奶牛环境性乳房炎临床分离株免疫原性分析

试验选择2株大肠杆菌(A1、A2)及2株克雷伯菌(K1、K2 )对其菌体蛋白图谱和全菌抗原转印图谱进行了研究,用建立的全菌包被ELISA试验检测兔血清中抗体水平和交叉保护性,筛选到2株具有典型抗原谱、保护性抗原全面的菌株.     

应用生物信息学方法筛选猪肺炎支原体保护性抗原

猪支原体肺炎是一种严重危害养猪业的传染病,目前尚无有效疫苗预防和阻止该病的传播.筛选具有高保护性和高免疫反应性的候选抗原是制备有高免疫保护力的疫苗的关键.本文以猪肺炎支原体232菌株为基础,用多种在线生物信息学软件预测蛋白的亚细胞定位,将筛选得到的外膜蛋白和分泌蛋白通过BLAST序列比对进一步筛选出高保守型的蛋白作为疫苗候选抗原分子.最终在232菌株编码的691个蛋白中得到62个候选蛋白抗原.为下一步通过试验验证进一步确定其是否为保护性抗原奠定了基础,也为研究猪肺炎支原体的致病过程、致病机理和免疫反应机制提供了大量的目标分子.     

产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌表达产物的免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）经动物试验证实没有毒性。从ＩＰＴＧ诱导后的工程菌中提取包涵体,再辅以氢氧化铝胶制成抗原,免疫小鼠３０ｄ后,用产气荚膜梭菌强毒株培养上清及培养菌体攻击,结果免疫鼠能抵抗至少２ＬＤ１００的攻击,证明Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）工程菌株表达产物具有良好的免疫原性。     

产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌表达产物免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）经动物试验证实没有毒性。从ＩＰＴＧ诱导后的工程菌中提取包涵体,再辅以氢氧化铝胶制成抗原,免疫小鼠３０ｄ后,用产气荚膜梭菌强毒株培养物上清及培养菌体攻击,结果免疫鼠能抵抗至少２ＬＤ１００的攻击,证明Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）工程菌株表达产物具有良好的免疫原性。     

产气荚膜梭菌β2-β1毒素融合基因重组菌株免疫原性研究

产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）属腐生性厌氧芽孢致病菌,是引起动物出血性、坏死性肠炎与肠毒血症以及人类食物中毒和创伤性、气性坏疽的主要病原菌之一,主要引起动物猝死症和肠毒血症,其致病因子主要是菌体产生的外毒素,β1和β2毒素即为其两种重要的毒力因子。试验在将含β2-β1融合基因的BL21（DE3）（pXETB281）菌株进行优化表达的基础上进一步制备抗原,免疫ICR小白鼠,用C型产气荚膜梭菌强毒株C59—44攻毒,观察小鼠的免疫保护情况。同时,还设计了不同处理工艺基因工程菌株牛血清毒素中和试验,以判断免疫动物产生抗血清中和C型产气荚膜梭菌强毒株C59—44的能力,为进一步研制高效、安全的产气荚膜梭菌保护性抗原基因工程疫苗提供依据。     

狐阴道加德纳氏菌菌株抗原性及免疫原性研究

对分离的 1 45株阴道加德纳氏菌进行抗原性测定 ,筛选出了抗原性优良的血清型代表株。通过免疫琼脂扩散试验证明了三个血清型间存在一条共同的抗原沉淀线。免疫原性测定表明 ,三个血清型代表株能产生特异的保护性抗体     

金黄色葡萄球菌毒力及其免疫原性评价方法研究

为建立评价金黄色葡萄球菌毒力和用于筛选免疫保护性菌株的技术方法,选取小鼠腹腔攻毒方法确定的强毒力和弱毒力菌株各3株,经小鼠后腿肌肉注射不同剂量,比较20 d的临床病变差异,确定小鼠后腿内侧肌肉注射0.25 mL、OD600=0.6的剂量可以评价不同金黄色葡萄球菌的毒力。利用该方法比较了6株强毒力菌株的毒力差异,并用于2株免疫保护性菌株的筛选。结果证明建立的金黄色葡萄球菌毒力评价方法可以精确、客观比较不同菌株毒力差异,并可用于免疫保护性菌株的筛选。     

牛源多杀性巴氏杆菌新型交叉保护性抗原的筛选

为了筛选多杀性巴氏杆菌潜在的交叉保护性抗原,首先对牛源多杀性巴氏杆菌PmCQ2株(A型)、PmCQ6株(A型)、PmB株(B型)、PmF株(F型)全基因组序列进行分泌蛋白及膜蛋白预测,并使用Signal、TMMHM在线分析筛选到48个候选共有抗原基因;然后分别克隆于pET-28α中构建原核重组表达载体,转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中诱导表达,SDS-PAGE检测获得31个重组表达蛋白。间接ELISA检测重组蛋白对3种不同血清型牛多杀性巴氏杆菌多抗的反应原性,发现13个重组蛋白具有较强的反应原性。最后选择5个重组蛋白免疫小鼠后,分别采用10LD50PmCQ2、PmB和PmF进行攻毒保护性试验,结果显示:r-PmCQ2_1g0376免疫后的小鼠对PmCQ2和PmB的攻毒保护率为50%和30%,对PmF则没有保护性;r-PmCQ2_4g0132免疫后对PmCQ2、PmB和PmF株的攻毒保护率分别为80%,20%和10%;r-PmCQ2_1g0311免疫后的小鼠对PmCQ2的攻毒保护率为30%,对PmB和PmF株均无保护性。本试验筛选出2个交叉保护性抗原,可以不同程度保护同源或异源菌株的攻击,为多杀性巴氏杆菌新型疫苗候选蛋白的筛选奠定了基础。     

降解赤霉烯酮芽孢杆菌的筛选、鉴定及性质研究

为了获得一株饲用的高效降解赤霉烯酮(ZEN)的芽孢杆菌菌株,试验通过平板扩散法和酶联免疫法进行筛选,并对降解率较高的菌株进行种属鉴定、性质和产酶情况研究。结果表明:通过筛选共得到7株功能菌,其中菌株Y-1d的降解率最高,经菌落菌体形态、16S rDNA序列分析和生理生化鉴定确定该菌株为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis);该菌株在p H值为4.5~6.5、温度为27~47℃的范围内生长良好,对胆盐有一定的耐受性,能够产生淀粉酶、纤维素酶、蛋白酶、脂肪酶。说明试验获得一株性质优良的可用于饲用的赤霉烯酮降解菌株。     

奶牛源绿脓杆菌内毒素蛋白的提取及免疫原性和保护性研究

为了评估绿脓杆菌内毒素蛋白的免疫原性和保护性,试验采用最小致死量(MLD)测定法从奶牛源绿脓杆菌菌株中筛选高毒力菌株,用可使蛋白质与脂多糖分离的合成培养基进行发酵、提取、纯化制备内毒素蛋白,采用考马斯亮蓝法测定内毒素蛋白含量,间接ELISA法和免疫攻毒保护试验对制备的内毒素蛋白进行免疫原性和保护性研究。结果表明:筛选得到1株高毒力绿脓杆菌CPA-009菌株,其MLD为2.0×10~7 cfu/mL;用CPA-009菌株发酵制备出5批次内毒素蛋白,平均含量为44.62%,各批次间差异不显著(P0.05);免疫组小鼠体内抗体效价随着免疫进程持续升高,最高达到1∶12 500;内毒素蛋白对CPA-009菌株的保护率为100%,对其他3种血清型绿脓杆菌菌株的保护率均在80.0%以上。说明由高毒力绿脓杆菌CPA-009菌株制备的内毒素蛋白具有良好的免疫原性和高保护性。