巴西橡胶树单染色体显微分离及其两种体外扩增方法比较

以巴西橡胶热研7-33-97古铜期嫩叶为材料,采用酶解去壁低渗法来制备中期染色体标本,及利用显微分离方法随机分离橡胶树单条染色体,分离后的单染色体分别用接头引物介导PCR(LA-PCR)和单细胞全基因组扩增方法进行体外扩增。结果表明:经LA-PCR扩增获得了200~2 500 bp之间的DNA片段,单细胞全基因组扩增后产物大小为300~2 500 bp。对橡胶基因组DNA酶切后制备探针,经Southern杂交证实了扩增产物均来自橡胶树基因组。单细胞全基因组扩增法相比较于LA-PCR,具有操作简单、用时短、扩增片段长、产物适用多个平台等优点,将更适用于单条染色体高通量测序等相关方面的研究。     

三种黑麦种质的染色体FISH核型分析

为了解黑麦染色体的FISH核型特点,本研究使用Oligo-pSc119.2-2、Oligo-pSc200和Oligo-pSc250探针对3种黑麦(MAD黑麦, WR7黑麦和C718黑麦)染色体进行了双色FISH分析,结果发现3份黑麦的7对染色体上,Oligo-pSc119.2-2红色信号强且丰富,广泛分布于染色体端部及中部等。Oligo-pSc200和Oligo-pSc250绿色信号强,主要位于染色体端部及近端部。3份黑麦每条染色体的Oligo-pSc119.2-2信号分布较为相似,但是Oligo-pSc200和Oligo-pSc250信号的差别较大。MAD黑麦和WR7黑麦染色体上的Oligo-pSc200和Oligo-pSc250信号比C718黑麦多且强。MAD黑麦和WR7黑麦的FISH核型较为相似,它们与C718黑麦的差别较大。通过本试验了解到3份黑麦的FISH核型之间存在遗传多样性,建立了3份黑麦的FISH核型,这将有助于该种质在麦类作物遗传育种上的利用和深入研究。     

烟蚜两种微卫星标记银染方法的比较

实验比较了烟蚜SSR-PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳两种改良银染方法,目的是为初用者在选择银染方法时提供参考。用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测烟蚜SSR-PCR的产物,结果表明银染方法二灵敏度高、简便省时,更适于对烟蚜遗传多样性的研究。     

一种快速低廉的PCR探针标记方法

【研究目的】探针标记技术是分子生物学和基因工程研究中常用实验技术,需要发展高效、快速、低成本、安全、简捷的DNA探针标记方法;【方法】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,电泳和Southern杂交检测探针标记结果;【结果】电泳检测发现标记产物在电泳时相对非标记的对照表现明显滞后,表明探针标记成功;电泳条带清晰明亮,表明探针标记效率高;Southern杂交条带清晰,说明该方法标记的探针可用于Southern等分子杂交实验;【结论】利用普通的Taq酶进行PCR探针标记,是一种低成本、高效、快速的DNA探针标记方法。     

两种野生大豆不同生育期光合特性及染色体核型比较

为获得高光效的野生大豆材料及其最佳的生长条件。以丁扒山（丁豆）与凯里学院（凯豆）两种野生大豆为试材,研究其不同生育期光合特性和染色体核型分析。结果表明丁豆叶绿素含量盛花期和结荚期低于凯豆,丁豆叶绿素含量为结荚期显著高于营养期和盛花期,凯豆叶绿素含量为盛花期和结荚期显著高于营养期。凯豆的光合速率、气孔导度、胞间CO₂、蒸腾速率均高于丁豆,凯豆光合速率和气孔导度均为盛花期>结荚期>营养期,丁豆光合速率为盛花期>营养期>结荚期。凯豆结荚期的胞间CO₂浓度呈下降趋势,营养期和盛花期的胞间CO₂浓度呈先下降后上升的趋势。丁豆营养期呈先下降后上升再下降的趋势,其盛花期呈下降趋势,结荚期呈双峰曲线。两种野生大豆蒸腾速率均为结荚期>盛花期>营养期。丁豆LCP为结荚期>盛花期>营养期,LSP和P_max为盛花期>结荚期>营养期。丁豆核型公式为：2n=24m+12sm+4st,凯豆核型公式为：2n=22m+16sm+2st。凯豆较丁豆光合效能利用率高,且两者光合利用效能均为盛花期>结荚期>营养期,丁豆的染色体为2B型,凯豆为2C型。     

3种试剂盒对烟丝DNA提取及其微生物群落多样性分析效果的比较

筛选能高效提取烟丝DNA,并能获取其微生物群落多样性较高的试剂盒。选择3种不同的试剂盒提取烟丝DNA,比较DNA的纯度和浓度,并将提取的DNA进行原核生物16S rRNA基因V3～V4区和真菌ITS2区的PCR扩增及高通量扩增子测序,进而比较烟丝样品微生物群落多样性和结构差异。结果表明:(1)DNeasy?PowerPlant?Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)提取的烟丝DNA浓度为(103.67±1.7) ng/μL,显著高于其他试剂盒(P0.01),且3种试剂盒提取的DNA纯度均达到合格水平。(2)3种试剂盒提取的DNA样本均能反映样本中原核生物群落多样性与结构,从门分类水平看,试剂盒P检测到11个门类,E.Z.N.A.TMHP Plant DNA Kit植物基因组提取试剂盒(M)检测到8个门类,DNeasy?PowerSoil?Kit土壤基因组提取试剂盒(S)检测到5个门类;从属分类水平看,试剂盒P检测到83个属,试剂盒S检测到71个属,试剂盒M检测到69个属。(3)3种试剂盒均能检测到Unclassified类群、子囊菌门Ascomycota、接合菌门Zygomycota和Others等4个真菌门类,但试剂盒P检测到的类群比例最高;在属分类水平上,试剂盒P检测出30个属,试剂盒S检测出20个属,试剂盒M检测出11个属。DNeasy?PowerPlant?Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)能有效提取烟丝及其所含微生物的总DNA,并能检测出更高的烟丝微生物群落多样性,推荐该试剂盒用于烟丝样品中微生物群落多样性与结构的分析。     

两种粮面压盖方式控温效果比较

中央储备粮平和直属库,地处福建省南部漳州地区,南靠广东,属亚热带季风湿润性气候,高温时间长,低温时间短,年平均气温在21℃左右,年平均降雨量在1200㎜左右。储粮生态区域属于高温高湿储粮区。     

两个低谷蛋白基因插入缺失标记的设计与验证

低谷蛋白稻米是肾脏病人极有效的食疗辅助品,培育低谷蛋白功能性水稻品种具有重大意义。低谷蛋白基因Lgc1作为培育低谷蛋白功能性水稻品种的优质资源,受到了育种家的青睐。为提高低谷蛋白基因Lgc1分子标记辅助选择的准确性,我们根据其突变体在两个谷蛋白基因GluB4和GluB5间的碱基缺失,设计出了Lgc1基因的插入缺失标记InDel-Lgc1-A和InDel-Lgc1-B。利用InDel标记对W3660(Lgc1低谷蛋白品种)/南粳46(谷蛋白正常品种)的F2分离群体和13份水稻品种进行检测验证。依据其PCR扩增产物的电泳带型,可准确地区分出低谷蛋白纯合基因、谷蛋白正常纯合基因和杂合基因型3种带型,且3种带型与其植株或品种相应的蛋白性状表现完全一致,表明这两对InDel标记可用于Lgc1低谷蛋白基因资源的鉴定以及分子辅助育种。     

大粮堆两种不同通风方式通风效果比较

低温季节对大粮堆分别进行了轴流风机、离心风机通风试验,通过试验发现两种通风方式均可以达到预期的通风目的,但轴流风机通风均温效果更好,成本更低。     

小麦EST-SSR标记的开发和染色体定位及其在追踪黑麦染色体中的应用

根据小麦盐胁迫诱导和茎秆组织相关EST序列开发了81对EST-SSR引物, 其中67、46、18和61对分别在小麦、黑麦、簇毛麦和大麦基因组中稳定扩增, 在不同小麦和大麦品种间具有多态性的引物分别有22和23对。利用小麦缺体-四体系共定位了43对引物的81个位点, 其中A、B和D染色体组上分别有29、30和22个位点, 涉及除4B、3D和6D外的18条染色体。此外30对引物在黑麦基因组中具有特异扩增, 其中8对分别在黑麦1R、4R、5R和R7染色体上具有特异扩增, 7对在多条黑麦染色体具有相同扩增。这些新标记可有效用于小麦及其近缘物种的遗传作图与比较遗传研究。     

两种凝胶电泳系统对SSR标记多态性的影响

利用 35个SSR引物和 14个玉米自交系直接比较了 3%Metaphor琼脂糖凝胶和 12 %聚丙烯酰胺凝胶电泳对SSR位点多态性水平的影响。结果表明 ,两种凝胶系统检测出的等位基因数目和基因多态性水平存在显著差异 ,12 %聚丙烯酰胺凝胶在区分微小差异片段能力上明显高于 3%Metaphor琼脂糖凝胶。另一方面在两种电泳检测系统下 ,14个自交系之间的遗传相似系数相关性 (r =0 516)达到了极显著水平 (P <0 0 1)。在 10个具有最大多态性信息量的SSR引物中 ,8个在两种凝胶系统中保持相同。利用 8个引物可以对供试自交系进行初步鉴定。笔者认为 ,3%Metaphor琼脂糖凝胶电泳比较适合在遗传作图或基因定位研究中应用 ;而在品种指纹图谱分析或遗传多样性研究中 ,应采用 12 %聚丙烯酰胺凝胶电泳作为检测工具     

一个具有两种标记性状的棉花自交系

一个具有两种标记性状的棉花自交系棉花是常异花授粉作物，遗传背景复杂，不易纯合。为进一步提高棉花杂种优势的效应，选育基因型纯合程度高的亲本并加以指示性状的利用是一条有效途径。我们通过回交转育、自交纯合的方法，选育出了具有、ｇｌ２ｇｌ３两种基因标记性状的...     

两种四周粮层环流均温方式控温效果比较

两栋试验仓在空调补冷的同时采用墙体"热皮"环流和多孔轻质隔墙板通风两种方式对仓房四周粮层进行控温,均达到预期效果。靠墙壁"热皮"最高粮温分别为29.4℃、28.6℃,较对照仓低3.7℃、4.5℃;平均粮温分别为21.1℃、22.1℃,较对照仓低3.6℃、2.6℃。两种控温方式对整仓粮温的影响不同,墙体"热皮"环流对整仓粮温影响较大,造成每层粮温的升高提前且加快;多孔轻质隔墙板通风对整仓粮温基本无影响。     

两种细菌学检查方法的比较

摘 要: 【目的】采用两种细菌学检查方法对牛乳中细菌进行菌数测定,比较得出最佳检测方法。【方法】采用显微镜计数法、标准平板计数法进行测定。【结果】微生物显微镜直接计数法随机性大,对菌体数量不能做出较为宏观,全面的反应.优点是计数快速;平板菌落计数法速度慢,需要平板上长出菌落一段时后才能计数。【结论】由于平板菌落计数法通常间做梯度稀释,所以计数的线性范围大.由于是菌悬液涂布,所以比较均匀,能较好的反应菌落的疏密程度.重复性,平行性很好,是经典的计数方法。     

种子净度两种分析方法的比较

净度是检验种子质量的四项指标之一,净度分析是测定种子净度的手段与途径。本文从理论和实践总结了净度分析中半试样与全试样两种方法的不同与利弊,对种子检验员正确掌握净度分析操作技能,并快速准确地测定种子净度值有一定借鉴意义。     

3种分子标记在分析茶树种质资源遗传多样性上的比较

本研究的目的是比较EST-SSR、SRAP和SCoT标记在茶树资源研究中的可应用性,为茶树分子标记的选择与优化提供依据。本研究用6份有代表性的茶树资源,从中筛选出扩增条带清晰、多态性高的EST-SSR标记40对、SRAP标记40对、SCoT标记38个,对50份茶树材料的遗传多样性进行分析,重点比较了这3种分子标记的多态性条带比率(PPB)、多态性信息含量(PIC)、位点平均信息量(Ib_(av))、有效多元比率(EMR)、引物解析强度(Rp)、标记指数(MI)等方面的差异。40对EST-SSR引物共检测到320个等位位点,平均为8.00个,引物PPB、PIC、EMR、Ib_(av)、Rp、MI值分别为94.06%、0.85、7.53、0.56、4.48、4.22。40对SRAP引物共检测到336个等位位点,平均为8.40个,引物PPB、PIC、EMR、Ib_(av)、Rp、MI值分别为89.88%、0.77、7.55、0.61、5.11、4.61。38个SCoT引物共检测到439个等位位点,平均为11.55个,引物PPB、PIC、EMR、Ib_(av)、Rp、MI值分别为90.66%、0.79、10.47、0.58、6.71、6.07。3种标记体系检测到的平均等位位点、EMR、Rp和MI值都表现为SCoT最高,其次为SRAP,再次为EST-SSR,而EST-SSR的PPB和PIC值最高,其次为SCoT,再次为SRAP。SCoT具有较高的标记效率,而EST-SSR标记具有丰富的位点多态信息。     

两种玉米制种效果的研究

为确保玉米杂交种子质量 ,在借鉴国内外知名种子公司的先进经验基础上 ,于 1997年总结并提出了“原种传 ,三级田”的玉米繁种程序 ,并连续两年试验效果良好。1　材料和方法从三级田制得的杂交种中分别随机取出 3个杂交种 :鲁单 50、掖单 13和鲁原单 14。再从调进种子(普通大田制种 )中相应地取出相同品种作对照。6个处理 ,重复 3次。随机区组排列。小区行长5m,行距 0 .67m,株距 0 .2 8m。亩密度 3550株。 4行区 ,小区面积 13.4 m2 。苗期目测幼苗整齐度 ;散粉后 ,小区随机调查 2 0株 ,测其株高、穗位高 ,计算变异系数 ;成熟后 ,收小区中间两…     

广西香稻Badh2基因两种功能标记的开发

水稻的香味是一种重要的食味品质性状,是水稻第8号染色体Badh2基因突变导致其功能缺失,引起芳香活性物质2-乙酰-1-吡咯啉(2AP)的积累从而产生香味。Badh2基因至少存在18个等位突变位点,利用等位突变位点辅助培育香稻被证明是一个有效手段。传统Sanger测序法和SSR分子标记PCR电泳分析进行位点检测效率较低。为了开发效率更高的检测方法,本研究利用了实时荧光PCR检测技术对广西地方常见的水稻突变荧光分子标记。对40份广西地方香稻的Badh2基因进行直接测序,发现这些香稻的Badh2基因主要存在两种突变,第4、5外显子806 bp缺失(badh2-E4-5.1)和第7外显子8 bp缺失(badh2-E7)。针对这两种突变类型设计实时荧光PCR检测方法,并对已测序的40份香稻进行验证,实时荧光PCR检测的准确性达到93.75%。进一步对50份地方品种进行香味基因型分型鉴定,其中24份香稻为badh2-E4-5,22份香稻为badh2-E7。本研究针对广西地方香稻品种的主要两种突变类型,设计开发了这两种等位基因的荧光分子标记,适用于香稻基因型的鉴定筛选,对香稻育种具有重要的现实意义。     

不同试剂盒对烟丝DNA提取及其微生物群落多样性分析效果的比较

筛选能高效提取烟丝DNA,并能获取其微生物群落多样性较高的试剂盒。选择3种不同的试剂盒提取烟丝DNA,比较DNA的纯度和浓度,并将提取的DNA进行原核生物16S rRNA基因V3~V4区和真菌ITS2区的PCR扩增及扩增子高通量测序,进而比较烟丝样品微生物群落多样性和结构差异。结果表明：（1）DNeasy? PowerPlant? Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)提取的烟丝DNA浓度为(103.67±1.7) ng/μL,显著高于其他试剂盒(P<0.01),且3种试剂盒提取的DNA纯度均达到合格水平。（2）3种试剂盒提取的DNA样本均能反映样本中原核生物群落多样性与结构,从门分类水平看,试剂盒P检测到11个门类,E.Z.N.A.TM HP Plant DNA Kit植物基因组提取试剂盒(M)检测到8个门类,DNeasy? PowerSoil? Kit土壤基因组提取试剂盒(S)检测到5个门类;从属分类水平看,试剂盒P检测到83个属,试剂盒S检测到71个属,试剂盒M检测到69个属。（3）3种试剂盒均能检测到Unclassified类群、子囊菌门Ascomycota、接合菌门Zygomycota和Others等4个真菌门类,但试剂盒P检测到的类群比例最高;在属分类水平上,试剂盒P检测出30个属,试剂盒S检测出20个属,试剂盒M检测出11个属。DNeasy? PowerPlant? Pro Kit植物基因组提取试剂盒(P)能有效提取烟丝及其所含微生物的总DNA,并能检测出更高的烟丝微生物群落多样性,推荐该试剂盒用于烟丝样品中微生物群落多样性与结构的分析。