球孢白僵菌自然流行病与马尾松毛虫种群的相互关系

2006年4月下旬发现皖东明光县紫阳林场马尾松毛虫种群中暴发球孢白僵菌自然流行病。根据踏查确定了流行中心区,其僵虫密度远高于周围未流行区域;但中心区僵虫密度不同,最低不到1头／m^2,最高达39头／m^2,形成许多小型流行中心。据此断定,高密度的越冬马尾松毛虫种群呈聚集分布,有利于发病和流行中心的形成。根据僵虫虫龄结构,4～5龄幼虫占僵虫总数93．4％,3龄居中,6龄最少;根据僵虫分布部位,69．8％幼虫死于林冠下,30．2％死于树皮裂缝。由此推断,流行病始于越冬期,而流行高峰始于4月中旬之前。流行区松毛虫的体长和对照区无显著差异,但雌雄比远高于对照区,而产卵量则显著低于对照区。     

球孢白僵菌所致马尾松毛虫种群自然流行病的时空动态

对皖东明光县紫阳林场马尾松毛虫种群暴发的球孢白僵菌自然流行病流行区和非流行区僵虫数量的调查表明,2006年流行区的僵虫密度一周年后由32.6头/m^2急剧下降为0.8头/ m^2;而4个对照区（非流行区）中有3个区僵虫密度显著性上升,上升幅度36.8%～178.1%。2006年5月,流行区空气中和土壤中的球孢白僵菌带菌量在1个月内由6.1cfu/皿迅速降到2.3efu/皿,而非流行区空气中和土壤中的带茵量则在低水平上保持相对稳定;翌年5月非流行区空气中和土壤中的带菌量均保持相对稳定,且都远高于流行区。这表明流行区松毛虫发病程度有所减弱和发病率有所下降,从流行病变为地方病;而非流行区发病程度有所增强,发病率有所下降;原流行区迅速转为非流行区,而部分非流行区则逐渐转为流行区。这种动态变化典型地反映了昆虫自然流行病的动态特征。     

球孢白僵菌不同剂型对马尾松毛虫控制效果的灰色评判

林间使用球孢白僵菌不同剂型防治马尾松毛虫的越冬代幼虫,放菌后分别调查２０天后虫口、第一代羽化率、僵蛹率、天敌寄生率及虫口密度。经灰关联分析,综合评判控制效果,结果表明混合粉剂、油剂及高孢粉处理区与不处理的对照区的灰关联度分别为０．７９９５、０．４８９８、０．２７９４及０．２００４,不同剂型处理均比对照效果好;白僵菌孢子加工成相应的剂型,比未加工成制剂的高孢粉处理效果好;混合粉剂比油剂处理效果好。不同剂型处理对天敌昆虫寄生率没有显著影响。     

几丁质酶基因在球孢白僵菌中的超表达提高其对马尾松毛虫的毒力

几丁质酶在虫生真菌穿透寄主体壁的过程中起一定作用,但其与真菌毒力的关系尚不清楚。本研究通过几丁质酶基因在球孢白僵菌Beauveria bassiana中的超表达以及超表达菌株的毒力变化研究了该基因与毒力的关系。将几丁质酶基因Bbchit1通过芽生孢子转入野生型球孢白僵菌中,获得多拷贝的转化子;转化菌株在胶体几丁质诱导培养基中酶活最大值高于出发株4.2倍,表明该几丁质酶基因在转化菌株中得到超表达。毒力测定发现转化子对马尾松毛虫Dendrolimus punctatus的致死中浓度比出发株降低84.5%,在2.5×107孢子/ml浓度下的致死中量减少84.5%,致死中时缩短0.7d,因此毒力大大提高。第2~9d感病死虫数与转化子第1~8d酶活呈极显著正相关（P〈0.01）,而与出发株不相关（P〉0.05）。这些证据表明,几丁质酶与毒力的关系是复杂的,在分泌达到一定阈值后与毒力才有明显的相关关系。     

球孢白僵菌对桃蚜种群数量的影响

在田间网室中研究了球孢白僵菌对分别以4龄无翅若蚜和无翅成蚜为起始的桃蚜种群数量的影响。以无翅成蚜起始的桃蚜种群，在接菌后的第6d，对照和接菌处理之间只有成蚜数量差异显著，虽各龄期若蚜数量和桃蚜总数处理与对照之间差异不显著，但接菌处理的总数量少于对照的总数量；在接茵后的第13d，两者的种群数量水平相当。以4龄无翅若蚜起始的桃蚜种群，在接菌后的第6d，处理和对照之间的种群数量就已接近。     

黄山球孢白僵菌野生种群流行菌株的28S rDNA Ⅰ型内含子分析

通过4对引物,对采自黄山的40株球孢白僵菌菌株进行28S rDNA I型内含子分析,以探讨黄山自然种群的遗传结构及流行菌株类型。结果显示,在黄山球孢白僵菌自然种群中,存在着13种不同的内含子单倍型,显示出在黄山小范围内的球孢白僵菌种群也存在着丰富的遗传多样性。不同单倍型在种群中所占的比例不同,其中BBBA型占据主导地位,为37.5%,ABAA型和ABBA型次之,分别为15%和12.5%,而BABA等7种单倍型则各仅占2.5%,反应出不同的遗传背景的菌株具有不同的遗传稳定性与环境适应性。数据同时显示,同核体菌株在黄山球孢白僵菌自然种群中的比例为82.5%,显示出同核体在遗传稳定性上优于杂核体,但同时,17.5%的杂核体比例也显示出准性生殖在球孢白僵菌种群中的普遍性。     

玉米根际球孢白僵菌群体遗传多样性的ISSR分析

为了明确玉米根际球孢白僵菌的遗传分化情况及亲缘关系,通过ISSR-PCR分子标记技术对分离自玉米根际的球孢白僵菌的遗传多样性进行了研究。从40个引物中共筛选出11个多态性高、稳定性好的引物用于正式的扩增分析,在37个菌株中共扩增出83条谱带,其中多态性条带占69条,多态性百分率为83.13%。平均每引物扩增条带在7.5条。群体的多态位点百分率(PPL)为83.13%,Nei基因多样性指数(H)为0.316 9,Shannon信息指数(I)为0.465 7。结果表明,分离自安徽省涡阳、萧县、蒙城三个地区的球孢白僵菌具有较高的遗传多样性。研究结果对进一步探讨玉米根际球孢白僵菌不同菌株的生防效果具有重要意义。     

球孢白僵菌Beauveria bassiana B6菌株对桔小实蝇的控制作用

室内研究了球孢白僵菌Beauveria bassianaB6菌株对桔小实蝇Bactrocera dorsalis的控制作用。结果表明:采用地面撒施固体菌剂对地面桔小实蝇老熟幼虫和土壤中蛹的致死作用较弱,但对成虫致死作用明显,在0.5×108~2.0×108孢子/g内,成虫死亡率可达82.89%~94.04%。在蛹期、幼虫期和蛹期施2.25×108孢子/g固体菌剂,2个处理对成虫致死效果很好,成虫死亡率高达91.29%~100%,与对照差异极显著(P<0.01)。沙土表面喷施1.0×108孢子/ml的孢子悬浮液,桔小实蝇总死亡率为75.18%,防效为71.93%;养虫笼内壁喷施1×107~1×108孢子/ml孢子悬浮液,成虫死亡率为81.00%~100%,防效为78.94%~97.94%。因此可以明确该白僵菌固体菌剂对桔小实蝇成虫有一定防效,有望成为桔小实蝇防控的一项有效措施。     

球孢白僵菌菌株耐热力与贮藏稳定性的关系

球孢白僵菌不同菌株孢子在２５℃恒温贮藏条件下,孢子活率表现为不同程度的梯度下降。孢子贮藏的半衰期与对应菌株在５５℃下水浴１ 小时的耐热力呈显著正相关（ｒ＝ ０．９０３５;ｒ０．０１＝ ０．８７４５）,这说明通过菌株耐热力的测定,可以间接反映孢子的贮藏稳定性。加有适宜载体的白僵菌孢子在５５℃下水浴３小时的存活率显著高于不进行处理的对照     

转基因球孢白僵菌发酵产物对野生菌株的增效作用

研究发现,超量表达类枯草杆菌蛋白酶基因CDEP-1的球孢白僵菌菌株Bb0062-15-4-CDEP-1的发酵产物对野生菌株具有明显的杀桃蚜增效作用。进一步分析增效作用与目的基因表达产物关系的结果显示,加入CDEP-1酶活为44.3±0.6U/μL的发酵产物,可使野生菌株对桃蚜的致死中浓度降低4倍以上,共毒系数(CTC)达404.6。但发酵产物经121℃处理20min,增效作用完全丧失。用饱和硫酸铵沉淀蛋白质分别将透析后的重溶蛋白质和上清液用于增效作用测定,结果证明增效成分主要是蛋白类物质。将梯度稀释的发酵产物与浓度为1×107孢子/mL的野生菌株孢子悬浮液混合进行生物测定,发现各处理的致死中时与CDEP-1的活性呈负相关,相关系数为-0.8946。由此推断,发酵产物中的增效物质主要是目的基因表达产物CDEP-1。     

白僵菌对山西林区油松毛虫的致病效果

从油松毛虫越冬幼虫的病死僵虫分离、筛选得到适应北方生态环境的致病菌株;通过人工培养得到纯化的白僵菌菌株。测定了该菌株在不同温、湿度下的萌发率,以及不同温度下在PDA培养基上的生长速率及产孢率。结果表明,最适温度为25℃,RH80%±5%时其萌发率为91.6%;RH95%时可达98.7%;RH35%时仍有10.7%的萌发率。在25±1℃、RH75%±5%条件下用1.0×1065、.0×106、1.0×1075、.0×107、1.0×108个/ml的孢子悬液感染3~4龄油松毛幼虫,10d的死亡率达67.49%~95.13%。在温湿度相对较低的林间自然条件下,对油松毛虫幼虫侵染23d的校正死亡率可达50.0%~78.4%。在冬季11月份和春季3月份通过撒施白僵菌湿粉剂(4.5×109个/g)防治树根下越冬的油松毛虫幼虫,死亡率可达50%~78%。     

球孢白僵菌松毛虫分离株对家蚕的致病力

长期以来对于释放球孢白僵菌防治松毛虫是否会导致或加重家蚕白僵病一直存在较大争议,并同时影响真菌杀虫剂的应用。为科学评价球孢白僵菌松毛虫分离株对家蚕的致病风险,并保证研究结果的代表性和准确性,本研究共使用南方8省（区）的64株松毛虫分离株和4省（区）的12株家蚕分离株对3龄家蚕进行了3次致病性试验。结果表明,除其中1株松毛虫分离株外,不管是松毛虫分离株还是家蚕分离株,对家蚕都有一定致病性,但差异较大。在3×107孢子/mL 的浓度下,30株松毛虫分离株的平均侵染率10.2%极显著低于8株家蚕分离株的89.6%;在1.5×108孢子/mL的浓度下,34株松毛虫分离株对家蚕的平均侵染率36.4%极显著低于6株家蚕分离株的90.6%;松毛虫分离株在1.5×108孢子/mL浓度下的侵染率极显著高于3×107孢子/mL下的侵染率,而家蚕分离株在两种浓度下无显著性差异。在1.5×108孢子/mL的浓度下4株对家蚕致病力较强的松毛虫分离株的LT50为7.45～8.20 d,平均7.83 d,比6株家蚕分离株LT50（3.43～3.72 d）的平均数3.62 d多4.21 d。根据毒力较强的家蚕分离株B1和B5与毒力最弱和最强的松毛虫分离株D26和D22的致死浓度的比较,家蚕分离株对家蚕的毒力是松毛虫分离株的132～15733倍;根据他们的致死剂量的比较,家蚕分离株的毒力是松毛虫分离株的43～2201倍。这一对比数据充分表明,尽管不同的松毛虫分离株对家蚕的毒力不同,但所有的松毛虫分离株都具有明显的寄主专化性。综合分析表明,我国南方使用白僵菌杀虫剂防治松毛虫在家蚕中诱发流行病的风险很小。     

接种式施放白僵菌防治马尾松毛虫技术方案的灰色决策

以生物多样性指数、马尾松毛虫虫口密度和成本投入作为指标,用灰色决策理论对不同放菌量和不同放菌频度的12种接种式放菌方案作局势决策,以确定最佳放菌方案。结果表明：放菌量为37．5g／hm^2,放菌频度为一年一次的放菌方式最佳。     

球孢白僵菌脂肪酸、酯酶、脂肪酶及其与毒力的关系

研究12株球孢白僵菌脂肪酸、酯酶和脂肪酶的产生水平及菌株对马尾松毛虫毒力间的关系。结果表明：酯酶产生水平（E）、脂肪酶产生水平（L）及豆蔻酸百分含量（X）等与白僵菌菌株对马尾松毛虫的毒力（LT50）间存在一定的相关性，其相关方程分别为：LT50=2．0931/（lgE-5．1165）＋0．4091；LT50=-6．68L^2＋31．9886L；LT50=13．5192-8．7042X。     

松毛虫CPV、B.t.林间防治第一代马尾松毛虫试验初报

用松毛虫CPV和B.t.进行喷雾防治马尾松毛虫试验，试验表阴：药后18d两种生物药剂的防治效果均在70%以上，B.t.达86．98％，CPV与B.t.的混合使用防效达85．04％。