蜗牛肝脏β-甘露聚糖酶的分离提取及纯化鉴定

从蜗牛肝脏组织制备粗酶液后,经硫酸铵分级分离和两次聚丙烯酰胺凝胶制备电泳,纯化到了蜗牛肝脏β-甘露聚糖酶。该酶经SDS-PAGE电泳分析显示为单一条带,其表观相对分子量为37KD。本法纯化的蜗牛肝脏β-甘露聚糖酶,比活力达到992.3U/mg,提纯倍数达8.45倍,回收率为25.12%。     

薄荷幼叶蔗糖酶的分离纯化与部分性质

经10 KD的膜超滤, DEAE-Sepharose离子交换柱层析, Sephacryl S-200凝胶过滤纯化, 从薄荷(Mentha haplocalyx Briq)幼叶中分离纯化出电泳纯的转化酶, 该酶提纯倍数为186.3倍, 比活力为67.06 U/mg. 酶学性质和动力学性质研究表明: 该酶不可逆催化蔗糖生成果糖和葡萄糖, 最适pH值为5.0, 最适温度为55 ℃, 米氏常数Km值为12.25 mmol/L.     

短小芽孢杆菌碱性蛋白酶的提纯与性质研究

将短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)Zkud202-4液体的发酵液离心去菌体,用硫酸铵盐析得粗酶,透析除盐后进行Sephadex G-75柱层析得到电泳纯碱性蛋白酶,用该法提纯的碱性蛋白酶比活力从粗酶液的155.5 U/mg提高到了954 U/mg,回收率为27.6%.该酶水解酪蛋白的最适反应温度为50℃,最适作用pH为10,且该酶具有较高的热稳定性和耐碱性.经SDS-PAGE测定,其分子质量约为2.5 ku.     

薄荷幼叶蔗糖酶的分离纯化与部分性质

经10 KD的膜超滤,DEAE-Sepharose离子交换柱层析,Sephacryl S-200凝胶过滤纯化,从薄荷（Mentha haplocalyx Briq）幼叶中分离纯化出电泳纯的转化酶,该酶提纯倍数为186.3倍,比活力为67.06 U/mg.酶学性质和动力学性质研究表明：该酶不可逆催化蔗糖生成果糖和葡萄糖,最适pH值为5.0,最适温度为55℃,米氏常数Km值为12.25 mmol/L.     

羊催乳素的纯化、理化鉴定及抗血清的制备

本试验对绵羊垂体前叶催乳素进行了提纯和生物学、生物化学及免疫学方面的鉴定.516g 羊全垂体经硫酸铵、乙醇等的逐级提取,最后经 DEAE-纤维素柱层析得到催乳素纯品450mg.用鸽嗉囊局部皮内微量注射法测得其生物学活性为27国际单位(27IU/mg)。PAG 电泳表明有三条带。SDS 电泳测得其分子量为23000。IEFP 电泳表明平均等电点为5.85。用 Dansyl-Cl 法测定其 N-末端氨基酸,只显出苏氨酸一点。表明提纯的催乳素是高纯的。用该催乳素免疫家兔,九周后用琼脂双扩散法测抗血清,其效价最高达1:32,说明该纯化品具有很强的免疫原件.     

黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究

实验室保存的菌种黑曲霉TH-2经柠檬酸-磷酸缓冲液抽提,DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,得到电泳纯的蔗糖酶.纯化后的蔗糖酶比活为135.90 U/mg,回收率为37.7%,提纯倍数为20.3倍.测得酶的相对分子质量为1.29×105,最适温度为65℃,最适pH值为4.4.以不同浓度蔗糖为底物测得Km值为23.1 mmol/L.Ag+对其活性有很强的抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+对其有激活作用.     

黑曲霉TH-2蔗糖酶的分离纯化及部分性质研究

实验室保存的菌种黑曲霉TH-2经柠檬酸-磷酸缓冲液抽提,DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶过滤层析,得到电泳纯的蔗糖酶.纯化后的蔗糖酶比活为135.90 U/mg,回收率为37.7%,提纯倍数为20.3倍.测得酶的相对分子质量为1.29×105,最适温度为65℃,最适pH值为4.4.以不同浓度蔗糖为底物测得Km值为23.1 mmol/L Ag+对其活性有很强的抑制作用,而Zn2+,Cu2+,Mn2+对其有激活作用.     

用Digoxigenin标记重组质粒DNA探针特异性的改良

鸡马立克病病毒基因组DNA的BanHI-K_3片断克隆的重组质粒DNA及从质粒上切下的经电泳和电洗脱提纯的BamHI-K_2DNA片断,在用非放射性Digoxigenin([dig])标记后,分别用作检测马立克病病毒DNA的探针。对两种探针特异性的比较表明,BamHI-K_3克隆的全质粒DNA探针对其它质粒来源的NDA仍表现出很强的交叉反应性,而用经电泳电洗脱提纯的BamHI-K_3DNA片断制备的探针,则仅对含同源DNA片断的质粒提取物或菌苔裂解物产生明显呈色反应,但对不含同源DNA的其它质粒DNA提取物几乎完全不呈现交叉反应。     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG. 经SDS-PAGE电泳鉴定, 纯化的IgG达到电泳纯. 以此纯化的IgG, 采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠, 取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合, 融合率为90.3%. 建立间接ELISA, 用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体. 初检阳性率为13.9%. 经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株, 命名为6B4、 4B8. ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG, 6B4、 4B8经反复冻存, 复苏及多次传代, 仍能分泌高效价抗体, 分泌抗体均属IgG1、κ型. 本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.     

抗猪IgG单克隆抗体的研制

采用饱和硫酸铵盐析、离子交换柱层析技术从猪血清中提纯IgG.经SDS-PAGE电泳鉴定,纯化的IgG达到电泳纯.以此纯化的IgG,采用长程免疫法免疫BALB/c小鼠,取4次免疫后的脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞用PEG-1500进行细胞融合,融合率为90.3%.建立间接ELISA,用于检测杂交瘤细胞上清中的单克隆抗体.初检阳性率为13.9%.经2次亚克隆反复筛选获得了2株能稳定分泌抗猪IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为6B4、4B8.ELISA证实所获得的单抗是特异性针对IgG,6B4、4B8经反复冻存,复苏及多次传代,仍能分泌高效价抗体,分泌抗体均属IgG1、κ型.本研究所获得的单克隆抗体将对检测猪抗体水平及IgG提纯发挥重要作用.     

杨树基因组DNA提纯方法的优化及其RAPD鉴定

为获得一种较为理想的杨树基因组DNA的提纯方法,根据提取植物基因组DNA的经验,优化了Clark利用CTAB提取植物基因组DNA的方法。加入了一系列的去除蛋白、酚类物质,利用MgCl2沉淀DNA,通过与三种常规的提纯方法进行比较,经紫外检测和电泳检测,结果表明优化的方法获得了高质量的DNA,是较为理想的杨树基因组DNA的提纯方法。能满足RAPD及其他分子生特学研究的需要。在试验中还利用该方法提纯了五个品种的杨树基因组DNA,采用RAPD分子标记技术,在引物S174作用下成功地进行了PCR扩增及品种鉴定。     

超声波对菜豆种子超氧化物歧化酶活性的影响

菜豆种子粗酶液经乙醇-氯仿、丙酮沉淀、DEAE-纤维素柱层析和Sephadex G-75柱层析,获得比活力为127．45U／mg的超氧化物歧化酶(SOD),该酶活性受H2O2和KCN强烈抑制,经电泳鉴定为3种SOD同工酶,部分纯化的SOD证明为Cu,Zn-SOD,经不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳获得其中1种电泳纯的酶,超声波处理此酶后,酶活力发生改变,适宜的超声波参数能显著提高酶活力,经超声波处理后,SOD的紫外吸收光谱无明显变化,而紫外差示光谱在一定波长范围内出现正峰和负峰。     

木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯

[目的]为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供必要的技术支持。[方法]由高产几丁质酶的木霉菌株YHS-1液体振荡培养得到木霉几丁质酶粗酶液,分别测定了木霉菌株YHS-1在不同时间、不同温度下的几丁质酶活值,优化木霉产酶条件。并研究了几丁寡糖的制备及提纯方法。[结果]供试木霉最佳产酶温度为35℃,最佳产酶时间为4 d,此时酶活值为55 U。几丁质酶粗酶液通过(NH4)2SO4分级沉淀、阴离子交换柱层析、SDS-PAGE提纯后可以达到层析纯,出现单一并且峰值很高的层析峰,电泳确认2条带,分别为几丁质外切酶和几丁质内切酶。几丁寡糖用初提纯的几丁质酶与过量的胶态几丁质反应得到粗溶液,再经过蛋白质沉淀和冷冻离心后得到纯化。[结论]建立了木霉几丁质酶和几丁寡糖的制备及提纯方法,为木霉几丁质酶和几丁寡糖的开发应用提供了必要的技术支持。     

DFRKN-1碱性磷酸酶的提取纯化和主要理化性质研究

[目的]提取纯化根结线虫天敌真菌-1(Destroying fungi of root-knot nematode-1,DFRKN-1)的碱性磷酸酶,并对其主要理化性质进行研究。[方法]以DFRKN-1为提酶材料,经正丁醇提取,硫酸铵分级沉淀分离,透析获得酶的粗提取液,用SephadexG-150凝胶过滤柱层析纯化,获得纯化碱性磷酸酶,并测定纯化碱性磷酸酶的理化性质。[结果]酶纯度达到电泳纯,提纯倍数达到15.7倍,比活力达5333 U/mg;该酶的最适pH值为8.9,最适温度为43℃,米氏常数为6.82 mmol/L;K+、Ba2+、Mg2+对该碱性磷酸酶的活性均有激活作用,甲醛、草酸、酒石酸对该碱性磷酸酶均有抑制作用。[结论]试验结果可为进一步深入研究DFRKN-1提供参考。     

毕赤酵母工程菌原果胶酶的分离纯化

采用硫酸铵分级沉淀、凝胶过滤和离子交换层析等方法,对毕赤酵母工程菌发酵液中的原果胶酶进行了分离纯化,测定了其分子质量,并确定了离子交换层析法的最佳离子交换条件。结果表明,硫酸铵的饱和度为70%时,可以使原果胶酶的回收率达到71.9%,比活力为1 096.35 U/m g;经Sephadex G 75凝胶过滤,原果胶酶回收率达到57.6%,酶的比活力提高到3 762.40 U/m g;最佳离子交换条件为:0~0.5 m o l/L N aC l(缓冲体系为N oA c-HA c,pH 5.8)溶液线性洗脱、Sepharose F ast F low离子交换层析分离,在该条件下酶的比活力提高到9 743.20 U/m g,纯度为粗酶液的18.91倍,达到了电泳级;SDS-PAGE电泳结果表明,其分子质量为43.17 ku。     

几种提纯鸭病毒性肝炎血清免疫球蛋白G方法的比较

用辛酸-硫酸铵法、硫酸铵法、硫酸钠法和聚乙二醇沉淀法分别提纯鸭抗DHV血清中免疫球蛋白G(IgG),经SDS-PAGE电泳、蛋白含量及生物活性测定分析表明,先用辛酸澄清,再用50%饱和硫酸铵粗提,最后用35%饱和硫酸铵重复两次提取的IgG纯度和生物活性均较其它方法高。此法操作简便,便于推广应用。     

毛花猕猴桃蛋白酶的提纯及其性质研究获得成功

我国特有毛花猕猴桃(Actidia eriatha)果实内含有目前国内外尚未研究的蛋白酶,我们对其进行了提纯,并对纯化酶的基本性质进行了研究。毛花猕猴桃果汁抽提液通过柱层析分离,蛋白酶的比活力提高89倍。纯化后的该酶制剂经聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳,呈现一条蛋白区带;在 SDS—聚丙烯酰胺     

猪金属硫蛋白抗体的制备

以自猪肝提取的金属硫蛋白(MT)与牛备清白蛋白(BSA)偶联物为抗原,免疫昆明小鼠以制备多克隆抗体。结果表明:加强免疫间隔时间10 d,MT首次免疫量保持在16~32μg/只,加强免疫时用量依次加倍,其免疫效果最佳,可使大部分小鼠抗血清效价达到1∶16以上。随后,将这部分抗血清IgG提纯并达到电泳纯,经直接ELISA鉴定其确为猪MT的特异性抗体,表明可用于酶标记方法检测猪MT。     

发酵法制取植酸酶的研究

以麸皮为主要原料,添加少量稻壳以增加疏松度,加入与物料同重量的水,混匀,经灭菌、冷却后,接种诱变后的黑曲霉3.324菌株。采用曲盘固体发酵法,在保持室温28-30℃,干温相差1℃的条件下发酵6 d,经生化方法提纯得到植酸酶精制品,每克干曲(以麸皮原料计算)产植酸酶约0.145 g,精制品植酸酶活力达300 U.g-1。     

鸭肝过氧化氢酶的分离纯化及部分性质研究

新鲜鸭肝经匀浆、磷酸缓冲液抽提、硫酸铵分级沉淀、DEAE-Sepharose离子交换层析、Sephacryl S-200凝胶过滤层析,得到鸭肝过氧化氢酶电泳纯制品,回收率为18.23%,比活达4 780.38 U/mg,纯化倍数为66.15.最适温度为40℃,最适pH为7.0,该酶在20～40℃,pH 5～8内稳定.经凝胶过滤和SDS-PAGE测得该酶的全分子量为250 KD,亚基分子量为62.5 KD.