适于AFLP分析用的柑橘DNA提取方法

利用改进的CTAB法提取了15个柑橘分类群的基因组DNA,并进行了AFLP分析。结果表明,该方法提取的DNA溶液无色透明,紫外分光光度计测得A260/A280为1.8~2.0,1%琼脂糖胶电泳为清晰的一条带,RNA去除干净,无降解现象。其AFLP分析(引物EcoRI-AAC+MseI-CAC)条带清晰,多态性好,说明此方法完全适于AFLP分析。     

肉苁蓉种内变异的AFLP标记研究

利用AFIP标记方法对肉苁蓉(Cistanche deserticola Y.C.Ma)种内不同花冠类型进行分子标记鉴定。结果表明:从64对引物组合中选出扩增带纹丰富清晰,且多态性较好的引物组合15对,共扩增出条带266条,多态性条带148条,多态性位点百分比为55.6%。从花冠裂片类型可将肉苁蓉划分为9种不同类型,9种类型遗传距离的变异范围在0.1778～0.8462之间。     

梨果皮色泽变异品种（系）的AFLP与SRAP标记鉴定

为揭示梨果皮色泽变异品种（系）与原始品种的遗传差异,利用AFLP和SRAP标记对3组果皮色泽的变异品种（系）进行了鉴别。54对AFLP引物共检测1 089个位点,其中多态性条带数为688,多态性比率为63.2%;20对SRAP引物可检测210个位点,其中多态性条带为76条,多态性比率为36.2%。分析结果表明,7对AF...     

应用AFLP分子标记鉴定苹果品种

在建立苹果品种AFLP分析体系的基础上,从68对引物中筛选出了4对多态性高、分辨能力强的引物（即P32M46、P44M53、P59M41和P79M61）。分析了P32M46引物绘制的我国25个苹果重要品种的AFLP指纹图谱的遗传多样性,确定了各供试品种的差异带,区分子供试的25个苹果品种。对AFLP分析的关键步骤进行了讨论,并对生产上应用AFLP技术检测苹果品种真实性和纯度作了展望。     

基于AFLP技术对陈皮药用柑橘品种遗传多样性的研究

对目前市场流通的陈皮入药柑橘品种的遗传背景进行研究,分析其遗传特性差异。运用AFLP技术分析采自5个省份46份柑橘样品的遗传背景,用NTSYSpc 2.11软件进行聚类分析。结果表明:从12对引物中筛选得到6对AFLP引物组合,共扩增出548个DNA条带,多态性条带为472个,多态性位点百分率86.13%。通过构建系统进化树,在一定程度上实现了陈皮入药柑橘品种的划分。陈皮入药柑橘品种间遗传多样性比较丰富,AFLP分子标记可有效区分不同柑橘品种,为陈皮入药柑橘品种的筛选、划分提供了科学依据。     

辐射诱变和芽变柑橘品种(系)的AFLP分析

为了对广东省近年来新选育的16个60Co-γ辐射诱变和芽变柑橘优良品系(株系)进行遗传差异分析,应用AFLP技术,对3个亲本和16个辐射诱变和芽变的柑橘品种(系)进行了遗传差异分析。从64对引物中筛选出9对多态性高、分辨能力强的引物进行分析,结果表明:(1)与各自的亲本相比,供试16个辐射诱变和芽变的柑橘变异类型的遗传基础均已经发生了不同程度的变化。(2)利用引物EcoRⅠAAG+MseⅠCTT绘制供试样品的AFLP指纹图谱,并根据各自的差异带或特征带区分了19个柑橘试材。(3)对AFLP扩增结果进行聚类分析,根据相似系数0.77的水平可将19个样品分为4组。红江橙品系中的华青1号与亲本间的相似性系数仅为0.647 7,可将其单独划为一组。可为柑橘新品种选育研究的早期鉴定提供参考依据。     

哈密瓜杂交种纯度的AFLP指纹鉴定

 MseI/ Pst I 引物M21P69 对哈密瓜一代杂种‘雪里红’及其父母本, M17P35 对哈密瓜一代杂种‘9818’和‘9321’和各自的父母本间扩增的AFLP 指纹, 可清楚地表明一代杂种与其父母本之间的遗传关系, 并可作为杂交种纯度鉴定的依据。     

AFLP标记技术在大白菜种子真实性及品种纯度鉴定中的应用

近年来，种子生化鉴定技术的应用对种子纯度检验的准确、快速和实用起了很大推动作用，但生理生化指标（如同工酶等）存在组织特异性和可利用位点有限，针对性强等限制因素。笔者对AFLP标记技术在大白菜种子真实性及品种纯度鉴定中的应用效果进行了探讨，以期建立一种稳定、快速、准确的鉴定方法。1 材料和方法1.1 植物材料 本实验中所用到的13个大白菜材料（包括5个目前大白菜生产上大面积推广使用的杂交种和各自的亲本）均由北京市农林科学院蔬菜研究中心大白菜组提供（表1）。样品材料取自大白菜成熟期的叶片。表1 5个大白菜杂交组合及…     

湖南省柑橘品质鉴定及区划研究

对湖南省柑橘的主要栽培种类早熟温州蜜柑、脐橙、糖橙、椪柑、柚的22个品种的果实品质进行了鉴定,结果表明,兴津、山下红早熟温州蜜柑,纽荷尔、萘维林娜、福本、崀丰脐橙,糖橙类及菠萝香柚等品种果实品质优良。资兴东江库区、石门、洞口、安化及相似生态小区可划为早熟温州蜜柑优质栽培区;道县、茶陵、新宁、会同、资兴、临武、宁远、武冈、宜章、耒阳、新田可划为纽荷尔脐橙优质栽培区;麻阳、洪江、永兴划为冰糖橙优质栽培区;吉首、泸溪、芝山可划为优质椪柑栽培区;江永、慈利可分别划为沙田柚和菠萝香柚优质栽培区。     

两种柑橘线粒体DNA的获得与AFLP分析

为了研究柑橘种属间线粒体基因组的遗传多样性以及温州蜜柑胞质雄性不育的分子基础，采用了两个柑橘品种‘国庆1号’温州蜜柑和无核‘冰糖橙’的胚性愈伤组织作为提取线粒体的材料。不连续蔗糖梯度超速离心法纯化线粒体。提取的线粒体完整，具很强的荧光活性。mtDNA片段在20kb左右，且无降解。叶绿体探针rubisco L、核探针45 s rRNA Southem blotting没有检测到叶绿体DNA与核DNA，而线粒体探针apt6杂交获得一条5kb大小的带，说明用此提取方法可获得无污染的mtDNA。4对AFLP引物共得到98条带，其中14条带有多态性。     

应用AFLP进行香牙蕉品种(系)的鉴别与分类

采用AFLP技术,对35个香牙蕉品种(系)进行了鉴别与分类。从AFLP试剂盒所提供的64对引物组合中选取两对引物组合EcoR I ACC+Msc I CAT和EcoR IACC+Msc I CAG对35份香牙蕉材料进行了AFLP分析,共得到扩增位点107个,其中多态性位点84个,多态性位点比例达到78.5%,对35个品种的区分率达到100%。各品种(系)多态性带数存在差别,多态性带数最多为海南红蕉(56条),多态性比例最高为0.666 7,可见其杂合程度较高;多态性带最少的为大丰1-1号(33条),其多态性比例为0.392 9。各品种(系)相互之间的相似系数介于0.71~1.00,表明香牙蕉品种(系)之间遗传关系相对较近。依相似系数0.88的水平,可以将供试的35个香牙蕉品种(单株)分为6个品种群。鉴别了3个引自不同国家的品种,几内亚、苹果以及阳江矮实际上为同一个香牙蕉品种。该研究结果基于AFLP分子标记,能从分子水平上反映香牙蕉地方品种之间的亲缘关系,可以作为香牙蕉品种(系)分类的依据。     

福建柑桔根结线虫种类及其防治研究

福建省寄生柑桔的根结线虫已鉴定出５个种：柑桔根结线虫、闽南根结线虫、花生根结线虫、苹果根结线虫和短小根结线虫。１０％益舒宝颗粒剂对柑桔根结线虫有良好的防治效果。不同砧木对根结线虫的抗性有差异，枳高度感病，酸橙和红桔较抗病。     

Identification and evaluation of chloroplast uni- and trinucleotide sequence repeats in citrus

A cpDNA fragment of 34 genotypes belonging to Citrus and four related genera was amplified and sequenced. Chloroplast microsatellites were revealed with the length of repeats ranging from 25 to 44 bases. Other than the normal uninucleotide poly(A) repeats, a trinucleotide poly(TAA) motif was also found, the first report of such repeats in a plant chloroplast genome. According to SSR structure variations, 18 Chloroplast SSR Types (CST) were identified. The CST sequences were informative for better understanding the genetic relationships of chloroplast genomes among the analyzed genotypes and confirmed some previous hypotheses about the female parent of several hybrid accessions.     

Asymmetric growth of citrus fruit peel induced by localized application of gibberellins in lanolin pastes

Lanolin pastes containing 0.02–1.0% gibberellin A₄₊₇(GA₄₊₇) were applied to one side of developing citrus fruitlets and caused thickening of the peel in the proximity of the treated zone. Enlargement of albedo (= the white portion of citrus peel) cells was involved, as revealed by scanning electron microscopy. The flavedo (= the coloured portion of the peel) and the pulp were not affected by the hormone. Gibberellin A₃ was slightly less active than GA₄₊₇. Cultivars with a naturally thick peel, such as ‘Marsh’ grapefruit (Citrus paradisi Macf.) and ‘Shamouti’ orange (Citrus sinensis (L.) Osbeck) responded more strongly than thin-peel cultivars. The role of gibberellins in the differential growth of citrus fruit tissues is discussed.     

一步法RT-PCR检测柑橘鳞皮病毒

柑橘鳞皮病是一种极具破坏性的柑橘病害,广泛分布于南美及地中海地区。我国目前缺乏对该病害的快速检测技术。以柑橘鳞皮病毒(CPV)的外壳蛋白基因(CPG)为靶标,初步建立了一步法RT-PCR快速检测体系,扩增产物与NCBI数据库中已知CPVCPG的核苷酸序列进行比对,2者序列间同源性超过99%。     

采用流式细胞仪分析柑橘愈伤组织的细胞周期

细胞周期分析可为研究柑橘愈伤组织理化诱变提供依据。试验以暗柳橙、长沙橘、澳洲指橘、纳维来特脐橙等4种培养多年的柑橘愈伤组织为试材,使用流式细胞仪分析其特定时间段的细胞周期,进而找到柑橘愈伤组织理化诱变的最佳时期即分裂最旺盛时期。结果表明,待测4种基因型柑橘愈伤组织在继代2周时处于分裂最旺盛时期,它们的S期时相比例分别为22.4%、21.9%、21.0%和22.9%。同时发现,待测的4种柑橘愈伤组织生长周期长短与再生能力有一定的相关性。极易再生的暗柳橙生长周期最短,易再生的长沙橘、澳洲指橘次之,丧失再生能力的纳维来特脐橙生长周期最长。     

安徽砀山酥梨自然保护区梨种质资源AFLP分析

为探讨安徽砀山酥梨自然保护区梨种质资源遗传多样性和鉴定砀山酥梨营养系变异,以该保护区内27个梨资源代表类型为试材,利用AFLP分子标记技术开展研究。运用从36对选择性扩增引物中筛选的3对引物组合进行扩增,每对引物可扩增出50条以上的清晰条带,扩增片段长度为30～600bp,9个引物组合共扩增出清晰可靠的DNA谱带540条。其中498条为多态性条带,平均多态性比率为92.2%。聚类分析表明,当遗传距离阈值为39.2～40.1时,全部供试生物型可分为6类:第1类为砀山酥梨及其变异类型和原产砀山的地方品种、杂交种;第2类包括雪花梨、鸭梨、紫酥、慈梨、早美酥、丰水、新高,白梨和砂梨聚在了一类;第3类包括库尔勒香梨、红香酥;南果梨、红巴梨、杜梨各为一类。与砀山酥梨相比,砀山酥梨的8个营养系变异类型均扩增出了特异带,特异条带出现的数量为5～15条不等。说明安徽砀山酥梨自然保护区梨种质资源遗传多样性丰富;砀山酥梨8个营养系变异类型均在DNA水平发生了不同程度的突变。