冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

【研究目的】研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离。【方法】以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件。【结论】使用1/2MS基本培养基附加TDZ0.2mg/L、NAA0.5 mg/L和 PVP2.0g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2 mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ0.4 mg/L +NAA0.2mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20~25 g/L纤维素酶,酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高。     

天蓝苜蓿花药愈伤组织诱导及再生体系的建立

为获得天蓝苜蓿单倍体再生植株,本研究以野生天蓝苜蓿花药为外植体,采用正交设计L16(44)筛选适宜天蓝苜蓿愈伤组织诱导培养基,比较不同基本培养基及生长调节剂组合筛选适宜的分化培养基,并用1/3MS、1/2MS和MS添加不同浓度的NAA研究不定生根.结果表明:天蓝苜蓿现蕾15～25 d的花药其愈伤组织诱导效果最好,高达6...     

桃儿七愈伤组织培养体系的建立及鬼臼毒素含量测定

本研究利用组织培养技术研究桃儿七不同外植体、不同生长调节剂浓度配比和不同蔗糖浓度对桃儿七愈伤组织生长的影响,建立桃儿七愈伤组织增殖培养技术体系,同时采用高效液相色谱法测定桃儿七愈伤组织中鬼臼毒素含量。结果表明,桃儿七愈伤组织诱导的最佳外植体是叶柄;愈伤组织的最佳增殖培养基为Ms+ NAA0.5 mg/L + TDZ0.1mg/L + 6-BA1.0mg/L,碳源蔗糖浓度为40.0 g/L,获得疏松颗粒状生长旺盛的愈伤组织,愈伤组织中鬼臼毒素含量为1.56%,为野生桃儿七根茎中鬼臼素素含量的68.4%。因此,可通过对桃儿七愈伤组织的培养获取鬼臼毒素。     

中药防风愈伤组织培养及再生体系建立研究现状

防风主产区为东北地区和华北地区,是常用的中药材之一.由于近些年来对防风药理性质的研究,导致防风资源遭到严重破坏,如何快速繁殖和培育防风,满足当前中药市场的需求成为一大难题.通过归纳整理近年来防风愈伤组织培养及再生体系建立等方面的研究进展,为防风的研究和应用提供理论基础.     

穿山龙愈伤组织培养研究

以穿龙薯蓣的叶柄、茎段、叶和茎尖为材料,对其进行了愈伤组织培养。结果表明:穿龙薯蓣不同外植体(叶柄、茎段、叶、茎尖)均能诱导出愈伤组织,其中以茎尖形成愈伤组织最快,皂甙元含量最高;不同培养基、pH值、接种量、温度、激素等因子对愈伤组织的形成、生长及皂甙元含量有很大的影响;改良MS培养基、2,4-D浓度为3.0~5.0mg/L、BA为1.0mg/L的激素配比使愈伤组织的生长量、产物含量最高。     

根癌农杆菌介导的橡胶树花药愈伤组织遗传转化体系的建立

为建立根癌农杆菌介导的橡胶树遗传转化体系,以花药愈伤组织为受体,研究了农杆菌菌株、共培养温度、共培养时间、乙酰丁香酮(AS)等因素对遗传转化效率的影响。结果表明,农杆菌菌株、共培养温度和共培养时间对转化效率具有显著影响,AS不影响转化效率。2.2万个花药愈伤组织经EHA105菌株侵染后,转入未添加AS的培养基,22℃共培养6d,通过50mgL-1卡那霉素抗性筛选、叶片GUS染色、uidA和NptII基因PCR特异扩增、PCR产物测序及NptII基因Southern检测,鉴定出11株转基因植株,并通过嫁接和次生体胚发生,获得来自8个转基因株系的681株转基因植株,移栽成活253株。     

蓖麻花药愈伤组织诱导的研究

以通蓖5号为试验材料,诱导蓖麻花药的愈伤组织.分别以接种密度(1/5个、2/5个、3/5个、4/5个、1个花蕾)、基本培养基种类(MS、NB、B_5、N_6)、低温预处理时间(0d、1d、3d、5d、7d、9d)、培养基添加物(糖、生长激素、脯氨酸、水解酪蛋白、抗坏血酸)等因素为变量,对蓖麻花药愈伤组织进行诱导试验.结果表明,3/5个花蕾的接种密度、30g/L的糖浓度、MS培养基(添加1.5mg/L 6.BA和0.9mg/L NAA)以及5d的低温(4℃)预处理均有利于花药愈伤组织的形成;同时脯氨酸、水解酪蛋白、抗坏血酸等的加入均可有效地提高蓖麻花药愈伤组织诱导率.     

杉木愈伤组织的高效诱导和瞬时转化体系的建立

本研究参考已有的杉木(Cunninghamia lanceolata)体细胞胚胎发生系统,建立了以杉木针叶为外植体的愈伤组织高效诱导体系和原生质体瞬时转化体系,并初步探讨了细胞壁再生和以茎段为受体材料的稳定遗传转化技术。以杉木针叶为外植体,在添加有1.0 mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、2.0 mg/L 6-苄氨基嘌呤(6-BA)、1.0 mg/L 6-糠基氨基嘌呤(KT)以及0.5 mg/L萘乙酸(NAA)的MS培养基诱导愈伤组织,愈伤组织形成率可以达到87.5%;对分离得到的杉木次生木质部原生质体采用40%PEG-4000介导法进行原生质体瞬时转化,外源基因的转化率达到30%,并实现了原生质体多次分裂形成细胞团;以上结果表明,以杉木针叶作为外植体可高效诱导形成愈伤组织,且在增殖培养基上生长状态良好。本研究建立了杉木原生质体瞬时转化体系并实现了原生质体的细胞壁再生和分裂。     

棉花组织培养高效植株再生体系的建立

通过对影响棉花体细胞胚胎发生和植株再生关键因素的研究,建立了适用于广泛基因型的棉花组织培养高效胚胎发生与植株再生体系。从中棉所12、中棉所19、泗棉3号等20余个主栽品种诱导获得了胚胎发生和植株再生,有效地突破了棉花组织培养植株再生的基因型控制,使占我国棉田面积50%以上的品种均能诱导获得胚胎发生和再生植株。首次诱导获得直接胚胎发生,使棉花组织培养的周期由180d缩短到120d左右,减少了培养过程中变异的发生。该结果的获得必将大大促进植物细胞工程和基因工程在棉花遗传改良上的应用。     

高羊茅高效组织培养再生体系的建立

植物分子育种与基因功能鉴定是建立在高效的组织培养再生体系基础上的。本研究以高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)为材料,探讨了不同外植体状态、基本培养基类型、外源激素组合与固化剂种类与浓度对愈伤组织诱导的影响,并进行了愈伤组织分化长芽与生根研究。结果表明:愈伤组织诱导过程中,离体成熟胚比完整种子作外植体愈伤组织出现早、质量优、诱导率高;基本培养基的选择上以N6诱导率最高,MS最低;激素组合研究中高羊茅三个品种(SAFari, FirewarⅡ, Barleduc)在无6-BA培养基中,生长激素选择上都是2,4-D优于IAA,2~2.5 mg/L 2,4-D在三个品种中诱导率都在50%以上,而在添加0.5 mg/L 6-BA时诱导率都偏低;固化剂选择上则以Phytagel与Agarose二都最优,Phytagel固化剂最佳诱导浓度为2~4 g/L。分化长芽最佳培养基为MS+0.1 mg/L 2,4-D+0.1 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+20 mg/L AgNO3+2%蔗糖+0.6%琼脂,生根壮苗最佳培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA+3%蔗糖+0.3%Phytagel。本研究为高羊茅的高效转基因体系建立与CRISPR基因功能研究提供准备。     

白芦笋花药愈伤组织诱导及绿芽分化

为建立芦笋单倍体育种技术体系以解决国内芦笋新品种资源贫乏问题,笔者以白芦笋花药为外植体进行了愈伤组织的诱导及绿芽分化研究。试验结果表明,芦笋花药经过4d的冷藏(4℃)处理后,接种于含有NAA2.0 mg/L、6-BA1.0mg/L及6%蔗糖的1/2MS培养基上,可产生愈伤组织;每年的4月份接种花药的愈伤组织诱导率最高,8月份次之,11月份最低。品种间、同一品种不同单株间花药的愈伤组织诱导率不同,以‘UC155’品种(18.9%)最高,显著高于其他三个品种‘UC142’(11.6%)、‘Gijnlim’(10.3%)、‘Thielim’(5.8%),所有试验株系中以‘UC155’-8的愈伤组织诱导率最高,达83.5%;每日补充光照强度为1000 lx的光照,比全暗培养更有利于芦笋花药愈伤组织的形成;花药接种前进行离心处理(4000 r/min)30 min,不能提高愈伤组织诱导率;愈伤组织转瓶培养于NAA 0.5 mg/L、6-BA 1.0 mg/L及3%蔗糖的MS培养基上,能分化出无根绿芽;不同品种间绿芽分化率有差别,以‘Gijnlim’品种最高(67.2%),‘UC142’品种最低(14.1%);未分化绿芽的愈伤组织再转入于不含植物生长调节剂的MS培养基上培养,部分愈伤组织能分化出绿芽     

提高冬小麦花药愈伤组织诱导效率的研究

为了进一步提高小麦花药愈伤组织的诱导效率,以12个黄淮麦区冬小麦杂交F1代为供试材料,比较了不同诱导培养基、培养方式和花药接种密度与共培养子房数等因素对花药愈伤组织诱导及分化的影响。结果表明:CHB培养基诱导效果最好,C17次之,而N6和W14效果较差,不同基因型对不同培养基的反应不同,但大多数材料在CHB和C17培养基上反应较好;培养基附加较低浓度的2,4-D(0.5 mg/L)时有利于形成胚状体并在诱导培养基上一步成苗;液体培养时愈伤组织诱导率最高但对愈伤的进一步分化不利,固体和双层培养时的诱导率最低,而半固体培养时不仅有利于愈伤组织诱导而且对其分化较好,是小麦花药培养的较好方式;花药与子房共培养可以显著提高愈伤组织诱导率,花药接种密度较低(2～2.4枚/mL)时较多的子房(20个)可以起到显著的促进作用,花药接种在高密度(6～7.2枚/mL)或中密度时(4～4.8枚/mL)10个或10个以上的子房诱导效果较好。     

不同基因型冬小麦花药出愈率及其愈伤组织的蛋白质电泳分析

用不同基因型的冬小麦品种花药在Ｗ１４２培养基（改进的Ｗ１４培养基）上获得较高的出愈率，但不曲因型之间仍存在着显著的差异。用Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司ＰｈａｓｔＳｙｓｔｅｍ电泳仪对不同基因型小麦花药及其愈伤组织蛋白质进行等电聚焦电泳和ＳＤＳ－聚丙烯酰胺凝胶电泳分析，观察到不同基因型花药蛋白质之间存在着差异，并且初步认为这种蛋白质差异与出愈率有相关性。不同基因型花药愈伤组织之间观察不到明显的带型区别，但它     

冬小麦花药愈伤组织无性系株高遗传研究

从Ｈ１花药单倍体试管苗基部，取尚未分化绿苗的胚性愈伤组织建立的体细胞无性系，获得４丛Ｒ１结实株系。从田间Ｒ２的观察中发现，Ｒ１的４株后代中有１株４个穗繁衍的８６个单株发生了变异，Ｒ２的株系变异率为２５％。经过这株变异的Ｒ２、Ｒ３的株高连续观察发现：株高变异范围均很大，并有超亲现象，Ｒ２的变异大于Ｒ３；穗系间和穗系内的变异均极显著，穗系间变异大于穗系内变异；Ｒ３有８．１４％的株系已稳定；Ｒ２和Ｒ３的     

茄子花药愈伤诱导及不定芽分化研究

以4个茄子品种的花药为外植体,研究茄子诱导花药愈伤组织及不定芽分化.结果表明,西安绿茄,豫艺2号主要分化黄白色紧密型愈伤,这种类型的愈伤分化不定芽较多,翠绿二号,黑仙子分化黄白色松散型愈伤.松散型和紧密型愈伤组织均能分化出绿苗,但松散型愈伤分化的绿苗畸形率高,容易生长缓慢,玻璃化.豫艺2号和西安绿茄适合在F1培养基上分...     

相思树的愈伤组织培养及其组织细胞学观察

本文研究了相思愈伤组织继代培养过程中,激素浓度、光照条件、接种量等各因素对相思愈伤组织培养的影响,研究结果发现,在培养基中添加0.2～0.5mg/L的2,4-D浓度水平最有利于相思愈伤组织的生长。通过不同光照强度的对比试验得出,弱光在保持愈伤组织的形态上较有利。将接种量控制在0.3 g/瓶时,在愈伤组织的增殖和保持能达到最优的效果。同时,通过对不同相思愈伤组织细胞学观察可以看出,不同相思品种的愈伤组织细胞形态各不相同,在培养过程中,愈伤组织的细胞的形态也在变化。     

水曲柳愈伤组织诱导及悬浮细胞体系的建立

水曲柳悬浮细胞培养比较困难,本研究首次获得水曲柳悬浮细胞。以水曲柳叶柄为材料诱导愈伤组织,通过2,4-D浓度的筛选,建立稳定的水曲柳悬浮细胞培养体系,可为水曲柳悬浮细胞系遗传转化或诱变后单克隆的筛选提供材料。水曲柳愈伤组织在WPM+BA0.1mg/L+2,4,-D0.015mg/L+20g/L蔗糖液体培养基中振荡培养3-4代,可获得稳定的悬浮细胞系,最佳继带周期为15d。     

大豆花药愈伤组织的分化及其内源激素分析

选用３１个栽培大豆基因型进行花药培养。愈伤组织诱导率２．２％￣３６．６％,８个基因型的出愈率在２５％以上,６个基因型产生了芽或胚状体,只有丰收黄、鲁豆１０呈二个基因型既产生了芽,又产生了胚状体,具有相对高的培养力。３年内共产生了１４个再生芽、９个胚状体、６个芽状物和一个根、芽齐全的小再生植株。虽然获得花粉植株属于１５年来的第一例,但愈伤组织分化率仍然很低,这与愈伤组织的状态和质量较差有很大关系。愈     

小麦花药愈伤组织耐盐变异体的筛选

在培养基中加入一定浓度NaCl,对小麦F_1花药愈伤组织的耐盐变异体,进行细胞水平上的筛选.采用直接筛选法及逐渐增加盐浓度筛选法,结果表明,后者是提高耐盐变异体频率的有效措施.C_(17)+0.1%NaCl(转移愈伤组织)C_(17)+0.3%NaCl及C_(17)+0.1%NaCl(转移愈伤组织)C_(17)+0.5%NaCl处理的绿苗分化率,较直接筛选法分别提高5.06及15.0倍.在较高(加0.3%NaCl)盐含量的培养基上分化的花粉植株及其后代(H_2、H_3)表现耐盐性较强.获得了在0.4%含盐量土壤上种植能正常或基本正常生长的高耐盐株系3个.     

激素浓度对茄子花药愈伤再生植株的影响

以4个茄子杂交品种为试材,对诱导花药获得的愈伤进行再生植株诱导。结果表明,4份材料中,苏茄7号、苏茄8号诱导出极少不定芽;苏茄6号能够诱导少量不定芽,但是在后期生长中极易玻璃体化;苏茄5号能够诱导大量不定芽。诱导苏茄5号形成不定芽的的激素浓度最佳配比是1.0 mg/L 6-Benzylaminopurine(6-BA)+0.05 mg/L 1-Naphthylacetic acid(NAA),诱导率可达50%。最终获得27个再生植株,经过根尖染色体计数和SSR标记鉴定,均为双单倍体。以上结果表明,合适的激素组合以及合适的浓度可以大大提高再生植株的诱导率,同时也可以诱导愈伤组织加倍直接获得双单倍体。