNO₃可明显降低刺梨叶片愈伤组织褐化率,其中以2.0 g/L柠檬酸或0.4 g/LAgNO₃最为适宜,4个基因型叶片愈伤组织褐化率均达到最低值。该试验获得了4种基因型愈伤组织诱导的最适宜生长调节剂组合,降低了褐化率,为后续离体再生体系的建立奠定了基础。     

银杏褐化与非褐化愈伤组织的转录组分析

本研究利用环境扫描电子显微镜和高通量测序技术对银杏褐化和非褐化愈伤组织进行细胞结构观察与转录组测序,以探索愈伤组织的褐化机理。扫描电镜观察显示非褐变的愈伤组织细胞排列均匀,褐变愈伤组织的细胞表现出紊乱,排列松散无序。对褐化和非褐化愈伤组织共计6个样品进行了转录组测序,共获得45.66 Gb Clean Reads,各样品Clean Reads均达到6.41 Gb以上。对褐化与非褐化愈伤组织的基因进行差异分析,结果发现分别有275和153个基因上调和下调表达。转录因子分析发现相较于非褐化愈伤组织,褐化愈伤组织中MYB、AP2和NAC等转录因子表达量上调,HD-ZIP下调。KEGG功能富集分析结果表明差异表达基因显著富集在苯丙烷代谢途径,PAL和CCR基因上调表达增加了酚酸的合成与代谢,推测苯丙烷生物代谢途径部分基因表达量上调导致酚酸类化合物的积累,可能是银杏愈伤组织褐化的主要原因。本研究通过扫描电镜观察和转录组测序,为解析银杏愈伤组织褐化的分子机制提供理论依据。     

茶树愈伤组织继代培养与体细胞胚发生

利用添加不同种类,浓度的１／２ＭＳ修改培养基、Ｂ５培养基交叉培养茶树（ＣａｍｅｌｌｉａｓｉｎｅｎｓｉｓＬ．）愈伤组织,有利于延长愈伤组织继代培养时间,并维持胚性愈伤组织高的体细胞胚分化能力,不同品种的胚性愈伤组织体细胞胚分化率存在明显差异,试管苗茎胚性愈伤组织分化率高于大田栽培的成龄茶树叶柄胚性愈伤组织。胚性愈伤组织随着继代培养时间的延长,体细胞胚分化率随之有所下降,胚性愈伤组织在继代培养过程中,     

油菜花序轴愈伤组织继代培养器官分化的初步研究

近年来,植物器官的分化已成为植物生理学上的一个重要研究课题。油菜组织培养方面的研究已有不少报道,据我们初步研究,油菜花序轴培养在附加适当浓度生长素和细胞分裂素组配的培养基上,可以在较短的时间内获得大量的愈伤组织,并能一次诱导成芽(苗)。培养三个多月以后,对于已经分化出根、芽和未产生根、芽,甚至部分老化的愈伤组织,只要组织仍然鲜嫩或部分鲜嫩,经重新切割,转移到新的适宜的培养基中继代培养,能够继续增殖,明     

降低玉米成熟胚愈伤组织褐化的初步研究

本研究以k12、137等2个骨干自交系的成熟胚为外植体,以N6培养基为基本培养基,研究培养基中附加甘露醇、Vc、活性炭并辅以生长调节物质6-BA、2,4-D对玉米成熟胚愈伤组织褐化的影响。结果表明:培养基中附加甘露醇、Vc、活性炭对愈伤组织的褐化影响不同,其抗褐化能力为:甘露醇(20g/L)Vc(2mg/L)活性炭(2g/L)空白。辅助添加6-BA、2,4-D时防治褐化作用更加明显,且添加的浓度不同,防治效果也不同,其中N6培养基+20g/L甘露醇+0.2mg/L6-BA+4mg/L2,4-D效果最佳。另外,暗培养能显著减轻褐化的发生,有利于愈伤组织的形成。     

陆地棉品种在体细胞培养中愈伤组织褐化的生化基础研究

对陆地棉品种713、百棉1号、百棉3号的115d正常愈伤组织与褐化愈伤组织的可溶性蛋白、SOD酶、CAT酶、IAA氧化酶、PPO酶及棉酚的测定结果表明,愈伤组织褐化与PPO的活性和棉酚的含量有关,褐化导致了SOD酶、IAA氧化酶和CAT酶活性的降低及蛋白合成的减少。     

冬樱花愈伤组织诱导和抑制褐化初探

以冬樱花叶片、花托、花梗、子房和苞片为外植体,在附加不同浓度的生长素NAA和细胞分裂素6-BA组合的MS培养基上进行愈伤组织诱导并探讨愈伤组织褐化的抑制,实验结果表明：在供试的培养基中,叶片的愈伤组织诱导率最高,花器官愈伤组织诱导时,花梗诱导率最高,其次为花托、子房,而苞片诱导率为0。缩短外植体消毒时间、遮光及加入活性炭,可有效降低愈伤组织的褐化。     

降低棉花胚性愈伤褐化研究

在棉花组织培养中,诱导出的胚性愈伤组织转到继代培养基上时,经常出现褐化现象,需要经过3~4次继代培养才能诱导出正常绿色胚状体。实验通过激素和氮源对诱导绿色胚状体的效应研究,认为氮源配比不合适是褐化现象的主要诱因,与KT、6-BA、IAA等激素关系不明显;经过对MS培养基的改良,一次继代就可以获得绿色胚状体,从而缩短了组织培养周期近2个月。     

继代培养中水稻愈伤组织核酸,蛋白质以及酶的动态变化

水稻愈伤组织在继代培养过程中产生分化能力不同的无性系,在分化培养基上的分析结果表明,具有分化能力的无性系DNA、RNA、蛋白质含量明显高于丧失分化能力的无性系;DNase、RNase活性也有差异,但不明显;RNA、碱基组分中嘧啶/嘌呤值存在明显差异.这些生化代谢上的差异在组织分化盛期表现最显著.有分化能力的无性系在分化过程中,产生与组织分化有关的蛋白质谱带和过氧化物酶同工酶带,淀粉酶同工酶带与组织分化关系不明显.     

白檀种子胚愈伤组织诱导过程中褐化影响因子研究

为探究白檀种子贮藏及愈伤组织诱导过程中种子胚组织褐化的影响因子,以白檀种子为材料,测定其贮藏过程中的生理变化,并研究不同处理对白檀种胚组织培养褐化率、转化率及污染率的影响。结果表明,白檀种子采收后,4℃贮藏14 d多酚氧化酶(PPO)活性与丙二醛(MDA)含量均最低,此时进行组织培养种胚褐化率低。白檀种子组织培养在高pH(6.3)和低pH(4.8)下的褐化率高,在pH值5.8时褐化率最低。组织培养接种时去除胚乳,培养基pH值5.3,使用M_蔗糖∶M_葡萄糖=1∶1混合,碳源浓度为30 g/L,NAA浓度为0.10 mg/L,能获得大量生长状况良好、分化能力较强的愈伤组织。     

小麦愈伤组织原生质体培养高频率细胞分裂及愈伤组织形成

从小麦ＣＫ８９、１０２、１１３的花药和花冬的幼穗诱导愈伤组织的继代培养中，选择致密颗粒型愈伤组织，转入附加２，４－Ｄ２－４ｍｇ／Ｌ改良ＭＳ固体培养基上进行继代培养，６－１０周后形成生长迅速的胚性愈伤组织，这种愈伤组织分离原生质体得率为１－３．７×１０＾７个／ｇ．原生质体于ＰＣＭ２培养基上琼脂糖包埋培养，３－５天出现第一次细胞分裂，７－１４天进行第二，第三次细胞分裂，两周后形成大量细胞团，细胞分裂频     

响应面法优化紫丁香愈伤组织诱导条件及防褐化研究

以紫丁香的根、茎、叶和花为材料,在改良的MS+6-BA 0.5 mg·L-1+2,4-D 0.2 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1培养基诱导其愈伤组织,观察愈伤组织的生长情况,筛选出最佳外植体;根据紫丁香愈伤组织诱导的情况,采用响应面的方法对6-BA、2,4-D和NAA在MS培养基中的配比进行优化;研究聚乙烯...     

豆科牧草与禾本科牧草抗盐碱种植模式研究

研究不同牧草品种在盐碱地上的适应性及种植模式对盐碱地作物的影响。结果表明:高丹草具有较强的耐盐碱性,在重度盐碱地上仍能获得较高产量,其鲜草产量和干草产量分别是单作苜蓿的3.70和4.90倍,是单作燕麦的4.27和7.80倍。粗蛋白产量是苜蓿与燕麦混作处理的4.5倍。不同种植模式中,燕麦和苜蓿混作时的脱盐效果最佳,水溶性盐总量较对照低6.13g/kg,且混作时作物鲜干比最大,适口性好,而且混作提高了鲜干草及蛋白质产量。单作模式中,燕麦脱盐效果最好,在盐碱地上有较强的适应性。     

甜玉米胚愈伤组织的诱导、继代、植株再生的研究

本研究以不同类型的甜玉米为实验材料，用D和AG培养基进行培养，以诱导幼胚和成熟胚的愈伤组织。结果发现，不同类型的甜玉米均可诱导出愈伤组织，其中以齐31/张1、（CA11/抗病774）F2诱导率较高，诱导率的高低主要取决于遗传基础、培养基种类。细胞质因子在某些组合中也会影响诱导率。不同甜玉米的诱导率高低顺序依次是su(普     

大蕉幼雄花易碎胚性愈伤组织长期继代培养及其植株再生

大蕉未成熟雄花接种到胚性愈伤组织诱导培养基中,4～5个月后可诱导出胚性愈伤组织,并可在继代培养基上长期增殖。这些继代培养了6年多的松软易碎的胚性愈伤组织转移到含有0.2 mg/L 6-BA的分化培养基中,可诱导出芽,得到了53株再生植株,这些再生植株可进一步扩大繁殖。组织学切片证明长期继代培养的愈伤组织维持了胚性的状态。     

玉米胚性愈伤组织继代及侵染条件的优化

设计了含有不同2,4-D浓度的6种培养基用于玉米胚性愈伤组织的继代培养,对影响转化效率的侵染条件进行了研究,根据转化后所得的抗性愈伤组织数目及其分化率的评估结果表明,选用N6为基本培养基,添加1mg/L 2,4-D时,胚性愈伤组织继代长势较好,且在真空渗透的情况下,侵染5min,抗性愈伤组织数最多。经初步的PCR鉴定,利用优化的玉米遗传转化体系得到了转基因玉米植株。     

短柱铁线莲愈伤组织培养及褐化抑制

本研究在正交设计的基础上,以短柱铁线莲的叶片、叶柄、茎段为外植体,进行愈伤组织培养,并探讨愈伤组织褐化的抑制。研究结果表明:短柱铁线莲诱导愈伤组织的适宜外植体为茎段,诱导率为89.8%;合适的愈伤诱导培养基为1/2MS+0.4 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA+10 g/L蔗糖,诱导率为90%;合适的增殖培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+0.2 g/L肌醇+0.2 g/L水解络蛋白(CH)+5 mg/L Vc+0.3 mg/L TDZ+0.2 mg/L NAA,增殖率为302.3%。适宜不定芽诱导培养基为1/2MS+30 g/L蔗糖+0.76%琼脂+0.2 g/L肌醇+0.2 g/L水解络蛋白(CH)+0.3 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA,诱导率达63.3%。培养基中添加5 mg/L Vc或1 g/L活性炭时,可以能够很好地抑制短柱铁线莲褐化。     

苹果原生质体培养再生愈伤组织

以苹果试管苗叶片为原生质体分离材料,对影响原生质体分离和培养的因素进行了研究。结果表明适合叶片酶解的酶液组成是Cellulase-Onzuka R-10 0.8% + Pectinase 0.5% + PVP 1% + 甘露醇 0.65 mol/L + MES0.1%;以改良MT + BA 1.0 mg/L + 2,4-D 0.2 mg/L + 甘露醇0.65 mol/L + Vc 5.0 mg/L + Glu 500 mg/L + CH 100 mg/L + ME 500 mg/L + Arg 50 mg/L为培养基对原生质体进行培养,固液双层培养效果较好,最适培养密度为1×105 (个/ml),培养1-2 d原生质体变形,3-4 d第一次分裂,2 w分裂3-5次。平邑甜茶原生质体一个月后形成微细胞团,两个半月形成肉眼可见的微愈伤组织。鲁加5号和M7均只形成7-10个细胞的细胞团,嘎拉未见细胞分裂。     

水稻愈伤组织继代培养中游离氨基酸库的变化与再分化的相关

以4个水稻品种的成熟胚诱导的愈伤组织为材料，研究了继代培养中胚性与非胚性愈伤组织的游离氨基酸库的变化和愈伤组织再分化的关系，结果表明，天冬酰胺含量随愈伤组织继代培养时间的延长而成倍增加，而酷氨酸、鸟氨酸和氨含量则显著减少，品种之间表现一致，与愈伤组织分化率的相关系数达显著或极显著水平，胚性愈伤组织经