在水稻纹枯病菌菌核形成中5个基因的表达差异分析

以水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG-1IA)菌株GD118不同生长时期的总RNA为材料,以18SrRNA作为内参基因,根据实验室抑制消减杂交(suppression subtractive hybridization,SSH)已获得的立枯丝核菌基因片段的表达序列标签(expressed sequence tags,ESTs)设计引物,采用实时定量RT-PCR检测A、B、C、E、F基因(分别为双组分反应调节子、激活巨噬细胞糖蛋白、胞外金属弹力蛋白酶、亲环蛋白、内质网囊泡蛋白ERV29)的表达,以期找到水稻纹枯病菌菌核形成中的差异表达基因。结果表明:从菌核开始形成到菌核成熟的过程中,这5个基因的表达量逐渐降低,且菌核在成熟时表达量最低,但成熟后这些基因的表达量迅速恢复到之前的水平,之后表达量基本保持不变。提示这5个基因在水稻纹枯病菌菌核形成的不同时期的表达有显著差异,说明这5个基因可能受菌核形成过程中胁迫条件的诱导表达。     

水稻纹枯病菌毒素研究进展

对水稻纹枯病菌毒素的提纯方法、组分分析、毒害和致病机理等进行综述,并对研究前景进行展望.     

纹枯病菌诱导水稻表达的WRKY基因克隆及分析

[目的]克隆纹枯病菌诱导的水稻上调表达基因。[方法]对应用抑制差减杂交技术（SSH）获得的纹枯病菌诱导水稻表达的EST序列K16进行电子克隆,根据电子克隆产物设计引物进行RT—PCR、克隆测序,利用生物信息学技术对克隆产物进行功能预测。[结果]克隆出一个长度为1079bp的序列,结构功能分析显示该基因编码236个氨基酸的蛋白,存在多个功能位点,含有2个典型的WRKY结构域和1个C2H2锌指型结构,该基因与水稻WRKY8、WRKY24和WRKY30基因有较高的同源性。[结论]经电子克隆获得的纹枯病菌诱导表达的基因为典型的WRKY家族基因,该基因可能在水稻抗纹枯病中起重要作用。     

水稻纹枯病菌毒素提取及其对水稻的毒性

致病力不同的3个水稻纹枯病菌株在改良的Richard培养基中培养能产生毒素,培养液过滤后经灭菌、活性炭吸附、甲醇洗脱和浓缩得到粗毒素。用3种毒素处理不同类型的水稻种子,测定发芽率、对胚根和胚芽生长的影响。结果表明,不同致病力菌株产生的毒素毒性差异明显,3个菌株粗毒素对不同类型水稻种子的发芽率、胚根和胚芽生长均有一定抑制作用,且浓度越高,抑制率越高能力越强。不同类型的水稻品种在同种毒素相同浓度下受到的抑制也有显著差异。     

水稻纹枯病菌毒素提纯及其组分初步分析

用不同方法提取的水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)毒素活性有显著差异,但紫外扫描图谱(最大吸收波长约220 nm)相似,表明其可能为同类物质.其中,以乙醚萃取法获得的粗毒素对水稻胚根伸长的抑制率最高,达94.63%,接种水稻叶鞘后可产生典型的纹枯病症状.将乙醚萃取法提取的粗毒素经2次Sephadex ...     

10种除草剂对水稻纹枯病菌的影响

在实验室条件下,就10种稻田除草剂对水稻纹枯病菌的影响进行研究。结果表明:在PSA培养基上,乙氧氟草醚、丁草胺、乙草胺、恶庚草烷和恶草灵能显著抑制水稻纹枯病菌菌丝的生长,其IC50分别为2.01、4.16、8.12、11.97和22.01mg·L-1;而灭草松、苄嘧磺隆、环胺磺隆对菌丝生长抑制作用不明显。在100mg·L-1浓度下,乙氧氟草醚、乙草胺、恶庚草烷、恶草灵、丁草胺对水稻纹枯病菌菌核的萌发有一定的抑制作用。盆栽试验结果表明:二氯喹啉酸、乙氧氟草醚、恶草灵、丁草胺和恶庚草烷对水稻纹枯病的发生有抑制作用;而灭草松、苄嘧磺隆、乙草胺则有加重病害发生的趋势。     

水稻纹枯病菌菌核形成过程中特异基因的表达与分析

以水稻纹枯病GD-118菌株菌丝形成期的mRNA为驱赶子(driver),以菌核形成期的mRNA为检测子(tester),采用抑制消减杂交(SSH)结合虚拟Northern杂交筛选,构建了水稻纹枯病菌菌核形成过程中特异表达产生的差减cDNA文库;进一步用PCR筛选显示克隆中插入的片段主要分布在200～500bp之间;随机挑取克隆应用虚拟Northern技术以菌丝、菌核cDNA为探针来验证消减有效性,经测序和同源性检测剔除重复序列之后,获得了从菌丝到菌核形成相关的28条特异表达的基因片段;所筛选的特异表达序列主要涉及胁迫响应、转录调控、信号传导、合成代谢等.这为进一步分析水稻纹枯病菌菌核形成过程的相关基因提供了科学线索.     

四川地区水稻纹枯病菌及其致病力研究

[目的]研究四川地区水稻纹枯病菌的培养性状及其致病力。[方法]对从四川地区6个水稻主栽点采集的水稻纹枯病样进行分离,将分离所得病菌用PDA培养基培养,记录其培养性状,并对分离得到的23个菌株进行致病力测定。[结果]不同菌株间的生长速率存在显著差异,23个菌株中只有1个菌株生长速率属于中等菌株（40 mm≤Φ≤60 mm）,其余都为慢型菌株（Φ〈40 mm）,无生长速率快的菌株（Φ〉60 mm）。致病力测定结果表明,菌株间致病力存在明显的差异,23个菌株中只有1个为强致病力菌株,其余为中等致病力菌株、无弱致病力菌株。[结论]该研究明确了四川地区水稻纹枯病病菌基本生物学特征,为该地区有效控制水稻纹枯病的危害提供了理论依据。     

浙江省水稻纹枯病菌对井岗霉素的抗药性测定

通过对采自浙江省１１个地（市）２５个县（市）的１４４个水稻纹枯病菌菌株和２１个泰国野生敏感菌株的抗药性测定，表明浙江省水稻纹枯病菌群体及个体对井岗霉素的敏感度与野生菌株没有明显差异。     

儿茶酚和莨菪碱对水稻纹枯病菌氨基酸合成和分泌的影响

【目的】为明确水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani AG 1-IA)黑色素形成前体物质酪氨酸等氨基酸成份在不同培养处理中的差异。【方法】利用氨基酸分析仪对水稻纹枯病菌在3种培养处理(PDB对照,添加了300μg/mL质量浓度莨菪碱的PDB和50μg/mL质量浓度儿茶酚的PDB)后菌丝体和发酵液的氨基酸成份进行了分析。【结果】水稻纹枯病菌菌丝体中谷氨酸、天冬氨酸和丙氨酸3种氨基酸含量相对比较丰富,而谷氨酸的含量最高,达到总氨基酸的15.49%;水稻纹枯病菌发酵液中天冬氨酸和谷氨酸含量最为丰富,分别达到了总氨基酸的17.83%和58.21%;在3种处理中,不管是菌丝体还是发酵液中,都是谷氨酸和天冬氨酸最为丰富。影响水稻纹枯病菌菌丝体黑色素形成的前体物质酪氨酸的含量在3种处理的菌丝体中没有显著差异;但300μg/mL质量浓度的莨菪碱处理组与对照组和儿茶酚处理组中的苯丙氨酸含量都存在显著差异,而对照组和50μg/mL质量浓度的儿茶酚处理组的苯丙氨酸含量差异不显著。水稻纹枯病菌发酵液中对照组和50μg/mL质量浓度的儿茶酚处理组酪氨酸含量没有显著差异,但是300μg/mL质量浓度的莨菪碱处理组与对照组和儿茶酚处理组酪氨酸含量都存在显著差异,而苯丙氨酸在发酵液中差异不显著。【结论】影响水稻纹枯病菌菌丝体和发酵液黑色素形成的氨基酸不同,苯丙氨酸对水稻纹枯病菌菌丝体黑色素形成更加重要,而酪氨酸对水稻纹枯病菌发酵液黑色素形成更加重要,以上结果为氨基酸对水稻纹枯病菌黑色素形成的影响提供了参考依据。     

纹枯病菌诱导水稻表达的WRKY基因克隆及分析（摘要）

[目的]克隆纹枯病菌诱导的水稻上调表达基因。[方法]对应用抑制差减杂交技术（SSH）获得的纹枯病菌诱导水稻表达的EST序列K16进行电子克隆,根据电子克隆产物设计引物进行RT-PCR、克隆测序,利用生物信息学技术对克隆产物进行功能预测。[结果]克隆出一个长度为1079bp的序列,结构功能分析显示该基因编码236个氨基酸的蛋白,存在多个功能位点,含有2个典型的WRKY结构域和1个C2H2锌指型结构,该基因与水稻WRKY8、WRKY24和WRKY30基因有较高的同源性。[结论]经电子克隆获得的纹枯病菌诱导表达的基因为典型的WRKY家族基因,该基因可能在水稻抗纹枯病中起重要作用。     

抑制水稻纹枯病菌的植物筛选

以水稻纹枯病菌为供试菌,采用菌丝生长速率法测定了27科37种植物甲醇提取物的离体抑菌活性,发现羊耳菊全草对水稻纹枯病菌的抑菌作用最强,其茎和叶2个不同部位的甲醇提取物对水稻纹枯病菌的抑菌中浓度分别为1.19×103和4.08×103mg/L.以羊耳菊茎秆提取物对离体水稻叶片纹枯病进行了防效试验,当其浓度为10 × 103 mg/L时,先喷药后接种的预防效果为100％,先接种后喷药的治疗效果为92.38％.研究结果初步证实,羊耳菊含有强烈抑制水稻纹枯病菌的抑菌物质.     

湖北省水稻纹枯病菌菌丝融合群鉴定

用采自湖北省44个县、市的62个水稻纹枯病菌菌株与Rhizoctonia solani的菌丝融合群国际标准株AG-1IA、AG-1IB、AG-1IC、AG-4和AG-5进行了菌丝融合试验。结果证明,供试的62个菌株均能与AG-1IA株融合,其中有60株也能与AG-1IC株融合。比较而言,供试株与AG-1IA的融合率高于与AG-1IC的融合率。据此,供试菌株应归于R.Solani AG-1IA。     

“担菌宁”防治水稻纹枯病的研究

<正> 本所合成的“担菌宁”(日本名称为 Ba-sitaa 通用名 mepronu),是日本组合化学工业公司开发并生产的一个新杀菌剂品种。通过室内平板和植株上保护、治疗、内吸等实验及田间药效测定,担菌宁防治水稻纹枯病效果初步得到了肯定。现将室内、室外结     

水稻纹枯病的拮抗细菌筛选

从稻田土、田水、稻株和菌核上分离的２４８９株细菌中１５６株对稻纹枯病具有拮抗性，其中９０－７３１－１、９０－９１８－１５、９０－１０３０－６、９０－１２１０－７４个菌株能较强地抑制稻纹枯病菌菌丝的生长，在ＮＡ平板上抑菌带分别为１０ｍｍ，１２ｍｍ，１１ｍｍ和１２ｍｍ，用稀释５０倍的细菌培养液喷雾已接稻纹枯菌菌块的稻苗，病斑长度分别比对照减少２８．８ｍｍ，２５．４ｍｍ，２５．２ｍｍ，２５．６ｍｍ。     

水稻纹枯病体细胞突变体的离体筛选

采用组织培养的方法，以纹枯病菌培养液的粗提毒素为筛选剂，筛选水稻抗纹枯病突变体。通过在诱导培养和分化培养基分别加入不同体积分数的粗毒素进行试验，确定筛选的阳适体积分数为０．１０￣０．１５，筛选后获１８１株Ｒ１植株和１８９株未经毒素处理的胚培养植株。用菌核接种法分别对Ｒ１、Ｒ２及Ｒ３代植株进行抗性鉴定，结果表明，经筛选的Ｒ１植株的平均抗性均明显高于对照，而Ｒ２、Ｒ３代植株的抗性亦优于供体亲本及未经筛     

一种优化的适用于双向电泳的水稻纹枯病菌蛋白质提取方法

为开展水稻纹枯病菌蛋白质组学的研究,采用TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法对水稻纹枯病菌蛋白质提取质量进行比较,并建立了双向电泳体系。对电泳后的图谱用Quantity One软件进行分析,结果发现:TCA-丙酮法、SDS法和TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法所获得的蛋白质双向电泳图谱中,分别记录得到557、309和877个蛋白质点。SDS法提取的蛋白质样品杂质较多,存在盐离子和小分子物质干扰,得到的蛋白点较少;TCA-丙酮法提取的蛋白质样品呈黄色,有色素残留;而在TCA-丙酮法的基础上,增加酚/SDS抽提步骤,能够有效地去除样品中的盐离子和色素等杂质,获得背景清晰、分辨率高的蛋白图谱。结果表明,本研究建立了一种优化的TCA-丙酮-酚/SDS联合抽提法,该法适用于水稻纹枯病菌蛋白质双向电泳的提取。     

水稻纹枯病菌对几种常用杀菌剂的敏感性分析

为明确水稻纹枯病菌对生产上常用药剂的敏感性,从江苏省及全国其他地区共分离获得纹枯病菌株293株,采用含药培养基-区分计量法测定菌株对药剂的敏感性,确定病菌对药剂的敏感基线,检测其抗性频率。结果表明:水稻纹枯病菌对噻呋酰胺、戊唑醇和丙环唑的敏感基线分别为0.129 0、0.834 3和0.660 3μg·mL~(-1),以敏感基线10倍值为标准测定各地菌株对3种药剂的抗性频率发现,除5个菌株对丙环唑产生了抗性外,绝大多数菌株对3种药剂均表现敏感。据各菌株对3种药剂的敏感性相关分析显示,水稻纹枯病菌对3种药剂不存在交互抗性。所有供试菌株对井冈霉素均表现较高抗性,近70%菌株EC_(50)值大于500μg·mL~(-1)。该研究说明除井冈霉素外,其他3种药剂在田间均有很好的防病效果,但应注意其用量和使用频次。