酶联免疫快速检测技术应用的研究

<正>近几年,随着人民生活水平的提高,畜产品作为食品在人民的生活中所占的比例越来越大,其质量安全也越来越受到人们的关注。为了确保可食性畜产品的质量安全,需要一种快速、简便、灵敏度高的检测技术,酶联免疫吸附试验具备这些优点。酶联免疫吸附试验3个基本构成条件为:1)抗原抗体的固相化,即使抗原或抗体结合到某种固相载体表面,并保持其免疫活性。2)抗原抗体的酶标记,即使抗原或抗体与某种酶连接成酶标抗原或抗体,这种酶标抗原或抗     

ELISA在饲料及食品安全检测中的应用

检测食品及饲料中有害物质的方法很多,但大多数需要昂贵的仪器设备,且操作繁琐成本较高。酶联免疫吸附分析法是固相吸附技术和免疫酶技术相结合的一种方法,具有操作简便和快速准确等特点,可用于检测食品及饲料中微生物、毒素、农药残留、重金属污染及转基因产品等。     

氯霉素残留ELISA检测方法

2002年农业部第235号公告《动物源性食品中兽药最高残留限量》中明确规定氯霉素禁止使用,在动物性食品中不得检出。所以建立检测动物源性食品中痕量氯霉素残留的分析方法具有重要的意义。目前常用于氯霉素残留的检测方法有微生物法、免疫分析方法、色谱法等,比较常用的是酶联免疫法和色谱法。酶联免役法（EUSA）因其具有操作简便、快速等优点,成为畜产品中农药残留、毒素、农药、微生物检测中最重要的检测技术之一。本文旨在建立畜产品中氯霉素残留的快速检测方法,并为进一步研制开发氯霉素残留检测试剂盒奠定基础。     

酶联免疫检测方法在食品安全检测中的应用

酶联免疫吸附测定法操作简便,尤其在分离结合物与游离物时,只需几次洗涤就能完成全部分离过程。酶联免疫吸附测定在检测各类食品药物残留中的应用情况作一介绍,并与其他各种检测方法优缺点进行比较,同时,探讨了将来的发展前景。1酶联免疫检测在食品安全检测中应用1.1肉类食品检测鸡肉组织抗生素残留检测已经有很多报道。1998年SawayaWN等[1]应用酶联免疫方法检测了包括鸡肉组织,牛肉组织在内的多种动物肉样品雄激素醋酸去甲雄三烯醇酮的残留,测定结果低于FAO/WHO允许的最大残留检测限2.0-0.2ng/g。2001年ShenJ等[2]报道了建立酶联免疫…     

影响饲料安全的因素及控制措施

随着人们对动物性食品的安全越来越重视,畜产品的质量安全已经成为人们的迫切需求,畜产品的质量安全受到畜禽的养殖、屠宰加工、运输、储藏等全过程的影响,其中饲料的安全性是最重要的环节之一.所谓饲料安全,通常是指饲料产品(包括饲料和饲料添加剂)中不含有对饲养动物的健康造成实际危害,而且不会在畜产品中残留、蓄积和转移的有毒、有害物质或因素;饲料产品以及利用饲料产品生产的畜产品,不会危害人体健康或对人类的生存环境产生负面影响.     

囊虫病免疫诊断检测方法的研究进展

由于科学技术的发展,囊虫病免疫诊断检测方法有了很大的进展,主要有1.免疫学检测方法,包括酶联免疫吸附法(ELISA)、斑点酶联免疫吸附法(Dot-ELISA)、生物素-亲和素酶联免疫吸附法(BAS-ELISA)、单克隆抗体酶联免疫吸附试验(McAb-ELISA)、酶联免疫印渍技术(ELIB);2.基因检测技术,包括DIG标记DNA探针、细胞因子基因检测方法、基因重组技术;3.免疫试剂盒的应用,包括循环抗原酶联免疫试剂盒、猪囊虫短程抗体IgG4快速ELISA检测试剂盒等。     

猪尿中克伦特罗检测方法--酶联免疫吸附测定法

农业部于2001年11月1日发布农牧发[2001]38号文，发布10种动物源食品中兽药残留检测方法。方法之十：猪尿中克伦特罗检测方法——酶联免疫吸附测定法。全文如下：猪尿中克伦特罗检测方法——酶联免疫吸附测定法1范围本标准规定了猪尿中克伦特罗检验的制样和酶联免疫吸附测定方法。本标准适用于猪尿中克伦特罗的残留常规快速筛选检测。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是…     

畜产品安全检测ELISA法试剂盒技术指标详解

ELISA(酶联免疫吸附)法是畜产品安全检测常用检测方法,商品化的试剂盒为检测工作提供了极大的方便。本文就ELISA法试剂盒检出限、交叉反应率、精密度和准确度等技术指标的定义及计算进行详细的阐述,旨在使从事畜产品安全检测人员能够正确使用试剂盒开展检测工作,确保检测结果的准确性。     

酶联免疫吸附试验在几种犬源人兽共患病检测中的应用

随着宠物养殖量的增加,宠物疫病也越来越受到人们的关注。宠物源性人兽共患病不仅危害宠物养殖业的健康发展,而且严重危害了人类健康甚至于生命安全。早期诊断对有效预防和控制宠物源性人畜共患病有重要意义。酶联免疫吸附试验具有操作简单、快速、敏感性高、特异性强等优点,在宠物疫病检测中发挥的作用越来越大。本文对酶联免疫吸附试验在犬源性人兽共患病中的狂犬病、弓形虫病、布鲁氏茵病和钩端螺旋体病检测上的应用与研究进展进行综述,旨在促进该技术在宠物疾病检测方面的应用与推广。     

酶联免疫检测方法在食品安全检测中的应用

本文介绍了什么是食品安全以及食品安全检测的意义,并综述了酶联免疫吸附测定在检测各类食品药物残留中的应用进展,最后就酶联免疫检测与其他各种检测方法进行了优缺点的比较,探讨了将来的发展前景。     

动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测方法的研究进展

动物性产品中存在多种氟喹诺酮类药物残留,不仅危害动物健康,且影响人类的动物性食品安全。作者就氟喹诺酮类药物残留问题及其检测方法（如微生物法、理化检测法、免疫分析法等）进行了简要综述,并进行了合理的展望,以期为今后研究和开发氟喹诺酮类药物残留检测方法提供参考。     

动物源性食品中多种兽药残留种类及检测方法

动物源食品中多种兽药残留主要是动物在生长和加工中额外添加。该种残留现象具有水平低、种类多、机制效应复杂的特点。针对该种动物制品在进行兽药残留检测中应综合运用新技术新方。目前在动物源食品中多种兽药残留检测中常用的技术为高效液相色谱质谱联合使用技术,该项技术具有检测灵敏度高,数据获取精准的特点,能对多种兽药残留情况进行定性定量的分析,在动物源食品多种兽药残留检测过程中应用较为广泛。该文主要论述动物源食品中多种兽药残留的种类及兽药残留检测技术。     

病毒性动物疫病诊断技术研究进展

动物疫病的大暴发不仅严重影响畜牧业的生产与发展，造成巨大经济损失，而且会严重危害人类健康。病毒性疫病的增加使得动物疫病更加复杂，流行趋势更加严峻。灵敏、特异、快速地诊断动物疫病是实施疫病防控措施的关键环节。基于PCR技术及等温扩增技术的分子生物学诊断解决了传统病原学诊断费时费力、免疫血清学存在的窗口期等问题并摆脱了对高精度温控设备的依赖，成为目前常用的病原体筛查方法。但大多数检测方法一次只能检测到一个或几个病原体，且复杂的试验流程及对设施的高要求降低了立即干预突发疫情的能力，同时无法满足某些检测分析需求。近年来，学科间相互渗透融合的高通量诊断技术发展迅速，具有同时监测、检测和表征成百上千个靶点的能力，能满足在多种环境下的病原体快速检测的需求，是生命科学发展过程中一种重要的生物学检测手段。笔者从病原学、免疫血清学、分子生物学及高通量诊断等方面对主要的病毒性动物疫病检测技术进行了综述，展望未来动物疫病诊断检测技术的发展，以期为动物疫病快速诊断提供更多的方案思路，提升动物疫病的防控能力。     

动物源性食品中齐帕特罗一步法ELISA试剂盒的研制

本研究依据直接竞争ELISA原理建立了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒。以齐帕特罗与载体蛋白偶联物作为免疫原免疫新西兰大白兔制得齐帕特罗多克隆抗体,棋盘包被法确定其最佳抗体包被浓度、酶标抗原工作浓度、包被条件、反应时间、底物显色时间等,并对试剂盒的各项技术指标进行确认。结果表明,成功组装了齐帕特罗一步法ELISA试剂盒,并建立了尿液、饲料、奶粉和奶汁,以及组织等样品的前处理方法,检测限均远低于1 μg/kg。该试剂盒线性检测范围为0.15～10 ng/mL,IC₅₀浮动范围0.43～0.79 ng/mL,样品板内、批内、批间的变异系数均小于15%,平均回收率在70%～110%之间,与其同类药物的交叉反应率均小于0.1%。提示,本试验研制的试剂盒重复性、特异性、稳定性等各项指标均符合技术要求,可用于动物源性食品中齐帕特罗药物残留的检测。     

动物源性饲料检测技术研究进展

饲料安全与动物生产、环境污染和人类健康密切相关。动物废弃物进入饲料行业曾经弥补了蛋白质饲料不足的缺口,但却带来了新的问题。自1986年第1例BSE出现后,世界许多国家和地区相继出台相关饲料法规以规范饲料行业,普遍禁止动物源性饲料在反刍动物生产中应用。因此,需要切实可行的检测技术为保障饲料安全提供技术支持。作者以组织学特征为基础的显微镜分析方法、以蛋白质和DNA为基础的免疫学和PCR分析方法、高效液相色谱法和近红外光谱法在动物源性饲料组分中的研究应用进展等方面做了综合评述。     

1种检测弓形虫急性感染的夹心ELISA方法

弓形虫（Toxoplasma gondii）是一种人畜共患机会性致病原虫，其急性感染可导致宿主产生明显的临床症状和严重的病理损伤。弓形虫致密颗粒蛋白1（dense granuleprotein 1，GRA1）是一种良好的诊断抗原，也是弓形虫急性感染的标志物循环抗原（circulating antigen，CAg）的重要组分。本研究利用TgGRA1单克隆抗体建立双抗体夹心ELISA方法，为急性弓形虫感染的检测提供依据。将免疫GRA1-His的小鼠脾细胞与SP2/0进行融合，筛选出能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。选择其中一种单抗与HRP标记后的鼠源GRA1多抗配对，建立1种双抗体夹心ELISA方法，检测人工感染弓形虫的猪和小鼠血清样品，并将检测效果与巢式PCR（nest PCR，nPCR）和商品化试剂盒进行比较。结果筛选到4株杂交瘤细胞，腹水效价为10⁶~10⁷，亚型均为IgG1；IFA和Western blot结果显示，4株单抗均具有良好的反应性和特异性。选择1G2单抗和HRP标记多抗配对，建立了循环抗原双抗体夹心ELISA方法，最低能够检测到血清中1.563 ng·mL^-1 GRA1抗原，或者100 ng·mL^-1 ESA。该方法与nPCR相比具有较高的一致性，较市售商品化试剂盒更为准确可靠。本研究第1次将GRA1抗原作为急性弓形虫感染的诊断指标，建立相应的检测方法，成功地在人工感染样品中检测到弓形虫急性感染，可为弓形虫急性感染的诊断提供参考，对临床上急性弓形虫病的治疗有指导意义。     

Establishment of Double-antibody Sandwich ELISA to Diagnose Acute Toxoplasmosis

The zoonotic protozoa Toxoplasma gondii is an opportunistic pathogen and distributes worldwide. Acute Toxoplasma infection causes serious pathological damages. Dense granule protein 1(GRA1) secreted by dense granule is an important component of Circulating antigen, which is an indication of acute toxoplasmosis. We aimed to use a monoclonal antibody against TgGRA1 to establish an enzyme-linked immunosorbent assay that targets antigen GRA1 in serum for acute toxoplasmosis diagnosis. First, the spleens of TgGRA1-His immunized mice were fused with SP2/0 cells,then we screened hybridomas that can constantly secret monoclonal antibody to the supernatant and injected them into mice to produce a large amount of mAbs. After the identification and purification of ascites, we choose one mAb as a capture antibody, HRP conjugated mouse anti-TgGRA1 polyclonal antibody as a detection antibody to develop sandwich ELISA. This method was used to detect samples from swine and mice artificially infected with Toxoplasma gondii. Besides, the results were compared with that of nPCR and two commercial kits to evaluate the efficiency of sandwich ELISA. We successfully got 4 mAbs with ascitic titers of 10⁶-10⁷, their subtypes are IgG1. Indirect fluorescent assay and Western blot showed that all of them can react specifically with TgGRA1.1G2 mAb and HRP conjugated mouse anti-TgGRA1 polyclonal antibody were used subsequently to establish sandwich ELISA for diagnosing acute infection. After optimization, sandwich ELISA can specifically detect 1.563 ng·mL^-1 GRA1 or 100 ng·mL^-1 ESA in serum. When detecting experimental animal samples, the sandwich ELISA exhibited the high consistency with the results of nPCR and showed higher efficiency than the commercial kits. In summary, we established a sandwich ELISA for acute toxoplasmosis diagnosis that captures one certain toxoplasma antigen GRA1, samples of artificially infected animals can be detected by this method, which makes acute toxoplasmosis diagnosis more reliable. It has guiding significance for clinical treatment of acute toxoplasmosis.     

纳米抗体在家畜传染病防治中应用的研究进展

随着社会经济水平的提高,人们对动物性食品的需求量显著扩大,对其安全性的要求也越来越严格。因此,家畜疾病的科学防控就显得尤为重要。目前,我国家畜疾病尤其是传染病的防控效果并不理想,仍需要不断开发和探索新的防控产品和防控策略。纳米抗体是最小的功能性抗原结合片段,和传统抗体相比,其具有分子量小、结构简单、稳定性高、易于基因改造、抗原特异性好、组织穿透力强等优点。纳米抗体源于骆驼科动物,作为一种新型抗体,在动物疾病防治技术中的研究和应用正逐步增加。本文重点综述纳米抗体在家畜传染病中的应用和研究进展,并结合发展趋势预测未来的研究重点。     

基因芯片技术及其在病原微生物检测和研究中的应用

基因芯片技术是20世纪90年代发展起来的一项重要的生物技术,具有快速、高效、高通量等优点,可广泛应用于疾病的诊断和治疗、药物基因组图谱、药物筛选、中药物种鉴定、农作物的品种选育、司法鉴定、食品卫生监督、环境监测、国防等许多研究领域.基因芯片技术作为一种高新技术,在病原微生物检测、病毒分型和流行病学调查、致病机制研究、耐药性监测、细菌功能基因组学与细胞微生物学研究以及环境微生物学研究等方面的应用越来越多,并有巨大的应用前景.论文就基因芯片技术的原理、分类、主要技术流程以及在病原微生物检测和研究中的应用进行了阐述.     

Competitive ELISA for the detection of antibodies to Rift Valley fever virus in goats and cattle

Rift Valley fever virus (RVFV) is one of the important emerging viral diseases of serious impact in public health and animal hygiene both in human and animal industries. In this study, we developed a monoclonal antibody-based competitive ELISA for the detection of antibodies to RVFV in goats and cattle. The recombinant N protein of RVFV was expressed in E. coli with a six-histidine tag, and the purified N protein was used for detecting antigen with a competitive monoclonal antibody against RVFV antibodies. The competitive ELISA (C-ELISA) could detect antibodies at 9-11 days after inoculation in goats and cattle with a sensitivity of 94.7% (virus neutralization titer >32) and specificity of 99.7%, respectively. In addition, the C-ELISA did not show any cross-reactivity with positive sera against arboviruses such as Akabane, Aino, Chuzan, Ibaraki and bovine ephemeral fever virus, which are prevalent viral agents in ruminant animals throughout Southeast Asia. The results of the present study indicate that the C-ELISA is a simple, rapid and convenient serodiagnostic method for RVFV in goats and cattle.