新疆沙枣树叶提取物对糖尿病小鼠血糖的影响

用溶剂提取法制备新疆沙枣树叶的提取物,得到沙枣树叶乙酸乙酯提取物、沙枣树叶正丁醇提取物和沙枣树叶水提取物;用体外α-葡萄糖苷酶抑制模型,对3种沙枣树叶提取物进行α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选,并与阳性对照药阿卡波糖进行比较。采用腹腔注射四氧嘧啶构建糖尿病动物模型,造模成功后,将糖尿病小鼠分为模型对照组、二甲双胍处理组、新疆沙枣树叶乙酸乙酯提取物和水提取物处理组,另设正常对照组。连续灌胃给药18 d,每天一次,采血测空腹血糖。结果表明,新疆沙枣树叶的3种提取物对α-葡萄糖苷酶的活性有较好的抑制作用,有2个提取物的抑制率明显高于阿卡波糖,其中新疆沙枣树叶乙酸乙酯提取物活性最强,在浓度为0.075 g/L时,其酶抑制率为76.62%。阿卡波糖及3种提取物对α-葡萄糖苷酶抑制作用的IC_(50)分别为阿卡波糖IC_(50)891.38 mg/L,沙枣树叶乙酸乙酯提取物IC_(50)9.28mg/L,沙枣树叶正丁醇提取物IC_(50)103.5 mg/L,沙枣树叶水提取物IC_(50)73.99 mg/L。结果显示,新疆沙枣树叶提取物对四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的血糖有降低的作用,和对照组比较有显著差异(P0.05)。新疆沙枣树叶提取物能显著抑制α-葡萄糖苷酶活性,对糖尿病小鼠具有降糖作用。     

两粤黄檀体外抗氧化及α-葡萄糖苷酶抑制活性研究

研究了两粤黄檀茎不同溶剂(95%乙醇、丙酮、乙酸乙酯)提取物的抗氧化和α-葡萄糖苷酶抑制活性。采用清除DPPH自由基、清除ABTS+自由基和铁离子(Fe2+)还原能力检测体外抗氧化活性;体外建立酶反应体系,以pNPG作为底物,检测其α-葡萄糖苷酶抑制活性。结果表明,两粤黄檀茎乙酸乙酯提取物具有优异的抗氧化能力及α-葡萄糖苷酶抑制活性,两粤黄檀茎乙酸乙酯提取物具有作为天然抗糖尿病药物研究和开发的潜力。     

气相色谱-质谱法分析蜂胶与杨树胶化学组分及鉴别研究

以气相色谱-质谱联用仪分别对蜂胶和杨树胶的化学组分进行了分离鉴定,共鉴定出75种物质。初步确定两种样品中2,6-二羟基-4-甲氧基查耳酮、高良姜素和柚木柯因的含量有明显差异,而且仅在杨树胶中发现了愈创木醇、1-甲基-4-(6-甲基-5-庚烯-2-基)苯、2-苯基苯并咪唑。结果表明,可将上述物质作为蜂胶中的标志性物质进行检测与辨别。     

虎杖对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

[目的]筛选虎杖（Polygonum cuspidatum Sieb.et Zucc.）α-葡萄糖苷酶抑制活性物质。[方法]对中药虎杖的α-葡萄糖苷酶抑制活性进行测定,并对其活性物质进行了初步分离。[结果]虎杖水提物浓度为50 mg（生药）/ml时,对α-葡萄糖苷酶活性的抑制率达68.5%,IC50约为37 mg/ml。虎杖水提物是α-葡萄糖苷酶的非竞争性抑制剂,抑制常数Ki为33 mg/L。采用层析分离得到了虎杖α-葡萄糖苷酶抑制剂,初步鉴定为多糖物质。[结论]该研究为植物源α-葡萄糖苷酶抑制剂的开发奠定了基础,对发现高效、安全的降低餐后血糖新药物具有重要作用。     

大孔树脂纯化桑葚渣中α-淀粉酶抑制剂的工艺优化及其活性成分研究

以桑葚渣为原料,研究了桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂的分离纯化方法及其成分。以α-淀粉酶抑制率为指标,对比了5种树脂(AB-8、S-8、D101、NKA-9和HZ-806)对桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂静态吸附和解吸的影响,从而筛选出适于分离α-淀粉酶抑制剂的大孔树脂;以此为基础,对桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂的分离、纯化参数,如上样流速、洗脱剂体积分数、洗脱剂流速进行优化;利用高相液相色谱分析不同体积分数(10%、30%、50%、70%、90%)乙醇洗脱液中的成分,以期探明桑葚渣中具有α-淀粉酶抑制活性的成分。结果表明:AB-8大孔树脂适于分离桑葚渣水提液中α-淀粉酶抑制剂,分离纯化最佳工艺为上样流速12 mL·min~(-1),70%体积分数乙醇溶液作为洗脱剂,洗脱剂流速24 mL·min~(-1)。通过分析不同体积分数乙醇洗脱液中的物质组成及其对α-淀粉酶的抑制活性发现,槲皮苷的质量浓度变化与洗脱液对α-淀粉酶的抑制率呈相似趋势,推测其可能是桑葚渣水提物中α-淀粉酶抑制活性的主要贡献因子。     

余甘子主要活性成分柯里拉京对 α-葡萄糖苷酶的抑制活性

前期从余甘子中分离鉴定了一系列对α-葡萄糖苷酶有较好抑制活性的没食子单宁成分,柯里拉京为其中的1个主要活性成分,本试验进一步对柯里拉京抑制α-葡萄糖苷酶活性的作用机制进行了研究。采用体外微量96孔板α-葡萄糖苷酶-PNPG反应模型测定了柯里拉京对α-葡萄糖苷酶的抑制活性,并进行了抑制动力学试验,以非线性拟合法分析了其对α-葡萄糖苷酶的抑制动力学参数,同时采用分子对接模型研究了柯里拉京与α-葡萄糖苷酶相互作用的机制。结果表明,柯里拉京对α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度IC_(50)为15.33μmol/L,显著低于阳性对照阿卡波糖的IC_(50)(79.88μmol/L);非线性拟合结果发现,柯里拉京对α-葡萄糖苷酶的抑制作用为混合型抑制;氢键是柯里拉京与α-葡萄糖苷酶之间相互结合的主要作用力。结果为柯里拉京作为降糖保健品或药品开发提供了理论依据。     

响应面优化南极磷虾粉肽制备工艺及α-葡萄糖苷酶抑制活性分析

该研究以南极磷虾粉为原料,α-葡萄糖苷酶抑制率为指标,在确认最佳生物酶的基础上,通过单因素实验和响应面优化酶解工艺条件,并用超滤和G-25进行分离纯化,凝胶色谱法探究酶解液和多肽的分子量及其分布情况。结果表明：复合蛋白酶酶解效果最佳;最佳酶解条件为酶解时间5.9 h、料液比3.75:1、酶添加量0.062 g/g(原料);酶解液的分子量集中分布在3000 u以下,占98.63%;经超滤C4（<3 ku）组分对α-葡萄糖苷酶抑制率IC50为（14.89±2.15） mg/mL;G-25纯化C4-2组分对α-葡萄糖苷酶抑制率IC50为（4.64±0.15） mg/mL。C4-2组分中<1000 u的多肽占97.6%,其中C4-2-1、C4-2-2、C4-2-3的分子量分别为597 u、335 u、246 u。本文第一次研究了南极磷虾粉制备α-葡萄糖苷酶抑制活性肽的方法,为南极磷虾资源的综合利用提供了依据。     

柱层析法分离纯化血橙花色苷

 【目的】研究适合分离纯化血橙花色苷的柱层析法,并对血橙中的花色苷进行初步鉴定。【方法】分别采用12种不同类型树脂对血橙花色苷静态和动态吸附解吸试验进行比较,优化了大孔树脂提取分离血橙花色苷的工艺,采用Toyopearl TSK HW-40S柱层析对血橙花色苷提取物进一步分离纯化。同时,利用高效液相色谱-电喷雾质谱联用（HPLC-ESI/MS）对血橙花色苷进行定性分析。【结果】大孔树脂NKA-9对血橙花色苷的分离效果最好,最佳工艺条件为：50%乙醇用柠檬酸调pH为2.5时洗脱效果最好;Toyopearl TSK HW-40S柱层析分离纯化条件为：35%甲醇（经2%甲酸酸化）为洗脱液,流速0.6 ml?min-1,可得到3个单一花色苷组分和1个混合花色苷组分。HPLC-ESI/MS分析表明,血橙花色苷主要是为矢车菊素-3（3″-丙二酰）葡萄糖苷和矢车菊素-3（6″-二乙二酰）葡萄糖苷（组分1）,矢车菊素-3-葡萄糖苷（组分2）,矢车菊素-3（6″-丙二酰）葡萄糖苷（组分3）及矢车菊素-3-葡萄糖苷加成物4-乙烯基儿茶酚（组分4）。【结论】NKA-9大孔树脂与Toyopearl TSK HW-40S凝胶柱层析相结合,可以有效分离纯化血橙中花色苷,HPLC-ESI/MS分析可以方便、快捷、有效地为花色苷的鉴定提供依据。     

高良姜提取物的降血糖活性

利用α-葡萄糖苷酶抑制活性筛选对海南产高良姜的不同提取部位及其主要化学成分进行降血糖活性测试。结果表明,高良姜的根茎、花、果实和茎叶的乙醇提取物及其主要成分高良姜素、山奈素、异鼠李素和槲皮素对α-葡萄糖苷酶的抑制活性显著高于阳性对照药阿卡波糖。     

嘉宝果果皮多酚提取工艺优化及生物活性测定

以嘉宝果果皮为原料,在单因素试验的基础上采用L9(34)正交试验设计,优化嘉宝果果皮多酚提取工艺,并测定提取物清除·OH、DPPH·和ABTS+自由基的能力以及体外对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性.结果表明,嘉宝果果皮多酚提取的最佳工艺为乙醇体积分数70％、时间50 min、温度70℃、料液比1 g:50 mL,此条件下嘉宝果果皮多酚的提取率可达10.10％.优化提取后的嘉宝果果皮提取物对·OH、DPPH·和ABTS+自由基的EC50值分别为0.506、0.052、0.437 mg/mL,对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的IC50值分别为0.003、1.348 mg/mL,说明嘉宝果果皮具有良好的抗氧化及体外降糖活性,可作为功能活性成分开发应用.     

杜仲叶绿原酸总黄酮的分离纯化及检测

对杜仲叶中绿原酸、总黄酮的大孔树脂分离工艺进行研究,并采用高效液相色谱对纯化产物进行检测,从9种大孔树脂中筛选出NKA-Ⅱ为最优树脂,最佳的吸附解吸条件为上柱液pH值为4,流速1.0mL/min,用30%乙醇洗脱杜仲叶中绿原酸,50%～70%乙醇洗脱杜仲叶中黄酮类物质.杜仲叶粗提物依次经过NKA-Ⅱ大孔树脂、聚酰胺树脂和Sephadex LH-20树脂的分离纯化,最终得到4种组分,经高效液相色谱检测分析,可能为绿原酸、金丝桃苷或陆地锦苷、槲皮素-乙酰糖苷和槲皮素.     

粘细菌BD105产生的抑瘤活性物质的分离制备

从河北省微生物多样性研究与重点实验室保存的具有抑瘤活性的粘细菌BD105菌株中分离纯化了抑制人宫颈癌细胞的活性物质。应用分析型高效液相色谱对BD105菌株的发酵产物甲醇粗提液进行梯度洗脱,确定混合发酵产物的最适分离条件,再运用制备型高效液相色谱对不同组分进行分离,大量发酵后制备得到组分I（浅黄色粉末状化合物）。应用MTT法对得到的活性组分进行体外抗癌细胞活性检测,发现组分I对人宫颈癌细胞最高抑制活性达91.785%,体内动物实验也显示出高效低毒的生物活性。     

马齿苋活性成分中α-葡萄糖苷酶抑制剂的筛选

[目的]观察马齿苋活性成分对兔小肠黏膜α-葡萄糖苷酶活性的影响,筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂。[方法]提取分离马齿苋活性成分,在体外建立微量酶反应体系,pNPG作为底物,以阿卡波糖为参照,检测马齿苋活性成分对α-葡萄糖苷酶活性的影响。[结果]马齿苋总提取液、粗多糖和总生物碱对α-葡萄糖苷酶具有明显抑制作用,抑制效果接近于阿卡波糖,不饱和脂肪酸和总黄酮无抑制作用。[结论]马齿苋防治糖尿病的主要成分是生物碱和多糖,可能具有阿卡波糖样的降糖机制。     

灰树花醇提物对α-葡萄糖苷酶和EV71的抑制作用及其活性成分分析

为了探明灰树花的降血糖与抗病毒作用,以及发挥活性作用的潜在活性物质,采用70%乙醇超声提取灰树花,依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3种不同极性溶剂对其提取物进行分步萃取,分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水溶物,测定其对α-葡萄糖苷酶和肠道病毒71型(EV71)的抑制作用.结果显示正丁醇萃取物对α-葡萄糖苷酶和EV71的抑制作用强于其他萃取物,其半抑制浓度分别为(174.12±10.67)、(84.41±5.12)μg·mL^-1.利用超高效液相色谱质谱联用和分子对接技术发现,正丁醇萃取物中含量较高(11.58%)的亚油酸甲酯可通过与α-葡萄糖苷酶和EV71表面活性位点相结合而发挥活性作用.     

油梨和羊奶果果肉粗提物对α-葡萄糖苷酶的体外抑制

收集不同油梨和羊奶果资源,对油梨和羊奶果果肉粗提物进行α-葡萄糖苷酶的体外抑制活性实验。结果表明:16份油梨果肉对α-葡萄糖苷酶抑制活性较弱,而9份羊奶果果肉对α-葡萄糖苷酶抑制活性较强,其中羊奶果6号对α-葡萄糖苷酶抑制活性最强,达到99.84%,仅次于阿卡波糖。     

观光木叶黄酮类物质纯化、化学成分及抗氧化活性研究

采用D101大孔树脂对观光木叶进行柱层析,提取黄酮类物质;先后用10%、30%、50%和70%乙醇/水进行梯度洗脱,得到4个洗脱组分,测定了各个组分的总黄酮含量;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-连氮-2-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的清除实验评价了各组分黄酮的抗氧化活性;使用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用(UPLC-Q-EXCTIVE-MS)技术对纯化后黄酮纯度最高的组分进行了成分鉴定。结果表明:观光木叶乙醇提取物经过D101大孔树脂分离后,黄酮类物质主要聚集在30%乙醇/水洗脱组分,黄酮纯度为28.40%,并且对DPPH和ABTS的清除能力最强,清除率分别达到87.22%和99.07%,半抑制浓度(IC_(50))分别为112.753和65.528 mg/L;从30%乙醇/水洗脱组分中初步鉴定了7个黄酮类化合物,分别为3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、酮洛芬、白麻苷、三叶豆苷、假荆芥属苷、射干苷、川陈皮素。     

观光木叶黄酮类物质纯化、化学成分及抗氧化活性研究

采用D101大孔树脂对观光木叶进行柱层析,提取黄酮类物质;先后用10％、30％、50％和70％乙醇/水进行梯度洗脱,得到4个洗脱组分,测定了各个组分的总黄酮含量;采用1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)和2,2-连氮-2-(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)的清除实验评价了各组分黄酮的抗氧化活性;使用超高效液相色谱串联四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱仪联用(UPLC-Q-EXCTIVE-MS)技术对纯化后黄酮纯度最高的组分进行了成分鉴定.结果表明:观光木叶乙醇提取物经过D101大孔树脂分离后,黄酮类物质主要聚集在30％乙醇/水洗脱组分,黄酮纯度为28.40％,并且对DPPH和ABTS的清除能力最强,清除率分别达到87.22％和99.07％,半抑制浓度(IC50)分别为112.753和65.528 mg/L;从30％乙醇/水洗脱组分中初步鉴定了7个黄酮类化合物,分别为3,5,6,7,8,3',4'-七甲氧基黄酮、酮洛芬、白麻苷、三叶豆苷、假荆芥属苷、射干苷、川陈皮素.     

鬼针草不同溶剂萃取物的总黄酮含量及抗氧化、酶抑制活性

测定鬼针草不同溶剂萃取物总黄酮类含量,研究其体外抗氧化活性及α-葡萄糖苷酶、α-淀粉酶抑制作用。鬼针草水提醇沉后用不同极性溶剂进行萃取,测定各提取物的总黄酮含量,采用DPPH和超氧阴离子法测定各提取物的抗氧化活性及对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并利用液相质谱联用法对乙酸乙酯提取物中的黄酮类化合物进行分析。分析结果,鬼针草乙酸乙酯和正丁醇提取物的总黄酮含量明显高于其他提取物,氯仿、乙酸乙酯和正丁醇萃取物具有较强的抗氧化活性。乙酸乙酯和正丁醇萃取物对α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶均具有较强的抑制作用。其中乙酸乙酯萃取物中含有芹菜素、柚皮素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草苷和木犀草素等黄酮类成分。结果表明,鬼针草有机溶剂萃取物具有明显的抗氧化活性和α-淀粉酶及α-葡萄糖苷酶抑制作用,其中黄酮类化合物可能是其生物活性的主要物质基础。     

抑制α-葡萄糖苷酶活性乳酸菌筛选与鉴定

[目的]从传统发酵食品中筛选一株具有抑制α-葡萄糖苷酶活性特性的乳酸菌。[方法]采用α-PNPG平板法筛选具有抑制α-葡萄糖苷酶活性特性的乳酸菌,通过16S rDNA测序分析及生理生化试验进行鉴定。[结果]确定其为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)。对该菌发酵豆浆前后糖尿病重要指标α-葡萄糖苷酶抑制活性进行了检测,α-葡萄糖苷酶抑制活性的IC_(50)为1.88mg/mL,比空白对照降低了26.06%。[结论]得到了一株具有抑制α-葡萄糖苷酶活性特性的乳酸菌。     

大孔树脂纯化金银花总黄酮及其对α-葡萄糖苷酶抑制活性的研究

为进一步开发和利用金银花资源,筛选出降血糖的活性成分,比较了五种大孔树脂对金银花总黄酮的静态吸附-解吸性能,优选出NKA-2大孔树脂,并对其动态的纯化工艺条件进行探讨;采用不同极性有机溶剂对NKA-2大孔树脂纯化后的金银花总黄酮进行萃取,测定了各相萃取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性。结果表明:NKA-2大孔树脂优化的动态工艺参数为上样液质量浓度1.12 mg/m L、上样液体积50 m L、上样流速3 BV/h、洗脱剂乙醇体积分数70%、洗脱液体积160 m L、洗脱流速3 BV/h;在此优化条件下,金银花总黄酮的平均纯度和平均得率分别达到86.3%和5.12%;金银花总黄酮各相萃取物质量浓度与α-葡萄糖苷酶的抑制率具有正相关性,但是在相同质量浓度下,乙酸乙酯相萃取物对α-葡萄糖苷酶具有最强的抑制率。经过NKA-2大孔树脂纯化后的金银花总黄酮,其乙酸乙酯相萃取物具有良好的药用开发价值。