成年鸽子禽流感H5亚型疫苗筛选试验报告

采用禽流感H5N1疫苗和H5N2疫苗分别对6月龄以上成年肉鸽和信鸽进行免疫试验,于免疫后0～72h观察免疫鸽群有无不良组织反应产生,并用血凝抑制试验作为评估H5N1疫苗和H5N2疫苗反应的标准,来评估两种疫苗对鸽子的免疫效力。试验结果表明,成年信鸽和成年肉鸽对H5N1疫苗和H5N2疫苗均无不良组织反应产生;成年信鸽和成年肉鸽免疫H5N1疫苗和H5N2疫苗后产生HI抗体效价比较,H5N1疫苗较H5N2疫苗免疫抗体效价高;信鸽试验组和肉鸽试验组免疫同种疫苗组间差异不显著。     

H5亚型禽流感疫苗对蛋鸭免疫效果影响的研究

用H5亚型禽流感疫苗对58个养鸭场的150~450日龄产蛋鸭进行2次免疫后,21~180 d随机抽取有效血清674份进行HI抗体水平监测,分析其免疫效价。结果表明：处于产蛋高峰期的300日龄组蛋鸭免疫效果最佳,抗体有效率达到100%,抗体效价达到8.7 log2,除与250日龄组无显著差异（P>0.05）外,与其他各组比较差异显著（P<0.05）;蛋鸭在免疫后21~120 d内均能维持较高的HI抗体效价,并在61~90 d进入高峰期,此期抗体合格率达97.9%,抗体效价为7.7 log2,与免疫后121~150 d及151~180 d比较差异极显著（P<0.01）;同时,经与鸡的免疫效果相比,蛋鸭免疫后所产生的HI抗体效价显著高于鸡（P<0.05）。     

H5亚型禽流感疫苗免疫效果的评估与分析

检测648份不同禽群血样的H5亚型禽流感免疫抗体水平,平均合格率为68.63%。其中规模鸡群血样100份,免疫抗体合格率为77.10%;规模鸭群血样100份,合格率为79.10%,鹅、番鸭群血样30份,合格率为53.33%;农户散养鸡血样104份,合格率为75.96%;散养鸭血样6份,合格率为50.10%,散养鹅、番鸭血样27份,合格率为21.10%;市场鸡血样202份,合格率为58.91%;市场鸭血样79份,合格率为70.42%。     

H_5亚型禽流感病毒灭活疫苗免疫效果评价试验

选取我省中标的两种类型6个批次的H5亚型禽流感病毒灭活疫苗,双盲条件下,在黄羽肉鸡中进行免疫效果比对试验。于14、35天龄进行两次免疫,在21、28、35、42、49、56、63、77、91、105和113 d进行抗体检测,结果全期平均免疫抗体水平超过6l og2,各批次疫苗间的免疫抗体水平略有差异。本次试验初步明确了H5亚型禽流感灭活疫苗接种后的抗体消长规律,为疫苗选择和免疫程序的制定提供依据。     

新型H5亚型禽流感疫苗研制成功

在农业部和科技部共同主持及国家“973”、“863”和“攻关”项目资助下,通过30多位科研人员不懈的努力,具有国际先进水平的高效、安全新型H5N1亚型禽流感灭活疫苗和重组禽痘病毒活载体疫苗研制成功。新型H5亚型禽流感灭活疫苗系由高度致弱的H5N1亚型疫苗种子株制备,该疫苗种     

H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5对高致病力禽流感病毒攻击的免疫保护

对H5亚型禽流感DNA疫苗质粒pCAGGoptiHA5的免疫效果进行了研究。pCAGGoptiHA5分别以100和10μg剂量一次或两次免疫3周龄SPF鸡，首次免疫后4周以同样剂量和途径进行第二次免疫，一次免疫后4周、两次免疫后2周分别用100LD50的HPAIV A／Goose／GuangDong／1／96（H5N1）鼻腔途径进行攻击，观察发病与死亡情况，分别于攻毒后第3、5、7天采集喉头及泄殖腔拭子进行病毒分离、滴定检测排毒情况，同时检测免疫后、攻毒前及攻毒后血清HI抗体、NT抗体以及AGP抗体的动态变化。结果，100μg pCAGGoptiHA5一次免疫、100μg pCAGGoptiHA5两次免疫以及10μg pCAGGoptiHA5两次免疫均可对免疫鸡形成100％完全保护（不发病、不致死、不排毒），10μg剂量pCAGGoptiHA5一次免疫可对免疫鸡形成100％的保护（不发病、不致死），结果表明，pCAGGoptiHA5作为疫苗效果良好、成本低廉，有望成为预防H5亚型高致病力禽流感的高效、安全新型基因工程疫苗。     

H5N1亚型禽流感疫苗对供港鸡免疫效果评价

针对供港活鸡饲养周期长(85日龄～105日龄),禽流感抗体滴度要求高(21/28检测样品抗体滴度需≥4 log2)的特点,在原有H5N2疫苗对供港活禽免疫效果不理想的情况下,对哈尔滨兽医研究所研制的H5N1亚型禽流感疫苗进行了免疫效果评估.结果显示,H5N1疫苗免疫效果明显高于原有的H5N2疫苗,初步推荐该禽流感灭活疫苗对供港鸡场的免疫程序为:首免7日龄～10日龄,0.3 mL/只,皮下注射;二免45日龄,0.5 mL/只,肌肉注射.     

沈阳市H5亚型高致病性禽流感免疫效果分析

采用连续采样与实验室血清学监测数据,对沈阳市2006-2009年际间和季度间的H5亚型高致病性禽流感的免疫效果进行了对比分析。研究结果表明,H5亚型禽流感免疫效果受多种因素的影响,认为要充分结合免疫地的实际情况,因地制宜采取切实有效的措施。同时提出加强H5亚型禽流感疫苗免疫效果的几点建议。     

禽流感（H5N1亚型、Re-1株）疫苗免疫鹅、鸭的效果观察

过去使用H5N2亚型禽流感灭活疫苗对水禽(鹅、鸭)进行免疫,免疫效果并不理想.近几年改用禽流感灭活疫苗(H5N1亚型、Re-1株)免疫水禽,免疫效果较为理想.通过免疫效果观察,制订出适合于本地的水禽禽流感免疫程序,对基层防疫人员和养殖户开展科学免疫具有参考价值.     

禽流感H5亚型灭活疫苗对肉用家禽免疫效果的研究

用H5N2亚型禽流感灭活疫苗,分别免疫肉用鸡、鸭、鹅,免疫后采血测定其HI抗体,探讨该疫苗对肉禽的免疫效果。结果,鸡、鸭、鹅免疫后均能产生一定水平的HI抗体,但只经一次免疫时HI抗体处于较低水平,抗体合格率分别为3%、13%、10%。而经二次免疫则HI抗体水平较高,抗体合格率分别为80%、100%、89%。为确保肉用家禽免疫效果,使用H5N2亚型禽流感灭活疫苗时,建议进行二次免疫。     

H7亚型禽流感病毒灭活疫苗的研制及其免疫效果研究

以H7N3亚型禽流感病毒接种鸡胚,收取鸡胚液为抗原研制禽流感病毒灭活疫苗,并对制苗抗原以及疫苗的物理性状、安全性、免疫效力、免疫剂量和保护期等进行了试验,结果表明,该灭活疫苗安全性好,对28日龄鸡的最佳免疫剂量为0.5 mL/只,抗体临界保护值为5log2,免疫后6周HI效价达到高峰值9.4log2,以后逐渐下降,第20周抗体仍能维持较高水平。此外,交叉免疫保护试验表明,同一亚型之间具有良好的免疫保护作用,而亚型间缺乏坚强的交叉保护作用。     

H5亚型禽流感疫苗变异候选株的构建

本文就2008年在江苏某鸡场分离到的一株发生抗原变异的H5N1亚型禽流感病毒A/chicken/Huadong/4/2008(wt-DT株)开展如下研究:利用反向遗传技术,删除wt-DT株病毒血凝素(HA)基因多碱性氨基酸序列,使之成为低致病特征,再与wt-DT株的神经氨酸酶(NA)基因组合,结合鸡胚高产病毒PR8株的6个内部片段骨架,构建针对此种变异H5亚型禽流感的疫苗株,结果成功拯救出重组病毒rH5N1/PR8.病毒在鸡胚和MDCK细胞上均具有较好的繁殖能力,相对于wt-DT株,rH5N1/PR8在MDCK细胞上的繁殖能力明显提高.rH5N1/PR8对SPF鸡和鸡胚无致病性,在鸡体内的免疫保护效果良好,符合疫苗候选株的标准.     

鸡新城疫、禽流感二联灭活疫苗与同类产品的免疫效力比较

将鸡新城疫、禽流感（H9亚型,SY株）二联灭活疫苗与市售同类对照苗分不同剂量皮下注射接种30日龄SPF鸡,免疫后定期采血,分离血清,通过检测血清中ND和AI的HI抗体水平比较各组鸡抗体产生期、抗体高峰及免疫持续期,并进行不同血凝抗原检测HI抗体结果的对比。试验鸡血清样品检测结果显示,免疫鸡抗体产生期为免后2周内,免后8周和5周ND和AI的HI抗体滴度分别达到峰值,抗体至少可持续28周以上,两种灭活苗之间免疫效果基本相当。     

鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗的安全性和免疫效力试验

将鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗分别以肌肉注射和皮下注射的方式单剂量、单剂量重复、超剂量分别接种28日龄SPF鸡和6月龄产蛋鸡进行安全性试验.同时,将不同剂量疫苗分别接种30日龄SPF鸡,接种后定期采血,分离血清测定HI抗体水平,并于免疫后1、2周从每组试验鸡中抽取10只攻击AIV SY株病毒.结果显示,疫苗以不同剂量接种试验鸡后未见任何不良反应,对产蛋鸡的生产性能基本无影响;试验鸡在免疫后2周即可产生较高水平的HI抗体,其中ND HI抗体几何平均值不低于1∶128,AI HI抗体几何平均值不低于1∶74,攻击AIV SY株病毒后病毒分离率为0,在免疫后20周其HI抗体仍在保护水平以上.表明鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗安全性良好,免疫效果确实.     

基于马赛克HA序列的H9亚型禽流感灭活疫苗的免疫效力分析

H9亚型禽流感在我国家禽中广泛流行,给养禽业造成巨大经济损失的同时,也严重威胁着公共卫生安全。H9亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）具有高度遗传变异性,导致流行株和疫苗株之间抗原匹配性差,从而影响疫苗的临床保护效果,急需研发一种高效、具有交叉保护性的通用型H9亚型禽流感疫苗。马赛克疫苗是针对遗传多样性病原体设计,通过整合所有抗原序列获得一条抗原表位覆盖最广泛的嵌合蛋白,并制备疫苗。本研究参考mosaic疫苗设计原则,设计、优化并合成了一条H9亚型禽流感病毒的mosaic血凝素（hemagglutinin,HA）基因序列,采用反向遗传操作技术,以H1N1亚型流感病毒PR8株为骨架,以mosaic H9HA序列替换PR8株的HA片段,获得重组病毒rPR8-HAm/H9。将其制备为灭活疫苗并免疫SPF雏鸡,监测抗体水平、攻毒保护效果,评价其交叉保护效果。结果表明,重组病毒rPR8-HAm/H9灭活疫苗免疫SPF雏鸡,可诱导机体产生较高水平的HI抗体和中和抗体,可显著抑制攻毒后病毒的脱落,对H9N2 AIV JM0305株的攻毒保护率为80%。rPR8-HAm/H9灭活疫苗可以对异源H9N2 AIV JM0305株产生较好的交叉攻毒保护,为研发基于马赛克技术的禽流感通用疫苗提供了前期基础。     

不同NA亚型H5禽流感疫苗在鸭群的免疫效力及母源抗体对免疫效力的影响

研究以H5N2和H5N1两种油乳灭活疫苗免疫鸭群对高致病性禽流感H5N1 AIV的攻毒保护效力进行了比较。结果表明，在同等免疫剂量下，从发病率、死亡率和泄殖腔排毒规律三项指标综合评价来看，H5N1疫苗免疫组对高致病性禽流感H5N1流行株攻毒的保护效率较H5N2免疫组理想，故针对高致病性禽流感H5N1流行的情况，宜采用H5N1禽流感疫苗。水禽禽流感母源抗体对灭活苗免疫具有一定的干扰作用。     

H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株灭活疫苗的研制

利用H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽H7N9亚型流感的防控提供科学数据及手段。将AIV-rGD76株用灭菌生理盐水作104倍稀释后,接种11日龄非免疫鸡胚,37℃孵育72h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加矿物油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株)均为油包水型,黏度均在50cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000r/min离心15min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.3mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中rGD76株的HI抗体平均效价可达8log2以上,使用H7N9亚型高致病性禽流感病毒GD16株滴鼻接种0.2mL/只(含100LD50)对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。在实验室条件下研制出重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株),疫苗的各项指标均符合标准。     

表达H5亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒在水禽的免疫效力

利用表达 H5亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒 ( r FPV- HA)和油乳剂全病毒灭活疫苗分别接种商品鹅 ,评价疫苗在水禽的免疫保护作用。结果发现 ,免疫后 2 1 d,r FPV- HA免疫组 HI抗体检测为阴性 ,灭活疫苗免疫组HI抗体阳性率为 70 % ;用 H5亚型禽流感病毒攻击后 ,与阴性对照组相比 ,r FPV - HA免疫组鹅的口腔和泄殖腔排毒率降低 ,病理变化减轻 ,感染鹅易康复 ,保护率为 80 % ,总体保护效力达到灭活疫苗水平。结果表明 r FPV - HA免疫家鹅可诱导良好保护 ,显示出了良好的应用前景