青蟹呼肠孤病毒对拟穴青蟹的致病性研究

采用静水法研究不同浓度番石榴水提取物(guava leaf water-extract,GLWE)对带毒拟穴青蟹(Scylla paramamosain)的成活率及在GLWE质量浓度分别为0 (C0,对照组)、10 mg·L^–1(C10组)、20 mg·L^–1(C20组)、40 mg·L^–1(C40组)、80 mg·L^–1(C80组),用药时间分别为0 h、12 h、24 h、48 h、72 h的条件下对其血清中碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、溶菌酶(LZM)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酚氧化酶(PO)和一氧化氮合成酶(TNOS、iNOS)活力的影响,并初步探究GLWE的适宜用药浓度范围。结果表明,实验15 d,各处理组青蟹的成活率随着GLWE浓度的增高呈先升后降的现象且与C0组差异显著(P<0.05),其中C40组的成活率最高(55.56%),C0组的成活率最低(22.22%)。用药12 h,C80组的AKP、CAT、PO、iNOS活力均显著高于C0组(P<0.05);用药24 h,C20和C40组的SOD、LZM及C40组的ACP、CAT和PO活力均显著高于C0组(P<0.05);用药48 h,C10、C20组的CAT活力及C40、C80组的TNOS和iNOS活力均显著高于C0组(P<0.05);用药72 h,各处理组的AKP活力均显著高于C0组(P<0.05),但C40、C80组的ACP和CAT活力显著低于C0组(P<0.05)。该条件下,10~40 mg·L^–1的GLWE可在48 h内显著促进拟穴青蟹血清AKP、ACP、SOD、CAT、PO、NOS、LZM活力的升高,其中以20~40 mg·L^–1GLWE的效果最优。     

大黄多糖对拟穴青蟹免疫相关基因表达的影响

运用RT-PCR技术探索拟穴青蟹(Scylla paramamosain)注射免疫增强剂——大黄多糖(rhubarb polysaccharide,RP)后11个免疫相关基因的表达变化情况。结果发现,大黄多糖刺激拟穴青蟹4 d后,血细胞中4个基因(丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化氢酶、过氧化物还原酶和酚氧化酶原)表达水平分别上调1.1倍、4.1倍、1.3倍和2.1倍,与对照组相比,存在极显著(P0.01)或显著性差异(P0.05)。肝胰腺中5个基因表达变化显著(P0.05),其中丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化物还原酶和抗脂多糖因子3个基因表达分别上调2.1倍、4.8倍和1.7倍;过氧化氢酶和溶菌酶仅在实验组中表达,未见其在对照组表达。由此推测,丝氨酸蛋白酶抑制因子、过氧化氢酶、过氧化物还原酶、酚氧化酶原、抗脂多糖因子和溶菌酶6个基因可能与拟穴青蟹免疫增强有关。     

青蟹呼肠孤病毒对拟穴青蟹的致病性研究

2008-2012年广西海洋研究所海水增养殖基地暂养的拟穴青蟹膏蟹出现“嗜睡”等典型的青蟹呼肠孤病毒病症状.采用套式PCR检测濒死膏蟹感染青蟹呼肠孤病毒阳性率为100％,经Blastn比对扩增序列与青蟹呼肠孤病毒基因(HQ414137.1)相似度达98％,属于青蟹呼肠孤病毒(JX213634).病毒粗提液人工回感后发现,攻毒1h,青蟹血淋巴中即可检测到青蟹呼肠孤病毒;攻毒后第4～6 d,出现死亡高峰,第10 d,累积死亡率达到100％.血清酶指标中碱性磷酸酶、谷丙转氨酶和谷草转氨酶活力明显高于对照组,而与免疫相关的过氧化物酶、超氧化物歧化酶活力低于对照组;肝胰腺、鳃和肌肉组织切片均呈现显著病理坏死损伤.青蟹呼肠孤病毒是此次拟穴青蟹膏蟹死亡的主要原因.     

拟穴青蟹ISSR-PCR条件的优化

分析DNA模板、Mg2+、dNTPs、引物和Taq DNA聚合酶及甲酰胺、二甲基亚砜等对拟穴青蟹ISSR-PCR反应的影响.研究结果确定了获得清晰条带的模板DNA、Mg2+、dNTPs、引物、Taq DNA聚合酶的浓度范围分别为:模板DNA 8～50 ng/μl ,Taq DNA聚合酶0.75～1.0 U, Mg2+1.0～2.0 mmol/L(与引物密切相关),dNTP 0.15～0.20 mmol/L,引物浓度0.6～0.8 μmol/L.甲酰胺的添加并不能优化拟穴青蟹ISSR-PCR反应结果,而低浓度的二甲基亚砜可提高扩增产物的清晰度,但与引物相关.     

水温和余氯对拟穴青蟹幼蟹的急性毒性研究

为探明三门湾核电站温排水对海区甲壳类生物的急性致死效应,笔者通过室内模拟三门湾核电站温排水的余氯残留和温升效应,设计3×12的正交试验,研究温度和游离余氯耦合、温度和化合余氯耦合下对拟穴青蟹幼蟹死亡率的影响。试验水温为25、30、35℃,初始游离余氯质量浓度为5.0、6.0、7.0、8.0、9.0 mg/L,以砂滤海水为对照组;化合余氯质量浓度为30.0、36.0、42.0、48.0、54.0 mg/L,以1.575×10^-3 mg/L NH₄OH为加氨对照组。试验结果显示,单一温度胁迫对拟穴青蟹幼蟹存活率无显著性影响(P>0.05);温度耦合下游离余氯和化合余氯对拟穴青蟹幼蟹的致死率进一步提高。游离余氯和化合余氯的96 h半致死质量浓度随温度升高逐渐降低,且均在35℃时达到最低,35℃时其96 h半致死质量浓度分别为4.455 mg/L和27.290 mg/L,每1℃温升和1 mg/L余氯增加导致死亡率分别提高了0.316%和0.027%。同时,确定了25～35℃游离余氯安全质量浓度为0.446～0.544 mg/L,化合余氯安全质量...     

光照强度对拟穴青蟹幼体生长及能量收支的影响

以拟穴青蟹为研究对象,研究了1 000 lx、3 000 lx、5 000 lx、7 000 lx、9 000 lx五组光照强度对其溢状幼体蜕皮、生长及能量收支的影响.结果表明:(1)1 000 lx试验组幼体从第4期潘状幼体(Z<,4>)阶段起即期变态成活率明显下降,全部实验幼体最终均不能变态为大眼幼体(M);5 0...     

拟穴青蟹两种养殖模式的比较

以拟穴青蟹为主养品种,比较半封闭式养殖模式与传统开放式中水体理化生因子、放养品种的存活率和产量,以探索汕头牛田洋的适宜青蟹养殖模式。经过10个月的养殖试验,半封闭式养殖模式水体理化指标、污染物指标、菌体指标等总体优于开放式养殖模式。半封闭式养殖模式青蟹存活率高出开放式养殖模式66.22%,其他养殖品种的存活率和产量也均高于开放式养殖模式。研究结果表明,与传统的开放式养殖模式相比,半封闭养殖模式能有效降低水体污染指标,提高养殖产量,较为适合在汕头牛田洋青蟹养殖区进行推广。     

拟穴青蟹幼体变态与弧菌浓度的动态变化关系

为研究拟穴亲蟹育苗池中弧菌浓度对拟穴青蟹幼体变态的影响,对育苗池内中上层和底层水体的弧菌进行跟踪监测,并在含高浓度弧菌的水体中进行拟穴青蟹溞状幼体培育.结果表明,育苗池内弧菌的浓度随着育苗时间的推移呈现上升趋势,当浓度达到105 cfu/mL后,弧菌的数量增长放缓,并逐渐趋于平稳;在含高浓度弧菌的水体中培育拟穴青蟹溞状幼体,幼体能够存活和发育,但变态率较低.     

拟穴青蟹卵泡抑素相关蛋白基因的克隆和表达分析

卵泡抑素相关蛋白(follistatin related protein,FRP)是一种细胞外基质糖蛋白,该蛋白参与细胞增殖、迁移、组织重塑、胚胎发育、细胞间相互作用等多种生理过程。迄今甲壳动物FRP的研究尚未见诸报道。实验采用RACE技术首次克隆了拟穴青蟹FRP基因部分cDNA序列。该序列长度1 948 bp,FRP肽段含有484个氨基酸残基,包括KAZAL-FS结构域、EFh结构域和两个Ig结构域。系统进化树显示拟穴青蟹FRP基因的分子进化地位与其生物学分类地位一致。半定量PCR及荧光定量PCR结果表明,FRP基因在拟穴青蟹的胸神经团、脑和卵巢中表达。FRP基因在卵巢发育各期的表达量各不相同,卵巢未发育期最高,据此我们推测FRP具有抑制卵巢发育的作用。     

拟穴青蟹vasa基因cDNA的特征分析与性腺特异表达

vasa蛋白属于DEAD家族蛋白,是一种RNA解旋酶,在生殖细胞的分化中具有重要作用。本研究从拟穴青蟹卵巢中克隆得到vasa基因cDNA全长(将其命名为Sp-vasa),Sp-vasa序列长度为2 944 bp,其中开放阅读框(ORF)长度为1 899 bp,编码632个氨基酸,具有DEAD-box家族蛋白的7个高度保守的结构域。半定量RT-PCR结果显示,Sp-vasa只在卵巢和精巢中特异表达,在其它组织则未检测到表达。由此可见,vasa属于拟穴青蟹性腺特异表达基因。因此,Sp-vasa基因可有望作为有效的分子指标研究拟穴青蟹原始生殖细胞的起源、迁移以及生殖腺的发生。     

氨氮和亚硝酸氮对南美白对虾的毒性研究

用通常的生物毒性试验方法进行了氨氮和亚硝氨氮对体长5cm南美白对虾的急性毒性试验。在海水pH8.15、水温T＝27℃、盐度S＝20．0‰条件下，求得了两种物质对南美白对虾24h、48h、72h、96h的半死浓度，提出总氨氮和非离子氨氮对南美白对虾的安全浓度分别为2．667mg/L和0．201mg/L，亚硝酸氮的安全浓度为5．551mg/L。氨氮对南美白对虾的毒性强于亚硝酸氮，并提出降低氨氮和亚硝酸氮含量的措施。     

几种营养强化材料应用于拟穴青蟹种苗培育的初步研究

进行了以淡水小球藻粉、虾片、营养强化剂单一或组合形式替代微绿球藻作为n-3高度不饱和脂肪酸供应源培育拟穴青蟹蚤状Ⅰ期幼体(Z1)~大眼幼体(M)的试验。结果表明:(1)轮虫营养强化后高度不饱和脂肪酸均有显著提高,微绿球藻组与其他组强化轮虫的n-3HUFA含量无显著差异。(2)卤虫不同营养强化材料组中,50μL营养强化剂组有最高的20∶4n6(ARA)、20∶5n3(EPA)、22∶6n3(DHA)、n-3HUFA含量。(3)营养强化材料直接投入苗池。上午投喂0.5×10-6g/mL组合饵料,下午投喂0.5×10-6g/mL营养强化剂,辅以10×10-6g/(mL.d)EM活菌,试验池的M成活率比对照池投喂微绿球藻增加了10.1%。     

不同糖源对拟穴青蟹仔蟹的生长、体成分及消化酶的影响

在水温26~30℃,盐度18~22条件下,初始体质量(0.012±0.000)g的拟穴青蟹仔蟹饲养在底铺1~2 cm细沙、边缘放5 cm^2瓦片的塑料水桶(直径20 cm,水深20 cm)中,投喂以葡萄糖、蔗糖、糊精、木薯淀粉、玉米淀粉、糊化木薯淀粉和糊化玉米淀粉为糖源的7种等氮等能饲料,养殖3周,研究不同糖源对拟穴青蟹仔蟹生长、体组成及消化酶活性的影响。试验结果显示,不同糖源显著影响拟穴青蟹仔蟹的生长性能(P<0.05);质量增加率和特定生长率依次为糊化木薯淀粉>糊化玉米淀粉>木薯淀粉>玉米淀粉>糊精>蔗糖>葡萄糖;葡萄糖试验组的成活率显著低于其他各组(P<0.05)。不同糖源对拟穴青蟹仔蟹体组成中粗蛋白和粗脂肪含量影响显著(P<0.05),对仔蟹的水分和灰分含量影响不显著(P>0.05);不同糖源对3种消化酶活性影响显著(P<0.05)。拟穴青蟹仔蟹对大分子糖源的生物利用度要大于小分子糖源。在本试验的研究条件下,7种常见糖源中糊化木薯淀粉是拟穴青蟹仔蟹的最适糖源。     

非离子氨氮对罗氏沼虾幼体的毒性研究

通过非离子氨氮对罗氏沼虾幼体的急性致毒试验表明：Ⅴ期幼体９６ｈ的半致死浓度（ＬＣ５０）值为１．１４ｍｇ／Ｌ,安全浓度（ＳＣ）值为０．１１ｍｇ／Ｌ;Ⅸ期幼体９６ｈ的ＬＣ５０值为１．４０ｍｇ／Ｌ,ＳＣ值为０．１４ｍｇ／Ｌ,建议在育苗期间加强水质管理,有效地控制水体中非离子氨氮的浓度。     

Comparative performance of hatchery-reared and wild Scylla paramamosain (Estampador, 1949) in pond culture

The performance of hatchery‐reared juveniles either in aquaculture grow‐out systems or stock enhancement is likely to be dependent on a range of factors during the hatchery phase of production. With recent progress in the development of hatchery systems for the mud crabs Scylla spp., there is growing interest in evaluation of the quality of hatchery‐reared juveniles relative to wild seed crabs as currently used in aquaculture. Hatchery‐reared and wild‐collected Scylla paramamosain juveniles were stocked either together in ponds or separately. All crabs were tagged with microwire‐coded tags, so that origin could be determined in the mixed groups. Preliminary validation demonstrated that tagging did not affect survival or growth, with a tag retention of 94%. After 106 days of culture, there was no significant difference in survival at harvest between the two sources of crabs. The wild juvenile crabs had a significantly higher initial weight:carapace width (CW) ratio compared with those from the hatchery, indicating a difference in condition. However, where crabs were stocked separately, the hatchery‐reared animals exhibited significantly faster growth than those collected from the wild, both in terms of specific growth rate and CW increase per month. However, in the mixed ponds, where there was competition with wild crabs, there was no significant difference in growth rate between crabs from the two sources. Overall, the results demonstrate that the growth performance of hatchery‐reared S. paramamosain can at least equal that of wild‐collected seed crabs in ponds culture.     

饲料蛋白质水平对拟穴青蟹幼蟹生长性能、体成分和消化酶活性的影响

用蛋白质水平分别为31.45%,36.37%,41.55%,46.13%,51.72%和56.86%的6种等能饲料,对初始体重为(11.86?0.11)mg的拟穴青蟹(Scylla paramamosain)幼蟹进行为期3周的养殖实验,考察饲料蛋白质水平对拟穴青蟹幼蟹生长性能、体成分以及消化酶活性的影响,以期获得拟穴青蟹幼蟹饲料蛋白质的适宜添加量。结果表明,饲料蛋白质水平对拟穴青蟹幼蟹的成活率影响不显著(P0.05);幼蟹的增重率和特定生长率随饲料蛋白质水平的提高先显著升高(P0.05)后稍有下降,最大值出现在蛋白质水平为51.72%的实验组;随着饲料蛋白质水平的提高,幼蟹粗蛋白质含量显著升高(P0.05)后趋于稳定,粗脂肪含量显著降低(P0.05),灰分含量先显著升高(P0.05)后显著降低(P0.05),水分含量则没有显著变化(P0.05);随着饲料蛋白质水平的提高,幼蟹蛋白酶活性显著升高(P0.05),淀粉酶活性显著降低(P0.05),各组脂肪酶活性也有显著差异(P0.05),但没有明显的变化规律。本研究条件下,饲料蛋白质水平在41.55%~56.86%,拟穴青蟹幼蟹均表现出较好的生长率,增重率和蛋白质水平的回归分析表明,幼蟹饲料蛋白质适宜水平为49.03%。     

拟穴青蟹卵巢蛋白质双向电泳的样品制备方法

为探索适用于拟穴青蟹卵巢蛋白质双向电泳的样品制备方法,比较了TCA/丙酮沉淀法和3种裂解液抽提法对总蛋白的提取效果,4种方法分别得到133、369、306和417个蛋白点。采用裂解液Ⅲ(7 mol/L尿素、2 mol/L硫脲、4% CHAPS、40 mmol/L Tris-base、65 mmol/L DTT、2% IPG Buffer、Protease in hibitor cocktail、1 mmol/L EDTA)提取蛋白所得图谱效果最好,背景清晰,蛋白点最多。     

饥饿对拟穴青蟹大眼幼体和Ⅰ期仔蟹蜕皮和生长的影响#br#

为了给拟穴青蟹(Scylla paramamosain)苗种培育过程中饵料的合理投喂提供基础理论数据,采用投喂-饥饿和饥饿-投喂的处理方式对拟穴青蟹大眼幼体和Ⅰ期仔蟹分别开展营养储存饱和点实验(PRS)和不可恢复点实验(PNR),研究饥饿对大眼幼体和Ⅰ期仔蟹蜕皮和生长的影响。结果显示,大眼幼体的PRS实验中,投喂时间≤2 d时,大眼幼体的蜕皮率为0;投喂时间≥4 d时,大眼幼体的蜕皮率和发育时间与连续投喂组(F组)无显著性差异;但投喂4 d-饥饿组(F4S组)大眼幼体蜕皮后Ⅰ期仔蟹的增重率和个体大小均显著小于F组(P<0.05)。大眼幼体的PNR实验中,饥饿2 d时大眼幼体的存活率仅为(30.00±13.23)%。Ⅰ期仔蟹的PRS实验中,连续饥饿组(S组)Ⅰ期仔蟹的蜕皮率为0,而投喂2 d-饥饿组(F2S组)、投喂3 d-饥饿组(F3S组)和F组3组Ⅰ期仔蟹的蜕皮率均无显著性差异。投喂1 d-饥饿组(F1S组)和F2S组Ⅰ期仔蟹蜕皮后Ⅱ期仔蟹的增重率和个体大小均显著小于F组(P<0.05),且F1S组Ⅰ期仔蟹的发育时间显著延长(P<0.05)。Ⅰ期仔蟹的PNR实验中,除饥饿1 d-投喂组(S1F组)外,F组Ⅰ期仔蟹的蜕皮率显著高于其他处理组(P<0.05);各组Ⅰ期仔蟹蜕皮后Ⅱ期仔蟹的增重率与饥饿时间呈负相关,而发育时间却与饥饿时间呈正相关;饥饿时间≥2 d时,Ⅰ期仔蟹蜕皮后Ⅱ期仔蟹的个体大小明显变小。拟合分析结果显示,大眼幼体的PRS;值是3.57 d,Ⅰ期仔蟹的PRS;和PNR;值分别是0.90 d和2.01 d。研究结果表明,新蜕皮的大眼幼体必须给予充足的饵料才可确保高的存活率,大眼幼体投喂6 d后可以适当减少投喂量,短期饥饿对Ⅰ期仔蟹蜕壳和生长的影响相对较小,Ⅰ期仔蟹的耐饥饿能力强于大眼幼体。