云南天竺葵上发现番茄斑萎病毒

[目的]在云南省昆明市植物园中发现症状表现为叶片褪绿和环斑的天竺葵,怀疑其为番茄斑萎病毒属病毒侵染。[方法]将病叶汁液摩擦接种至本氏烟,显症后取样与原样一起用3种番茄斑萎病毒属病毒的抗体采用Dot-blot ELISA方法进行检测,并用RT-PCR方法对本氏烟叶片进行检测。[结果]接种本氏烟的系统叶片在7 d后表现典型的花叶、卷曲和枯斑等症状,天竺葵病叶和接种显症的本氏烟系统叶Dot-blot ELISA和本氏烟叶片RT-PCR检测结果均表明其病原为番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)。RT-PCR产物的测序结果显示其N基因与TSWV-LE分离物核苷酸相似性达99.74%。[结论]天竺葵病样为TSWV侵染所致,这是首次在中国天竺葵上发现TSWV,对该病毒的防治工作具有参考价值。     

马铃薯M病毒生物学特性研究

测定马铃薯M病毒(Potato virus M,PVM)寄主范围,并作PVM接种条件优化试验。结果表明,PVM仅侵染15种指示植物中的4种,各种植物症状表现不同。苋色黎(Chenopodium amaranticolor)和千日红(Gomphrena globosa L.)接种叶片上产生枯斑,可作为PVM枯斑寄主;36号烟(Nicotiana occidentalis"pi")系统发病,新生叶片产生皱缩、泡斑、叶边缘卷曲等症状,植株长势矮小,可作为PVM系统侵染鉴定寄主;PVM系统侵染番茄(Lycopersicon pimpinellifolium)速度快,但无症状,番茄可作为PVM繁殖寄主。PVM虽可侵染不同生育期寄主,以接种中上部叶位侵染效果最好,但在不同寄主不同叶位分布并不一致,番茄体内中部叶片病毒含量相对较高,在苋色黎上则分布较均匀。明确PVM最适培养温度为23~29℃。最高稀释度64倍时(OD405=0.201)仍可成功侵染苋色黎。为PVM纯毒源扩繁及制备该病毒抗血清提供基础数据。     

植物源病毒抑制剂WCT-II控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT- 直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体,经枯斑半叶法接种和电镜检测发现,处理后的病毒致病力明显下降,病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象,WCT- 对TMV的枯斑抑制率为86.6%;WCT- 处理烟草后,其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现,处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明,WCT- 不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用,而且能诱导植物产生病程相关蛋白,提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

大豆的烟草环斑病毒(TRSV)生物学性状的鉴定

大豆的烟草环斑病毒(TRSV),系种子带毒传病,它是引起产量严重损失的大豆病毒病害之一。我国是否发生未见报道。本研究系在美国依阿华大学采用该地分离的毒原,对大豆 TRSV 的生物学性状如毒原繁殖、病毒接种指示植物鉴定及寄主范围、病毒汁液性质的常规测定等进行了试验。所得结果为:大豆的烟草环斑病毒接种于豇豆叶上产生红褐枯斑;接种于黄瓜叶上产生淡黄环斑,系统性;接种于普通烟—白贝菜(White Burley)叶上,初形成同心纹环斑,后转为系统轻花叶症;接种于克利夫兰烟叶上也是先生同心环斑,后转为轻花叶症,在蔓陀萝叶上表现花叶症;在千日红叶上表现褪绿小枯斑等。TRSV 的寄主范围颇广;茄科、藜科、豆科、葫芦科均受侵染,但不侵染禾本科和茄科及豆科里某些品种。其失毒温度为60℃;稀释限点为10~(-6)(但在10~(-3)时侵染率已下降);体外存活11天。     

黄瓜花叶病毒外壳蛋白基因克隆及在病毒检测中的应用

根据已经发表的黄瓜花叶病毒(CMV)外壳蛋白基因的序列,人工合成引物,通过反转录和PCR扩增并克隆了黄瓜花叶病毒辣椒分离物P33(CMV-P33)的外壳蛋白基因,构建到质粒PBS的Hinc位点.重组质粒经Sma酶切后,在0.8%低熔点琼脂糖上电泳,回收克隆的CP基因片段(约0.7kb),用切口平移的方法进行α-32PdATP标记.以此为探针,通过点杂交技术检测提纯的病毒CMV-P33和R1株系、CMV-P33的RNA,及受CMV侵染的辣椒叶片汁液,结果表明:提纯的CMV-P33和R1株系的最低检出量分别为1ng和4ng,CMV-P33的RNA为0.1ng.检测受CMV侵染的辣椒叶片汁液时,最大稀释倍数为100倍.其次,用该探针检测健康辣椒和受烟草花叶病毒(TMV)、马铃薯Y病毒侵染的烟叶汁液时,检测反应均为阴性.     

植物源病毒抑制剂WCT-Ⅱ控制烟草花叶病毒(TMV)的作用机理初探

用植物源病毒抑制物WCT-Ⅱ直接处理烟草花叶病毒(TMV)病毒粒体，经枯斑半叶法接种和电镜检测发现，处理后的病毒致病力明显下降，病毒粒体大量发生断裂、略变弯曲等畸变现象，WCT-Ⅱ对TMV的枯斑抑制率为86．6％；WCT-Ⅱ处理烟草后，其叶片匀浆和胞间液的蛋白经SDS-PAGE不连续电泳发现，处理后的烟草叶片胞间在第5天至第9天和第7天分别存在1条酸溶性蛋白和1条碱溶性蛋白。上述研究结果表明，WCT-Ⅱ不仅对TMV病毒粒体具有体外钝化作用，而且能诱导植物产生病程相关蛋白，提高烟草抵抗TMV侵染的能力。     

丹东地区番茄花叶病毒原鉴定及药剂防治研究初报

丹东地区番茄花叶病的病害样本,经分离鉴定得知毒原种类为黄瓜花叶病毒(CMV),但也有一些混合侵染者。病汁液摩擦接种于心叶烟及普通烟上,均表现花叶症,侵染蚕豆生局部枯斑,侵染苋色藜表现针尖大小的枯斑。经试验该病毒致死温度为65℃,稀释限点为1:3000,体外存活期1～4天。电镜观察病毒粒子为球状。药剂防治试验采用 NS—83增抗剂100倍液及“九二○”10ppm 液喷雾防治,均有不同程度效果。     

珊瑚豆花叶病病原病毒鉴定

从珊瑚豆(Solanum pseudocapsicum L.var diflorum(Vell)Bitter)花叶病株上分离到一病毒(SPV—I),汁液摩擦接种和桃蚜(Myzus persicea)、棉蚜(Aphis gossypii)均能传毒。两次试验证明该病毒不经种传,人工摩擦接种可侵染7科中的21种植物。在黄瓜、心叶烟等植物上能引起系统花叶,能引起苋色藜、昆诺阿藜接种叶片局部枯斑。该病毒钝化温度为65～70℃10分钟;稀释限点为10~(13)～10~(-4);体外存活期为1～2天(22℃)。琼脂免疫双扩散表明,此病毒与黄瓜花叶病毒有明显的血清学关系。浸蘸法制备样品,2%醋酸铀负梁,透射电镜观察,该病毒粒子为正二十面体,其直径为28～30nm。根据此病毒的生物学、血清学特性和病毒粒子的形态特征,初步认为该分离物是黄瓜花叶病毒的一个株系。     

烟草花叶与黄瓜花叶病毒复合或重复侵染番茄后在体内TMV浓度及致病性的比较

1980至1982年的试验结果表明,北京郊区番茄抹上主要病毒类型是烟草花叶病毒(TMV),其次为黄瓜花叶病毒(CMV),以及部分由它们的复合侵染所造成的花叶、厥叶和茎坏死条斑等症状,其中以 TMV 起主导作用,它占总病毒数的50%以上。用测定 TMV 浓度的增量来估计不同组合接种的作用可以看出,单独侵染 TMV 的呈现系统花叶症、疱斑和部分叶片畸形;混合侵染的则表现一般:重复侵染的比前两种处理的症状表见更轻些,而单独侵染 CMV 的症状则表现最轻。不同方式组合的TMV 枯斑数量测定结果也同上述症状表现一致。症状的轻重与枯斑数量的多少成正比。单独侵染 TMV 的不同稀释度(5 mg/ml)的枯斑数量,比两种复合侵染的多。用数学方法所得 TMV 的致病性稀释曲线图同上述结果一致。由于复合侵染中CMV 对 TMV 浓度的增量产生一定的抑制作用,因此,在症状的表现上和枯斑数量也相应减轻和减少。     

甜菜黑色焦枯型病毒病原、cDNA合成、光生物素标记及探针制备

从新疆甜菜黑色焦枯型病株上分离到的一种直径为30nm 的球形病毒,在甜菜叶片上初期形成黑褐色小枯斑,后在叶脉间出现黑色焦枯,叶片通常直立向上,内卷;根毛大量坏死,但丛根症状不很明显。病毒经摩擦接种,可侵染4科13种植物,在苋色藜(Chenopodium.amaranticolor)、昆诺藜(C.quinoa)、蔷生藜(C.murale)、菠菜(Spinaciaoleracea)及番杏(Tetragonia expensa)叶片上表现局部坏死斑、一部分茄科植物上形成无     

水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸(SA)诱导烟草对烟草花叶病毒(TMV)的抗性,间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量,并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明,水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低,随着病毒挑战接种后时间延长,病毒含量增多,第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后,处理叶片(T-SA)与其上部未处理叶片(N-SA)比较,枯斑数基本一致,均比对照处理明显减少。     

利用巴西牵牛试管苗检测甘薯组培苗病毒技术研究

为改进甘薯组培苗的病毒检测工艺,以甘薯病毒指示植物巴西牵牛(Ipomoea setosa)种子在MS+GA3 2.0 mg/L培养基上萌发苗的茎尖为外殖体,在MS+IBA 0.2 mg/L的培养基上茎尖能够发育成完整的试管植株且能够以单叶节扦插通过腋芽再植株生长方式快速繁殖;在试管中将巴西牵牛试管苗和甘薯试管苗茎段进行试管微嫁接后在MS0培养基上培养,15天后,与带病毒的甘薯试管苗嫁接的巴西牵牛茎段所带的叶片均表现出黄化、花叶等阳性反应。与不带病毒的甘薯试管苗茎段嫁接的巴西牵牛试管苗茎段所带的叶片都正常生长;用甘薯试管苗的无菌研提汁液感染巴西牵牛试管苗茎段切口后在MS0培养基上培养,15天后,被带病毒甘薯试管苗研提汁液感染的巴西牵牛试管苗茎段所带的叶片都表现出黄化、花叶等阳性反应,继续培养叶片枯死。被不带病毒甘薯试管苗研提汁液侵染的巴西牵牛试管苗茎段所带的叶片都能正常生长;以上2种方法可以替代传统的“巴西牵牛种子苗网室嫁接检测法”检测甘薯组培苗是否带有病毒。具有灵敏度高、检测结果不受外界环境影响、检测成本低、培养条件可控、不受季节性限制等优点。     

水杨酸诱导的烟草对烟草花叶病毒的抗性

采用水杨酸（SA）诱导烟草对烟草花叶病毒（TMV）的抗性．间接ELISA法检测诱导后烟草叶片的病毒含量．并用枯斑寄主的半叶法检测诱导抗性程度。结果表明．水杨酸处理后烟草叶片内TMV含量明显降低．随着病毒挑战接种后时间延长．病毒含量增多．第28d普通烟叶片的病毒含量达到最大值。SA诱导处理后．处理叶片（T-SA）与其上部未处理叶片（N-SA）比较，枯斑数基本一致。均比对照处理明显减少。     

TMV与CMV不同组合侵染番茄后TMV致病性与浓度关系的数学模型与统计分析

由烟草花叶病毒(TMV)与黄瓜花叶病毒(CMV)三种不同组合接种番茄幼株(北京早红)后,再由接种侵染的番茄株体中分别捉取的 TMV 以不同的浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据,应用植物病毒侵染与浓度关系的理论模型 y=B_1ln(1+B_2V),采用 Gauss-Newton 法与 Marguardt 洪两种方法,分别实现了模型的参数计算,得到了三种组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的致病性与浓度关系的数学模型与最优曲线拟合,并对两种计算方法的效果进行了比较。本文还对由不同组合侵染番茄株体后提取的 TMV 的不同浓度对心叶烟侵染所得半叶平均枯斑数据进行了统计分析,证明 TMV 与 CMV 的不同处理组合间的 TMV 侵染的半叶平均枯斑数差异是极显著的,TMV 各接种浓度间侵染的差异性也是极显著的,而这两者的交互作用侵染的差异性则不如前两种情形显著,这些结论与实验结果完全一致。     

烟草花叶病毒系统诱发抗性的研究

用烟草花叶病毒诱发接种4种枯斑寄主:心叶烟、三生NN烟、珊西NC烟和蔓陀罗,可使接种植物对烟草花叶病毒、烟草蚀纹病毒及马铃薯X病毒的侵染表现很强的诱发抗性.这种抗性主要表现为处理的枯斑直径及枯斑数目比对照减少50%～75%.诱发抗性具有非特异性和广谱性.抗性在诱发接种后2～4天开始出现,7～8天达到最高抗性水平,且至少保持25天以上.     

甘薯脱毒苗的增产效果

1987～1989年凋查江苏省甘薯病毒病情况时发现,品种资源中有80％以上品种呈现多种病毒病典型症状。用指示植物嫁接法检测,田间植株的被侵染率高达90％以上。用硝酸纤维膜-ELISA和免疫电镜法检测本省甘薯病毒样本后得知,本省以甘薯羽状斑驳病毒(SPFMV)和甘薯隐潜病毒(SPLV)为主,前者的侵染率在50％以上,由上述两种或两种以上病毒混合侵染率在60％以上。由于受病毒侵染,甘薯产量和质量均受到很大影响。 应用脱毒苗,是当前国际上防治甘薯病毒病的主要方法。为了明确其效果,1988～     

花生上分离的黄瓜花叶病毒(CMV)

1984年在山东莱西采集的花生病毒病样本中,得到一个病毒分离物PN-14,经过寄主范围、蚜虫传病和血清学凝胶双扩散试验等研究,证明PN-14属于黄瓜花叶病毒(CMV)。 汁液摩擦接种的7科23种植物中,病毒分离物能侵染6科14种植物。接种花生(Arachis hypogeae)白沙1016品种后,顶叶有时出现脉明,褪绿斑,然后变为花叶,叶下垂而稍卷曲,全株矮化。接种苋色藜叶片,在2—3N后叶片产生针尖大小的褪绿点,然后变成小枯死     

百合病毒检测技术研究进展

笔者对百合病毒的检测技术作了综合评述,主要有植株直接观测法、指示植物接种鉴定法、电镜技术、血清学检测和分子生物学检测技术等,综合应用各项技术使检测更加灵敏、可靠。目前,常用的检测以血清学技术的ELISA为主、分子生物学技术的RT PCR为主。基因芯片检测技术是近几年发展起来高效的检测手段并在植物病毒检测上有广泛的应用前景。     

苹果茎沟病毒的分离纯化及血清学检测

 从苹果样品中分离到苹果茎沟病毒（ASGV）,汁液摩擦接种该病毒可侵染昆诺藜（Chenopodium quinoa）、苋色藜（C.amaranticolor）、心叶烟（Nicotiana glutinosa）、灰藜（C.niurale）、菜豆（Phaseolus vulgaris "pinto"）和西方烟（N.accidentalis"37B"）。在昆诺藜叶片汁液中,该病毒体外存活期为3d左右（25℃）,热钝化点60～65℃（10min）,稀释限点10#+(-4)。提纯病毒在-20℃下,存活期为6个月以上。提纯病毒液A260/A280=1.18。病毒粒子呈线状,大小为620～680nm×11～12nm。衣壳蛋白分子量为31.0kD。用提纯病毒免疫大耳白兔,所获抗血清用于检测提纯病毒样品和感染ASGV的昆诺藜叶片,其效价毛细管微量沉淀反应法为1:512,酶联免疫吸附法为1:10#+4以上。用该抗血清可检测出感染ASGV的苹果试管苗和田间生长植株叶片。     

几种常见草莓病害及防治

1.病毒病草莓病毒病种类多,而其他植物病毒也能侵染草莓.草莓经病毒侵染后,叶脉大都皱缩,叶片扭曲,同时沿叶脉形成黄白色或紫色病斑,叶柄也有紫色病斑,植株极度矮化.病毒大都为蚜虫传播,也有种子传染.