孝顺竹种胚愈伤组织悬浮培养条件优化

本研究利用孝顺竹种胚诱导出的淡黄色胚性愈伤组织为材料,对影响细胞悬浮培养的摇床转速、培养液2,4-D浓度、继代天数、接种细胞浓度(W/V)等因素进行了研究.结果表明,悬浮培养时的摇床转速以120 r/min时培养效果较好,转速低于100 r/min时,愈伤组织容易结团,分散性差;适宜的2,4-D浓度为4～6 mg/L,低于4 mg/L时愈伤组织易褐变;接种后培养7 d是最佳的转接时期,至多不能超过10 d;接种细胞密度以4.0%最为合适,可保持较高的增殖速度,同时培养产物较多.在50 mL培养液(NB+500 mg/L Pro-line+500 mg/L Glutamine+300 mg/L Hydrolyzed casein+30 mg/L Sucrose+4～6 mg/L 2,4-D)中接种4.0%的愈伤组织,于120 r/min的转速下经过7 d培养,可增殖一倍以上,以后每7 d继代转接一次,培养大约一个月,便可以建立生长迅速、分散性好、均一的悬浮细胞系.     

茶树愈伤组织继代培养与体细胞胚发生

利用添加不同种类,浓度的１／２ＭＳ修改培养基、Ｂ５培养基交叉培养茶树（ＣａｍｅｌｌｉａｓｉｎｅｎｓｉｓＬ．）愈伤组织,有利于延长愈伤组织继代培养时间,并维持胚性愈伤组织高的体细胞胚分化能力,不同品种的胚性愈伤组织体细胞胚分化率存在明显差异,试管苗茎胚性愈伤组织分化率高于大田栽培的成龄茶树叶柄胚性愈伤组织。胚性愈伤组织随着继代培养时间的延长,体细胞胚分化率随之有所下降,胚性愈伤组织在继代培养过程中,     

苏玛栎胚性愈伤组织诱导及体胚发生

取苏玛栎成熟大树基部萌条进行离体培养,利用无菌苗茎段成功诱导出胚性愈伤组织,并进一步诱导出子叶期的体细胞胚胎。试验结果表明:苏玛栎茎段置于添加2 mg/L 2,4-D和0.2 mg/L KT的MS培养基上,黑暗培养30 d后,诱导出愈伤组织;将胚性愈伤组织置于添加3 mg/L BA和0.5 mg/L NAA的MS培养基上,黑暗培养40 d,有利于胚性愈伤的增殖;转入添加0.5 mg/L ZT和0.1 mg/L NAA的MS培养基中,黑暗培养60 d后,原胚团经历球形胚、心形胚、鱼雷形胚,发育至子叶胚阶段,但诱导率最高仅为10%。本研究为苏玛栎种质资源保存、无性繁殖和遗传改良提供了一定的科学依据。     

玉米胚性愈伤组织继代及侵染条件的优化

设计了含有不同2,4-D浓度的6种培养基用于玉米胚性愈伤组织的继代培养,对影响转化效率的侵染条件进行了研究,根据转化后所得的抗性愈伤组织数目及其分化率的评估结果表明,选用N6为基本培养基,添加1mg/L 2,4-D时,胚性愈伤组织继代长势较好,且在真空渗透的情况下,侵染5min,抗性愈伤组织数最多。经初步的PCR鉴定,利用优化的玉米遗传转化体系得到了转基因玉米植株。     

陆地棉愈伤组织诱导及体细胞胚发生的生化机制研究

对陆地棉愈伤组织诱导及体细胞胚发生过程中的主要生化物质（可溶性蛋白含量、可溶性糖含量、SOD活性和IAA氧化酶活性）的测定表明,各个时期的可溶性蛋白含量、SOD活性是不同的,在愈伤组织形成初期较低,随着愈伤组织的生长及胚状体的形成,可溶性蛋白含量、SOD活性逐渐上升,在120d时达最大值;而可溶性糖含量在60d时有一个高峰值,在120d时达到最低值;IAA氧化酶活性在60d、120d时酶活较高,90d的酶活较低。     

悬浮培养条件下体细胞胚发育的同步化控制

利用液体悬浮培养体系进行体细胞胚的大规模生产,被认为是21世纪最具发展潜力的生物技术之一.但是,大多数体胚发生系统都存在发生频率低、同步化程度不高等问题,这在很大程度上限制了体胚发生和人工种子技术在生产上的应用.本文论述了体胚发生不同步的原因,重点介绍了悬浮细胞培养过程中同步化控制的方法和检测手段,提出了利用液体悬浮培养体系进行同步化控制的研究方向.     

大豆品种合丰25体细胞胚发生条件的优化

为优化大豆体细胞胚再生植株的条件,提高大豆遗传转化的效率,本研究选用大豆品种合丰25为试验材料,针对影响体细胞胚诱导的3个关键因素pH值、2,4-D浓度及光照条件进行体细胞胚发生频率的研究。结果表明:pH值、2,4-D浓度、光照条件这3种因素的不同处理对体细胞胚的诱导影响显著,其幼胚的发生频率最高为70.70%、最低为3.70%。当pH值为7.0、2,4-D浓度为20mg/L,黑暗培养最有利于合丰25体细胞胚的诱导,其胚的发生频率为70.70%,明显高于其他处理。     

毛竹愈伤组织的诱导及培养条件优化

以当年生毛竹种子为材料,通过分析比较不同条件下愈伤组织的成活率,为毛竹快速繁殖提供理论依据。结果表明：诱导的培养基为MS+2,4-D 4 mg/L+ZT 0.1 mg/L,pH=8时愈伤组织诱导率为(34.88±2.81)%。用培养的愈伤组织进一步培养,得出适合毛竹愈伤组织继代培养条件为2,4-D 2 mg/L。进一步培养发现褐化是毛竹愈伤组织继代培养的主要障碍,本研究发现了红光培养和去除硝酸盐的培养基的条件下能将毛竹愈伤组织的褐化死亡率降至1.2%,同时促进愈伤组织的增殖生长和进一步分化。总之,本研究探索了毛竹愈伤组织的诱导和继代培养的条件,为毛竹的快速繁殖和基因工程育种提供了基础。     

楸树胚性愈伤组织与非胚性愈伤组织的生理生化差异

在植物体胚发生过程中愈伤组织里存在着复杂的生化反应,不同的愈伤组织有着不同的生理生化特性。用MS培养基对楸树幼嫩种子进行培养,诱导产生出三种类型的胚性愈伤组织和一种非胚性愈伤组织,以此作为实验材料。对可溶性蛋白、可溶性糖和游离脯氨酸的含量进行测定分析,研究楸树胚状体形成过程中三种类型的胚性愈伤组织之间以及胚性愈伤组织和非胚性愈伤组织之间的生理生化差异。结果表明,可溶性蛋白和游离脯氨酸在楸树胚性愈伤组织中的含量都远远高于其非胚性愈伤组织;而楸树胚性愈伤组织的可溶性糖含量均显著低于其非胚性愈伤组织。并且可溶性蛋白、可溶性糖和游离脯氨酸的含量在楸树不同类型的胚性愈伤组织之间存在差异。     

TDZ对橡胶树花药愈伤组织诱导和体细胞胚发生的影响

为了提高橡胶树优良品种的愈伤组织诱导和体细胞胚发生的频率,促进其花药植株再生体系的优化,以橡胶树品种‘云研73-477’、‘热垦525’和‘云研77-2’的花药为外植体,研究不同浓度的TDZ对愈伤组织诱导和细胞胚胎发生能力的影响。结果表明,在愈伤组织诱导实验中,MS+TDZ 0.2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L+2,4-D 1.5 mg/L+NAA 0.5 mg/L+椰子水50 mL/L+蔗糖70 g/L效果最好,诱导率均达到最大,分别为98%、98.67%、28.6%,当TDZ浓度逐步升高时,其诱导率又有所下降。在体细胞胚诱导实验中,愈伤组织诱导阶段加入TDZ对体细胞胚的发生有抑制作用;将愈伤组织转移到不含TDZ的培养基中继代增殖后,体细胞胚的诱导率随继代次数的增加呈上升趋势;愈伤诱导阶段使用的TDZ浓度越低越利于体细胞胚的分化;在体胚诱导阶段以TDZ代替KT后,体细胞胚诱导率较低,且分化出的体胚为畸形胚。这表明TDZ虽然有利于愈伤组织的产生和生长,但不利于体细胞胚的发生。     

玉米自交系幼胚愈伤组织诱导的条件优化

本研究以铁7922、H99、丹598和丹988四个玉米自交系的幼胚为材料,对影响愈伤组织诱导和继代的几个重要因素进行研究。结果表明,2mg/L的2,4-D有利于胚性愈伤组织的形成,基因型、培养基、胚龄和4℃冷存时间对其也有明显影响。此外,添加KT、Ca2+和AgNO3,H99和丹988的胚性愈伤率明显提高,而铁7922的胚性愈伤率则有所下降。此外,Ca2+的添加对丹598的胚性愈伤率没有明显影响。     

大蒜发芽叶培养体细胞胚发生

将大蒜发芽叶培养于ＭＳ（１／２ＮＨ４ＮＯ３＿＋２，４－Ｄ２ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ上，形成愈伤组织。愈伤组织继代后，转移到ＭＳ（ＫＮＯ３２５２５ｍｇ／Ｌ＋（ＮＨ４）２ＳＯ４１６５０ｍｇ／Ｌ，无ＮＨ４ＮＯ３）＋ＫＴ２ｍｇ／Ｌ＋６－ＢＡ４ｍｇ／Ｌ＋Ａｄｅｎｉｎｅ２ｍｇ／Ｌ＋ＩＡＡ０．０１ｍｇ／Ｌ培养基上，２５天后，形成体细胞胚并能再生植株。其中，胚状体发生的必要条件是ＮＯ３／ＮＨ＾＋４＞１，ＫＴ／     

粗皮桉胚性愈伤组织及体胚诱导

本研究以粗皮桉无菌苗下胚轴为外植体,通过对不同激素组合的优化,研究不同激素处理对粗皮桉体胚发生的影响,初步建立了愈伤组织诱导及体胚发生最适合的激素浓度与种类。结果表明,0.005 mg/L TDZ和0.1 mg/L NAA激素组合诱导愈伤率最高,外植体愈伤组织诱导率达到97.5%,且该激素组合可以使体胚直接发生。而对体胚诱导效果最好的是1.0 mg/L 6-BA和0.1 mg/L NAA,诱导率为45.0%。本研究为粗皮桉体胚诱导提供借鉴与参考。     

陇绿棉3号胚性愈伤组织的诱导及植株再生

 以陇绿棉3号为试验材料,针对从外植体培养到胚状体发生及分化成苗整个组织培养过程的不同阶段,研究探索绿色棉—陇绿棉3号的再生条件,获得再生植株,为拓宽彩色棉再生基因型和转基因研究奠定了基础。研究结果表明：陇绿棉3号外植体的最适培养条件为暗4 d/光2 d处理;愈伤组织诱导最佳激素组合为0.1 mg·L^-1 2,4-D+0.05～0.3 mg·L^-1 KT或0.1 mg·L^-1 2,4-D+0.1 mg·L^-1 KT+0.1 mg·L^-1 IAA的MSB培养基（MS培养基无机盐+B5培养基有机成分）;愈伤分化的最适条件为MSB中添加1.9 g·L^-1 KNO3和2.0 g·L^-1凝固剂gelrite;胚性愈伤增殖培养基为MSB（NH4NO3减半）中添加1.9 g·L^-1 KNO3并添加1.8 g·L^-1凝固剂gelrite、0.1 g·L^-1天冬酰胺和0.1 g·L^-1谷氨酰胺。在去除NH4NO3,添加0.1 mg·L^-1 KT和0.4 mg·L^-1 IBA的MSB培养基上,胚胎发生率和子叶胚萌发率均达到峰值,且子叶胚在1/2 MSB培养基上可成功分化成苗。     

红景天愈伤组织的诱导及细胞悬浮培养

红景天的细胞培养是充分利用该树种优良特性的生物工程基础.试验以红景天的茎为外植体,研究愈伤组织诱导和细胞悬浮培养的技术体系.结果表明愈伤组织诱导的最适培养基为MS 1.0mg/L6-BA 0.2mg/L NAA 0.1 mg/L2,4-D,在此培养基上诱导的愈伤组织生长速度快、质地均一疏松;愈伤组织最佳生长培养基为MS-t0.6mg/L6-BA 0.1mg/LNAA 1.0mg/L2,4-D;且选择松散型愈伤组织和3.0×105个/ml的起始细胞浓度,25℃黑暗培养18d为红景天细胞最适悬浮培养体系.     

玉米幼胚培养胚性愈伤组织诱导力的遗传变异分析

用6个玉米自交系,配制完全双列杂交组合进行幼胚培养,测定胚性愈伤组织诱导率作为评价指标,用Hayman双列杂交分析法和Griffing配合力分析方法1进行遗传分析.结果表明,胚性愈伤组织诱导率在基因型间差异显著,其性状遗传为加性-显性模型,加性变异占94.41%,显性变异仅占5.59%,显性变异表现为部分显性;该性状遗传力高,表现为受主     

杜仲愈伤组织诱导及胚性愈伤组织的判别

为探索杜仲胚性愈伤组织诱导的条件,建立杜仲体细胞胚胎发生初步体系,以杜仲幼嫩叶片和未成熟合子胚为外植体、MS为基本培养基,探究外源激素配比、未成熟合子胚发育阶段与基因型对愈伤组织诱导的影响,并从形态学和细胞学对愈伤组织进行胚性的判断。试验结果表明：4种不同激素配比的培养基诱导出的叶片愈伤组织在形态上具有差异,MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L和MS+ 2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L有利于叶片胚性愈伤组织诱导;在培养基MS+ 2,4-D 2 mg/L+ 6-BA 1 mg/L上,以未成熟合子胚为外植体诱导出4种类型愈伤组织,其中圆球形和颗粒型突起的愈伤组织具有胚性;未成熟合子胚采集时间对愈伤组织诱导率具有显著差异,6月14日采集的外植体愈伤诱导率最高,不同基因型差异不显著。     

甜瓜松散型胚性愈伤组织诱导

为建立甜瓜松散胚性愈伤组织再生体系,给分子标记辅助育种、转基因育种、诱变育种等新型的育种技术提供优质材料,以甜瓜成熟叶片为外植体,调节培养基中激素、蔗糖浓度以及愈伤组织继代次数诱导甜瓜松散型胚性愈伤组织。结果表明,在2,4-D的作用下叶片能诱导出愈伤组织,在MS+0.1 mg/L 6-BA+2.0 mg/L 2,4-D+20 g/L蔗糖的培养基上,可以获得结构松散、质地较软呈黄绿色的愈伤组织;诱导松散型愈伤组织最佳培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L 2,4-D+30 g/L蔗糖,经过3次继代后可以获得生长速度较快,结构松散、质地较硬呈黄绿色的松散型愈伤组织;在MS+0.25 mg/L 6-BA+0.25 mg/L 2,4-D+40 g/L蔗糖的培养基上愈伤组织胚性化最好,继代5次,可获得结构松散、质地较硬,生长速度较快的松散型胚性愈伤组织。