奶牛饲料中转基因豆粕的检测方法

1转基因豆粕检测的重要性在奶牛的精料配方中,豆粕含量在10%~50%不等,可见豆粕占相当大的比重。我国国产大豆虽然总产量与进口量接近,但国产大豆大部分用于食品加工,用于压榨的数量只占总产量的50%左右,并呈现下降的趋势。到2005年底,国外大豆进口量占据国内大豆总供应量的61%,而作为大豆加工产品     

饲用转基因豆粕对牛奶营养成分的影响及奶中外源基因转移检测

随机选择青岛市周边7个奶牛场,取精料和牛奶样品,检测精料的水分、粗蛋白、粗纤维、粗灰分、钙和总磷含量及牛奶干物质、粗蛋白和钙含量,采取荧光定量PCR法检测精料及牛奶中的豆粕外源基因。结果表明：7个牛场奶牛精料的常规营养成分水分、粗灰分、钙、总磷含量差异显著（P＆lt;0.05）,精料粗蛋白质、粗纤维含量、牛奶中的干物质、粗蛋白质和钙含量7个牛场之间差异不显著（P＆gt;0.05）。4个牛场精料中含转基因豆粕GTS40-3-2和2704品系外源基因,3个牛场精料中含转基因豆粕GTS40-3-2品系外源基因。牛奶中均未检测到相应外源基因。可见,饲用不同种类转基因豆粕精料对牛奶主要营养成分含量无显著影响,豆粕外源基因未向牛奶中转移。     

豆粕饲料中转基因成分的多重PCR快速检测

以大豆内源基因、35 S启动子基因、NOS终止子和35S-CTP4为检测对象,研究了对内源基因与外源基因的引物终浓度配比及退火温度对转基因豆粕多重PCR检测的影响.结果表明,建立的多重PCR方法能够准确的同时检测出豆粕中的内源基因和转基因成分.     

转基因小鼠多重PCR快速检测方法的建立

以转赖氨酸基因小鼠为研究对象,根据转入基因的载体结构分别设计赖氨酸基因、新霉素抗性基因、转基因启动子及小鼠基因组内参基因特异性引物,优化反应条件,建立转基因小鼠多重PCR检测方法。结果表明,建立的方法可以用于转赖氨酸基因小鼠的检测,同时为转基因动物检测标准的建立提供试验依据。     

大豆中转基因成分的定性PCR检测

实验利用CTAB法对大豆DNA进行提取,设计并合成引物对转基因大豆的内源基因Lectin、外源基因CaMV35S 启动子、NOS终止子和目的基因Cp4 EPSPS基因进行PCR检测,成功建立了大豆中转基因成分的检测方法。     

转基因牛多重PCR检测方法的建立

为建立一种快速检测转基因牛的多重PCR方法,针对牛线粒体16 S rRNA基因(BOS mtD-NA16 S rRNA,BOS)、转基因动物常用标记基因新霉素磷酸转移酶基因(NPT Ⅱ)、人乳铁蛋白编码基因(human laetoferrin gene,hLF)、人-α-乳清蛋白编码基因(human α-lactalb...     

内、外源基因在转基因玉米蛋白粉加工过程中降解变化的研究

研究探索转基因玉米在加工过程中内、外源基因的降解规律.在转基因玉米蛋白饲料加工过程的主要环节收集样本,使用微滴式数字PCR仪对加工过程中样品内、外源基因不同扩增片段进行定量研究.结果显示,酸浸对样品DNA的降解影响有限,但浸泡后的浆料湿磨以及蛋白分离阶段,样品DNA降解严重.试验通过引入的数学模型计算DNA损坏概率表明...     

饲料中转基因成分的检测分析方法

<正>转基因饲料(genetically modified feed,GMF)是指通过基因重组技术获得的基因改良生物加工而成的饲料(SN/T1201-2003)。目前,转基因农作物的商业化种植面积正在逐年增加,品种日益丰富,鉴于转基因作物潜在的风险性,世界各国纷纷制定相应的政策要求对用于饲料的转基因作物进行风险性评估,并且要求在饲料中的转基因成分不能超过一定数量,如欧盟要求饲料中的转基因成分不能超过     

豆粕发酵过程参数与检测方法的建立

<正>1前言一方面由于鱼粉等高端蛋白质饲料价格的提升,深加工豆粕作为一种鱼粉的替代品而被开发。另一方面,作为一种常见的大宗原料,深加工     

玉米-豆粕型日粮中添加木聚糖酶对肉鸡生产性能和内源酶活性的影响

试验选用270羽1日龄艾维茵健康肉仔鸡,随机分成3组,研究了玉米-豆粕型日粮条件下添加不同水平的木聚糖酶对肉鸡生产性能和内源酶活性的影响。结果表明,添加25g/t和50g/t的木聚糖酶可提高肉鸡的日增重,降低料重比;提高胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰淀粉酶和胰脂肪酶酶活力,同时亦显著提高了肉鸡的生产效益。     

豆粕中尿素酶活性检测方法的应用推广

<正>豆粕的加工过程是影响豆粕质量的关键,加热过程可使蛋白质适度变性,使大部分热不稳定抗营养因子钝化和失活,消除抗营养因子对动物的危害,提高氨基酸消化率,因此加热程度是影响豆粕品质的重要因素。     

分析解读欧盟关于转基因蜂蜜的检测要求和手段

欧盟是我国蜂蜜出口重要的市场,2011年下半年以来,欧盟要求检测蜂蜜中的转基因成分,我国转基因作物种植的品种和数量不断增加,转基因成分在蜂蜜中存在的风险性也不断加大。欧盟官方推荐在食品中如果使用经批准的转基因花粉含量占总花粉含量超过0.9%的蜂蜜时应当予以标识,在0.9%限量界定方面,目前倾向的鉴定方法是用PCR方法与显微镜检验相结合的方法。欧盟官方认可的QSI实验室和intertek实验室目前检测蜂蜜中转基因花粉成分时,选择的三个筛选基因为P-35S、T-NOS和FMV基因。     

紫花苜蓿MsZIP基因超表达载体的构建及转基因苜蓿检测

根据已经克隆得到的MsZIP基因(GenBank序列号:HQ911778),扩增编码区cDNA,构建植物超表达载体PBI-MsZIP。酶切鉴定表明,目的基因已经正确的插入到载体中,超表达载体构建成功。采用CaCl₂冻融法将其转入农杆菌菌株中,然后采用农杆菌介导的方法,转化紫花苜蓿,共得到11株抗性苗,对其中的4株进行卡那霉素基因PCR检测,均得到了目的条带。同时对这4株抗性苗进行目的基因的RT-PCR检测,均得到了目的条带。说明MsZIP基因已经成功在苜蓿中超表达。为了进一步验证该基因的功能,分别用200 mmol/L NaCl和25 μmol/L PEG-6000处理转基因苜蓿,3 d后进行生理指标的测定。结果表明,MsZIP基因在苜蓿中超表达可以提高苜蓿的耐盐性和耐旱性。     

鸡痘病毒基因探针检测方法的建立及初步应用

利用PCR方法成功克隆了鸡痘病毒（Fowl poxvirus，FPV）4b核心蛋白基因549bp片段，序列分析表明，该序列与模板DNA（AF198100）碱基序列的同源性为99．45％，只有3个碱基差异，第215位由C→T，第386位由T→A，第388位由G→A。回收FPV4b核心蛋白基因549bp片段，以其为模板制备了地高辛标记的DNA探针。对新标记的探针进行标记效率检测，结果显示其标记效率为100mg／L；敏感性检测表明，该探针对同源DNA的检出限量为10Pg；特异性检测结果表明，用本试验所标记的探针对提取的FPV282E4和FPV儿株DNA、重组质粒pMD 18-T-4b进行检测结果均呈阳性，而鸡马立克氏病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒、CEF的核酸提取物均成阴性，说明该探针具有较强的特异性。初步应用表明，本试验所建立的FPV的基因探针检测法可用于FPV的检测。     

家蚕RYBP基因的结构与表达模式分析及转基因干涉系统的建立

多梳蛋白(polycomb group,PcG)是一类对生物有机体生长发育很重要的转录抑制因子,参与有机体的发育调控。Ring和YY1结合蛋白(Ring and YY1 binding protein,RYBP)是在小鼠(Mus musculus)和果蝇(Drosophila melanogaster)中推断的PcG蛋白成员。基于生物信息学分析方法,设计引物克隆了家蚕的RYBP基因(BmRYBP);序列结构分析显示该基因有一个420 bp的完整ORF,由3个外显子和2个内含子组成,编码139个氨基酸,预测其蛋白质分子质量为15.4 kD,等电点为10.36,N端的20～44 aa有一个与蛋白间相互作用有关的锌指结构域(ZnF-RBZ);半定量RT-PCR分析显示,该基因在家蚕5龄3 d幼虫生殖腺中高水平转录;基于GAL4/UAS双元系统,构建了具有BmRYBP序列反向重复结构的转基因干涉表达载体,通过显微注射家蚕早期胚胎,获得了UAS系统的转基因家蚕后代,为研究BmRYBP在家蚕生长发育过程中行使的功能奠定了基础。     

转猪MC4R基因小鼠模型的建立与检测

为了进一步探讨黑素皮质素4受体(melanocortin-4 receptor,MC4R)基因对动物采食量和生长性能的影响,本研究利用基因重组和显微注射的方法建立了转猪MC4R基因的小鼠模型。采用PCR扩增、克隆测序的方法对每代转基因小鼠进行阳性鉴定,然后采用常规测定方法对F3代转基因阳性鼠与同期阴性对照鼠的体重和采食量进行了测定。结果显示:成功构建了转猪MC4R基因小鼠模型,阳性鼠与阴性鼠相比,体重和采食量均略有增加,但未达到显著水平(P>0.05)。据此推测体内超表达MC4R基因并不能像敲除掉该基因一样显著地改变机体性能。     

用耐草甘膦抗农达大豆和用近同基因传统大豆制作的豆粕在生长肥育猪日粮中的应用

前言豆粕是世界各地畜禽饲养中最常用的蛋白质饲料,它有优良的氨基酸构成,可在畜禽饲养中作为玉米、高粱、大麦等谷物的补充。现已培育出了一些作物,包括大豆在内,其中整合入了一个能赋予作物以耐“草甘膦”能力的基因;草甘膦(glyphosate)是常用除草剂“农达”(Roundup~(R))中的活性成分(Padgette等,1995)。该基因编码土壤杆菌属(Agrobacterium sp.)CP4     

致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法的建立

根据我国致病性嗜水气单胞菌分离株AH－78－2气溶素（Aer）基因保守区的测序结果，设计2对引物，建立了检测嗜水气单胸菌的PCR方法，通过对20株嗜水气单胞菌，12株相关菌株及157份送检病料的检测，并与SPA－CoA检测结果对照表明，PCR方法具有较高的敏感性和特异性，可检测最低100cfu的细菌，该方法的建立为致病性嗜水气单胸菌的检测提供了一种简便，快速的新途径，以我国分离株的序列设计引物使该法具有更强的针对性。     

食品与饲料加工过程中转基因作物的检测技术进展

1引言转基因作物是指利用重组DNA技术将外源基因整合于受体植物基因组,改变其遗传组成后产生的植物及其后代,也称为遗传修饰生物体(Geneticallymodified organisms,GMOs)。自1983年首例转基因植物——转基因烟草问世以来,全球转基因作物的种植面积和销售收入均以倍数增长。全球转基因作物的种植面积2005年达到9000万公顷,其中大部分种植在美国、加拿大和阿根廷。从转基因作物种类来看,转基因大豆占60%左右,其次是转基因玉米和棉花。我国大豆年产量仅次于美国、巴西和阿根廷,居世界第四,2003年大豆产量约1620万吨。但是,国产大豆仍远不能…     

大肠杆菌菌毛基因多重PCR检测方法的建立与初步应用

为建立一种可以同时扩增大肠杆菌(E.coli)F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因保守序列的多重PCR检测方法,本研究设计合成5对分别针对F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的特异性引物,以具有相应菌毛基因的E.coli参考菌株DNA为模板,通过对多重PCR反应条件的优化,建立了检测F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的多重PCR方法。所建立的多重PCR方法能够特异性扩增F4、F5、F6、F41、F18菌毛基因的目的片段,大小分别为770 bp、533 bp、422 bp、643 bp和1140 bp,该方法对沙门氏菌、猪丹毒杆菌、巴氏杆菌以及无菌毛基因的E.coli等参考菌株均无特异性扩增片段,检出F4、F5、F6、F41和F18菌毛基因的最低活菌浓度分别为5.3×10^5cfu/mL、3.7×10^6cfu/mL、3.1×10^5cfu/mL、3.7×10^7cfu/mL、6.9×10^5cfu/mL。用不同批次的引物和试剂进行3次多重PCR检测均能扩增出目的条带,表明建立的多重PCR方法有很好的批内和批间重复性。对90株大肠杆菌临床分离菌株菌毛基因进行检测,F4阳性率为3.33%,F5阳性率为2.22%,未检测到F6、F41和F18阳性菌株,其检测结果与常规单一PCR的检测结果一致。研究表明:建立的E.coli菌毛基因多重PCR分型方法具有很好的特异性、敏感性和重复性,可用于E.coli分离菌株菌毛基因型的快速鉴定,同时提高了检测效率。