不同理化因素对乳房链球菌生物膜形成的影响

采用微量板半定量法,研究影响新疆南疆地区奶牛乳房炎性乳房链球菌生物膜形成的因素,探索不同理化因素对乳房链球菌生物膜形成的影响。结果表明,在THY(Todd Hewitt Broth+0.1%Yeast Extract)培养基中加入w=0.5%的牛奶能促进乳房链球菌的生长及生物膜的形成;检测的3种培养基中,BHI培养基最有利于乳房链球菌的生长及生物膜的形成;不同培养时间结果显示,36h培养更有利于乳房链球菌的生长及生物膜的形成;不同pH的试验结果表明,pH等于7时最有利于乳房链球菌的生长及生物膜的形成。     

Molecular epidemiology,characterization of virulence factors and antibiotic resistance profile of Streptococcus agalactiae isolated from dairy farms in China and Pakistan

Streptococcus agalactiae is one of the most common pathogens that cause bovine mastitis worldwide. Identifying pathogen prevalence and virulence factors is critical for developing prevention and control approaches. Herein, 1 161 milk samples from various dairy farms in China (n=558) and Pakistan (n=603) were collected between 2019–2021 and were subjected to S. agalactiae isolation. Prevalence, serotyping, virulence genes, and antibiotic-resistant genes of S. agalactiae were evaluated by PCR assay. All isolates were characterized for haemolysis, biofilm production, cytotoxicity, adhesion, and invasion on bovine mammary epithelial cells. The prevalence of S. agalactiae-induced mastitis in cattle was found to be considerably higher in Pakistan than in China. Jiangsu and Sindh provinces had the highest area-wise prevalence in China and Pakistan, respectively. Serotypes Ia and II were prevalent in both countries, whereas serotype III was found only in Pakistan. Moreover, all isolates tested positive for PI-2b gene but negative for PI-1 and PI-2a genes. All isolates harboured cfb, cylE, hylB, and fbsB virulent genes, whereas many of them lacked bibA, rib and bca. However, the absence of bac and scp genes in Chinese isolates and cspA in Pakistani isolates was noted, while spb1 and lmb were not detected in isolates of both countries. Pakistani isolates, particularly serotype Ia-positive, had a considerably higher ability to produce biofilm, haemolysis, cytotoxicity, adhesion, and invasion than Chinese isolates. Most of the isolates were phenotypically resistant to tetracycline, erythromycin, and clindamycin and genotypic resistance was confirmed by the presence of ermA, ermB, tetM and tetO genes. Our study highlights the antimicrobial resistance profile and virulence-related factors contributing to the epidemiological spread of mastitis-causing S. agalactiae in China and Pakistan. The findings may facilitate future studies designed to develop improved treatment and control strategies against this pathogen.     

Identification of Streptococcus thermophilus used in starter cultures in the production of hard cheeses

A prototype developed by the method of revealing Streptococcus thermophilus in PCR with the aid of synthetic oligonucleotide primers in starter cultures in the production of hard cheeses has specificity and makes it possible to effectively reveal and identify S. thermophilus strains and cultures used in the dairy processing industry.     

中药制剂对奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌和无乳链球菌抑菌试验（英文）

[目的]研究中药制剂对奶牛隐性乳房炎金黄色葡萄球菌和无乳链球菌的抑菌效果。[方法]根据中兽医学理论和中药特性,组成复方中药制剂＂增乳健牛散＂4种不同的方剂,制备水煎液对奶牛乳房炎的主要病原菌进行抑菌试验。[结果]4种不同的方剂水煎液都有抑菌效果;对金黄色葡萄球菌和无乳链球菌,方剂3为极敏,其他3种不同的方剂为高敏;方剂3抑菌作用最强。[结论]该研究为治疗奶牛隐性乳房炎相关中草药方剂的开发提供了理论依据。     

新疆南疆地区奶牛乳房链球菌gapC基因原核表达载体的构建

为获得乳房链球菌(Streptococcus uberis)gapC基因的原核表达载体,通过PCR方法扩增出新疆南疆地区奶牛乳房链球菌临床分离株的gapC基因,并克隆到原核表达载体pET32a(+)中,构建了重组质粒pET32a(+)-gapC,将重组质粒转化宿主菌E.coli BL21进行重组蛋白的表达。实验结果表明,IPTG诱导5～9 h均可获得大量重组蛋白。重组蛋白分子量约为54.0 kD,介于43 kD～66.2 kD之间,与预期大小一致,说明表达载体构建成功。通过优化最佳诱导条件,获得乳房链球菌gapC基因重组蛋白的最佳诱导条件为0.5 mmol/L IPTG诱导6 h即可获得大量重组蛋白,为进一步确定蛋白的免疫保护性和制备疫苗奠定了基础。     

兰州地区奶牛临床型乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

从甘肃省兰州市2家奶牛场采集了44份患有临床型乳房炎奶牛的乳样,进行细菌分离鉴定及主要病原菌的药敏试验.结果表明:导致奶牛临床型乳房炎的主要致病菌有葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属,其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌共35株,占44.3％;牛链球菌20株,占25.3％;大肠杆菌11株,占13.9％,说明奶牛乳房炎的主要致病...     

上海部分地区猪链球菌2型的流行病学调查及其耐药性

猪链球菌2型是一种重要的人兽共患病病原,由其引起的猪链球菌病给养猪业带来巨大的危害。本研究通过PCR方法扩增谷氨酸脱氢酶(GDH)基因和荚膜多糖(CPS)基因检测猪链球菌2型,对上海部分地区猪链球菌2型的流行病学进行调查,并对分离到的菌株进行生化鉴定及耐药性研究。结果显示,上海部分地区猪链球菌的检出率为41.2%(103/250),猪链球菌2型的检出率为12.4%(31/250),猪链球菌2型占猪链球菌的30.1%。猪链球菌2型菌株对四环素、链霉素和氯霉素的耐药性最为严重,多数菌株呈多重耐药性,其中以4重耐药性为主。这为上海地区猪链球菌病的监管提供了依据,并对临床治疗使用抗生素具有参考价值。     

哈尔滨地区奶牛隐性乳房炎病原菌的分离鉴定

通过BMT法、乳汁pH检验法和体细胞直接计数法等方法相结合,对哈尔滨市3个大型奶牛场、10户奶牛养殖户选取的1 000头奶牛,4000个乳区进行隐性乳房炎的流行病学调查,以及致病菌的分离鉴定.结果表明,其中隐性乳房炎的发病率为47.7%(477/1 000);乳区发病率为27.3%(1092/4000),从477头的隐...     

牛源耐药性金黄色葡萄球菌的分离鉴定及黏附因子基因FnBP和clfA的表达分析

为探究致奶牛乳房炎主要致病菌金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的生物学特性,对新疆垦区部分奶牛场乳房炎奶样进行病原学分析,并对病原菌进行耐药性、毒力因子的表达分析。从乳房炎奶样中分离得到S.aureus,采用血浆凝固酶试验、KB法、琼脂筛选法、生化鉴定法(VITEK32)、聚合酶链式反应等法进行鉴定。针对毒力基因clfA(凝集因子A)和FnBP(纤维结合素结合蛋白)进行特异性PCR扩增,用T/A克隆法将其插入pMD18-T载体,并构建原核表达载体pET-28a(+)-FnBP和pET-28a(+)-clfA。转化BL21(DE3)菌,经IPTG诱导表达,通过SDS-PAGE和Western blot分析鉴定表达产物。常规鉴定出葡萄球菌105株,其中金黄色葡萄球菌(S.aureus)62株,从62株S.aureus中检出耐药性金黄色葡萄球菌(MRSA)13株,检出率为20.10%,2株未确检。经测序证实与GenBank中FnBP基因(J04151)和clfA基因(AB245457)序列同源性分别为100%和95.69%。SDS-PAGE显示,clfA和FnBP蛋白相对分子质量分别为45ku和58ku。Western blot分析显示,clfA蛋白和FnBP蛋白均可与金黄色葡萄球菌多克隆抗血清发生特异性反应。病畜奶样中MRSA检出率较高,新疆垦区部分牛场呈蔓延趋势,成功表达了clfA、FnBP蛋白,具有一定的免疫保护效果。     

新疆某地奶牛隐性乳房炎病原分离鉴定及药敏试验

本研究对新疆昌吉郊区部分奶牛场进行调查,从两个大型奶牛场集乳样,主要针对患有隐性乳房炎的奶牛,共采集120份乳样进行细菌分离鉴定并选择主要病原菌进行药敏试验。结果表明,导致奶牛隐性乳房炎的主要致病菌有葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属,其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌共71株,占55.04%;牛链球菌18株,占13.95%;大肠杆菌1株,占0.78%。这些致病菌对环丙沙星、新生霉素等药物有很高的敏感性,而对青霉素、链霉素、杆菌肽和多粘菌素已经产生耐药性。     

富平奶山羊临床型乳房炎病原菌的分离鉴定

为探明奶山羊感染乳房炎病原菌的情况,为其防治提供参考,对富平县3个不同乡镇的79头患病奶山羊和118份奶样进行分离鉴定。结果表明:样品中共检测出革兰氏阴性杆菌、革兰氏阳性杆菌、革兰氏阳性球菌和真菌4类病原菌,分离出7种、126个菌株。其中,大肠杆菌36株,占28.5%;金黄色葡萄球菌28株,占22.2%;绿脓杆菌23株,占18.3%;链球菌21株,占16.7%;变形杆菌8株,占6.3%;蜡样芽孢杆菌6株,占4.8%;酵母菌4株,占3.2%。结论:大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、链球菌是富平县奶山羊乳房炎的主要致病菌。     

浦东地区部分猪场猪链球菌2型的分离鉴定及耐药性分析

2014年03月至08月期间,对来自浦东地区患关节炎的150份病猪和死猪内脏器官及关节液进行细菌分离,对分离细菌进行革兰氏染色、PCR鉴定、药敏实验和多重PCR检测链球菌毒力因子分布(荚膜多糖cps、溶菌酶释放蛋白基因mrp、胞外因子ef、溶血素sly、毒力相关基因orf2、谷氨酸脱氢酶基因gdh、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因gapdh),并对链球菌2型cps基因序列进行进化树分析。结果,从分离到的120株细菌中检测到21株链球菌,分离率为17.5%,2型链球菌分离率为11.67%;链球菌的毒力型呈-/+cps2J-/+mrp-ef-sly-gdh-/+gadph-/+orf2;分离株呈多重耐药性,耐药性为:大环内酯类硝基呋喃类、氯霉素类、多肽类、氨基糖苷类、四环素类青霉素类、头孢菌素类、亏诺酮类林可胺类、磺胺类;cps基因与GenBank上已公布的链球菌2型荚膜多糖基因的核苷酸同源性达94%~99%。     

天津某牧场奶牛乳房炎奶样与环境中细菌的分离与鉴定

为了解天津某牧场奶牛乳房炎奶样及环境中细菌的种类和流行性,采用美国加州乳房炎(CMT)方法筛选6头乳房炎患病奶牛,通过传统培养方法对乳房炎奶样、患病牛畜舍及奶厅样品进行细菌分离与鉴定。结果显示,乳房炎奶样及环境样品中共分离鉴定出217株菌株,主要优势菌为芽孢杆菌属(Bacillus)(146/217株,67.28%),乳房炎奶样中占比25%(3/12),畜舍样品中占比为47.87%(45/94),奶厅样品中占比为88.29%(98/111)。乳房炎奶样中主要鉴定出4株葡萄球菌属(Staphylococcus);畜舍样品中共鉴定出10株Staphylococcus和8株肠杆菌属(Enterobacter),新垫料与饲料中各鉴定出1株克雷伯氏菌属(Klebsiella);在奶厅样品前药浴液与后药浴杯样品中分离鉴定出3株BMV7。综上,本研究探究了天津某牧场中主要流行的微生物种类,提出该牧场卫生管理防控薄弱环节,为牧场奶牛乳房炎防控与卫生管理提出建议与意见,为进一步研究乳房炎致病菌溯源奠定基础。     

奶牛乳房炎病原分离鉴定与分析

本试验对吉林地区两家大型乳业集团奶牛乳房炎病牛乳样进行分离鉴定,8份乳样共分离到62株菌,其中含51株4种主要病原菌。4种病原菌不同临床型的比例是：金黄色葡萄球菌占36.36%、大肠杆菌占9.09%、无乳链球菌占27.27%、乳房链球菌占9.09%;隐性型中金黄葡萄球菌占38.89%、大肠杆菌占27.28%、无乳链球菌占11.11%、乳房链球菌占11.11%。     

新疆乌鲁木齐市宠物源葡萄球菌耐药性及其相关耐药基因的检测

为了解新疆乌鲁木齐市宠物源葡萄球菌对临床常用抗菌药物的耐药情况及携带耐药基因的情况,采用琼脂稀释法对乌鲁木齐市某宠物医院分离鉴定的154株宠物源葡萄球菌进行临床常用10种抗菌药物耐药性检测,并用PCR方法检测葡萄球菌9种耐药基因:喹诺酮类(norA)、大环内酯-林可胺类(ermB)、四环素类(tetA、tetM)、β-内酰胺类(mecA、femA)和氟苯尼考类(cfr、fexA和fexB)。耐药性检查结果表明葡萄球菌对苯唑西林、四环素、左氧氟沙星和氟苯尼考的耐药率在50%以上,宠物源葡萄球菌多重耐药集中在4~5类,且耐药谱型多样化。基因检测结果显示fexA(31.2%)基因的检出率最高,其次是ermB(26.7%),未检出cfr、fexB和tetA基因。新疆乌鲁木齐市宠物源葡萄球菌普遍存在耐药和多重耐药情况,其中氟苯尼考耐药基因fexA检出率最高,揭示宠物源葡萄球菌耐药情况严重,应根据药敏试验及基因检测结果,合理选用抗菌药物,并加强对耐药菌的监测。     

奶牛乳房炎无乳链球菌培养基的筛选及影响因素研究

[目的]筛选制备奶牛乳房炎疫苗生产菌株的无乳链球菌最佳培养基。[方法]将培养好的无乳链球菌接种于舍不同浓度葡萄糖的改良肉汤、优化培养基和THB培养基中,培养过程中补加NaOH调节pH值,观察不同处理对无乳链球菌生长情况的影响。[结果]无乳链球菌在优化培养基中生长良好,其次为THB培养基,改良肉汤不适合无乳链球菌生长。无乳链球菌在含10g／L葡萄糖的优化培养基中生长最好。在培养过程中的对数生长期内补加NaOH,调节pH值,能明显提高细菌的产量,并能延长其对数生长期。[结论]该研究为奶牛乳房炎多联苗的深入研究奠定了基础。     

The identification of MacSe in Streptococcus equi ssp. equi

Streptococcus equi subsp. equi (S. equi ssp. equi) causes equine strangles, a highly contagious and widespread purulent lymphadenitis of the head and neck. We have identified MacSe, a novel protein of S. equi, by screening a phage library of 3–8 kb random DNA fragments of S. equi CF32. MacSe shares 62% and 67.5% amino acid homology with Mac5005 and Mac8345 of S. pyogenes respectively. Expression during infection was shown by strong reactivity of the protein with convalescent sera and mucosal wash IgA of ponies infected by commingling exposure. Release into the culture medium was detected during the log phase of growth. Dose dependent anti-phagocytic activity for equine neutrophils involved interaction of MacSe with C₃ and neutrophils.     

猪链球菌及其血清型的PCR检测

从广东省部分地区猪场采集疑似猪链球菌病病猪的扁桃体棉拭病料202份,用PCR方法检测棉拭样本培养物中猪链球菌（Streptococcussuis）及其主要致病血清型（1、2、7和9型）．检出阳性样品147份,检出率为72．8％．其中检出S．suis血清2型21份,检出率为12．9％;检出血清9型6份,检出率为3．0％;未检出血清7型和1型．此外,不同地区和不同发育阶段的猪,S．suis检出率和各血清型检出情况也存在较大差异．从而证实广东地区猪群中广泛存在S．suis呈地域性流行,并且是多种血清型共存．     

内蒙古无乳链球菌耐药性及四环素耐药基因检测

为了解内蒙古地区隐性乳房炎无乳链球菌分离株耐药性及耐药基因,采集内蒙古不同地区的规模化养殖场隐性乳房炎乳样,采用Kirby-Bauer(K-B)纸片扩散法测试分离株对16种抗菌药物的敏感性,PCR方法检测其耐药基因。结果显示:无乳链球菌对大部分抗生素较敏感。对其有较强抑菌作用的药物为:青霉素G、头孢噻肟、头孢唑啉、阿莫西林、红霉素、环丙沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、林可霉素、呋喃妥因、万古霉素。其敏感性达到90%~100%。该菌株对四环素有较强的耐药性,耐药率达77.27%。PCR扩增四环素耐药基因tetM、tetO、tetK、tetL,结果显示22株无乳链球菌均含有tetM基因,其基因的检出率为100%。其中7株同时含有tetK基因,tetO、tetL基因未检出。     

猪链球菌国内分离株毒力因子的分布特征

为了研究国内致病性猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的毒力因子分布特征,本试验选取猪链球菌7种主要毒力因子—谷氨酸脱氢酶(gdh)、荚膜多糖(cps2J)、溶菌酶释放蛋白(mrp)、胞外因子(epf)、溶血素(sly)、纤连蛋白/血纤蛋白原结合蛋白(fpbs)和毒力相关序列orf2,设计并合成7对引物,用PCR方法进行检测。结果显示:25株猪链球菌2型(SS2)国内分离株,96%(24/25)表现为cps /gdh /epf /mrp /sly /fbps /orf2 ,仅1株表现为cps /gdh /epf-/mrp /sly /fbps /orf2 ;1株猪链球菌1型(SS1),表现为cps-/gdh /epf-/mrp-/sly /fbps-/orf2 ;1株猪链球菌7型(SS7)国内分离株,表现为cps-/gdh /epf-/mrp-/sly /fbps-/orf2 ;2株猪链球菌9型(SS9)国内分离株,均表现为cps-/gdh /epf-/mrp-/sly-/fbps-/orf2 ,可见国内SS2的毒力基因分布特征与欧美等国家明显不同,提示我国目前SS2的主要流行菌株是同时具有7种毒力因子的高致病菌株。