大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆种子经过浸提、离心、硫酸铵逐级沉淀和D-半乳糖-Epoxy-Sepharose-4B亲和层析,获得单一的大豆凝集素(Soybean agglutinin SBA)样品。纯化的大豆凝集素经pH8.9的聚丙烯酰胺凝胶电泳(胶浓度7.5%),可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中,采用2%兔细胞悬液,测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞的凝集作用的影响。结果表明,使兔红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg/mL左右。浓度为0.1mg/ml凝集素溶液分别与D-半乳糖、D-氨基半乳糖、异丙基--βD-硫代半乳糖苷(IPTG)、а—乳糖、几丁质溶液结合后,使兔红细胞50%凝集的糖配体溶液浓度分别为1mg/ml、2.5mg/ml、10mg/ml3、0 mg/ml,而几丁质几乎对SBA没有影响。     

大豆凝集素的分离纯化和血凝活性研究

大豆种子经过浸提、离心、硫酸铵逐级沉淀和D-半乳糖-Epoxy-Sepharosc-4B亲和层析,获得单一的大豆凝集素（Soybean agglutinin SBA）样品。纯化的大豆凝集素经pH8．9的聚丙烯酰胺凝胶电泳（胶浓度7．5％）,可以显示一条清晰的着色带。在血凝活性鉴定中,采用2％兔细胞悬液,测定凝集红细胞的能力和检测它们与糖结合后对红细胞的凝集作用的影响。结果表明,使兔红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg／mL左右。浓度为0．1mg／ml凝集素溶液分别与D-半乳糖、D-氨基半乳糖、异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）、a-乳糖、几丁质溶液结合后,使兔红细胞50％凝集的糖配体溶液浓度分别为1mg／ml、2．5mg／ml、10mg／ml、30mg／ml,而几丁质几乎对SBA没有影响。     

体外培养猪小肠上皮细胞大豆凝集素结合位点的标记

本研究旨在获得体外培养状态下的猪小肠上皮细胞,研究猪小肠上皮细胞与大豆凝集素的结合情况.选取新生未哺乳健康仔猪,取小肠组织对小肠上皮细胞进行分离培养,并进行纯化.纯化后的细胞以角蛋白抗体-8为—抗进行细胞免疫化学试验鉴定,鉴定后的猪小肠上皮细胞以FITC-SBA为探针进行细胞凝集素荧光标记化学试验,对猪小肠上皮细胞大豆凝集素结合位点进行标记.结果表明:试验分离纯化的细胞经角蛋白抗体-8鉴定为阳性,所分离纯化的细胞为猪小肠上皮细胞,经检测其纯度达90％以上,猪小肠上皮细胞FITC-SBA标记结果为阳性.体外培养的猪小肠上皮细胞表面存在大量的大豆凝集素结合位点,进一步明确了猪小肠上皮细胞是大豆凝集素结合的主要细胞类型之一,为单胃动物大豆凝集索抗营养机制研究提供理论依据.     

大豆凝集素在不同种属动物小肠中残留、结合和内吞特点的比较研究

选取5种动物为试验对象,生理年龄均在1/2性成熟期,每种动物4头,猪(长白,70 d)、羊(小尾寒羊,60 d)、狗(比格犬,80 d)、兔(日本大耳白,75 d)和鸡(爱拔益加,75 d)。采用体内原位结扎灌注肠段的方法研究不同浓度大豆凝集素(SBA)在不同种属动物小肠中的残留、结合和内吞特点。动物禁食24 h后,注入麻醉剂,剪去腹部体毛,打开腹腔,结扎空肠前段,(各种动物以空肠前段1/3处相对位置开始结扎)。用30 m L(39±1)℃的生理盐水冲洗隔离的肠段,以冲洗肠段内残余的食糜,分别结扎4段5 cm长的肠段,用注射器分别输入含不同浓度SB(A 0、0.5、1.0 m g/m L和3.0 m g/m L)的Krebs液。灌注时间8 h。试验结束后,采用间接抑制ELISA方法检测3个指标:灌注液中SBA的残留率,肠黏膜表面SBA的结合率,进入小肠壁的SBA的内吞率。结果表明:大豆凝集素在动物小肠中的结合特点存在种属差异;比较而言,SBA在猪和狗小肠中的内吞率和结合率高于羊,兔和鸡的内吞率也较大,且SBA的不同浓度对其在小肠壁上的内吞也有较大影响,低浓度时SBA的结合率和内吞率较大。     

对FC株猪源性肠毒素型大肠杆菌致病因子的研究

FC菌株是一株从腹泻仔猪粪便中分离的肠毒素型大肠杆菌(Enterotoxigenic E.coli,ETEC)。在MRHA反应中,本菌能凝集人O型、豚鼠、马、绵羊、牛、鸡和兔的红细胞,对人O型和豚鼠红细胞有很高的血凝性,血抗K88和K99血清不能抑制其对豚鼠和绵羊红细胞的血凝。在体外小肠上皮细胞吸附试验中,本菌对仔猪小肠上皮细胞具有强烈的吸附作用;透射电镜和扫描电镜观察证实了FC株菌除表面具有一种纤毛样结构外,还能定居在仔猪小肠段。血清学试验结果表明,本菌的O抗原属于O101。K88和987P两种抗血清均不能凝集本菌,而K99和F41抗血清均可凝集。对纯化的FC株菌粘着素抗原作等电聚焦和聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,结果表明,该菌的粘着素是由等电点分别为4.61和9.78,分子量分别为29500和17500的两种蛋白质抗原所组成。此外,用乳鼠胃内投服试验和兔肠结扎试验证明,该菌只产生热稳定肠毒素。总之,本菌是一株能产生ST的K99,F41的肠毒素型大肠杆菌。     

鸡传染性支气管炎病毒血凝谱的研究

用家兔A型魏氏梭菌培养液处理的6株鸡传染性支气管炎病毒,以方阵试验分别与人O型红细胞及羊、猪、兔、鸡、鸭、鹌鹑、麻雀、小鼠等8种动物的红细胞作血凝试验,结果证明,鸡传染性支气管炎病毒H_(120)株和M_(41)株均能凝集人O型以及羊、猪、兔、鸡、鸭、鹌鹑、小鼠的红细胞,而不能凝集麻雀的红细胞;GIBV株和Connecticut株能凝集人O型以及免、鸡、鹌鹑、麻雀的红细胞,而不能凝集猪、羊、鸭、小鼠的红细胞;Gray株能凝集兔、鸡、鹤鹑的红细胞,不能凝集人O型以及猪、羊、鸭、麻雀、小鼠的红细胞;而经家兔A型魏氏梭菌培养液处理的T株和未经处理的6株病毒对人O型以及8种动物的红细胞都没有凝集性。试验还证明,M_(41)株和H_(120)株对人O型及8种动物的血凝活性水平有差异。     

大豆凝集素(SBA)对动物的抗营养作用

大豆凝集素(SBA)能与肠道上皮细胞特异性结合,这样的结合直接影响小肠的结构、功能,从而影响动物对日粮中营养物质的消化吸收,对动物生长有一定的抑制作用。同时SBA对肠道黏膜免疫系统、肠道菌群、及内脏器官等有不同程度的影响。     

饲料中的抗营养因子--植物凝集素的快速检测

植物凝集素 (ｌｅｃｔｉｎ)是一种广泛存在于各种植物性饲料及其原料中的抗营养因子 ,采食过量时动物表现为日增重减少 ,饲料利用率下降 ,并影响免疫系统功能。由于ｌｅｃｔｉｎ具有凝集兔或人等红细胞的能力(凝集作用是凝集素与细胞表面的糖分子结合在细胞表面形成许多交叉的“桥”的结果 ) ,且凝集效价与ｌｅｃｔｉｎ的量成线性关系 ,因此可以利用凝血反应测定其凝集效价 ,然后通过对标准品与待测样品的凝集效价的比较对ｌｅｃｔｉｎ进行定量检测。试验以大豆凝集素 (ＳＢＡ)为研究对象 ,建立了实验室快速检测ＳＢＡ的方法—血凝法。1　材…     

EDS—BH91毒株血凝特性的研究

本试验主要从红细胞凝集谱、凝集解脱情况以及血凝性的影响因素几方面对本室分离的ＥＤＳ－ＢＨ９１毒株和ＥＤＳ－７６ＡＶ１２７毒株进行了比较系统的测定。试验结果表明：两毒株均能凝集鸡、鸭、鹅的红细胞，而且２４小时内无解脱现象；对兔红细胞呈可疑；对人、奶牛、绵辜、猪、小鼠、驴的红细胞不能凝集。血凝反应的最适温度产３７℃；最适红细胞浓度为１％；分别以ｐＨ７．４，浓度为０．０１、０．０４、．０．１、０．２Ｍ以     

牛红细胞膜与大豆凝集素特异结合蛋白的分离与鉴定

为了分离鉴定红细胞膜上能与大豆凝集素特异结合的蛋白质,本试验以荷斯坦奶牛的红细胞和大豆凝集素(SBA)纯品作为实验材料,采用低渗溶血的方法提纯红细胞膜,EP-40裂解红细胞膜蛋白,通过免疫共沉淀(Co-IP)获得能与大豆凝集素特异结合的蛋白,最后用液相色谱-质谱/质谱(LC-MS/MS)联用的方法筛选出15类可能与大豆凝集素结合的蛋白,其中以骨架蛋白为主,还包括一些催化酶类蛋白和功能调节蛋白。结果为进一步研究大豆凝集素的凝血机理提供理论依据。     

猪子宫大豆素(SBA)受体细胞和肥大细胞观察

本研究用HRP—SBA标记技术、甲苯胺染色法及甲苯胺蓝和HRP—SBA双重染色技术,观察了猪子宫大豆素(SBA)受体细胞和肥大细胞.发现SBA受体细胞和肥大细胞,形态相似,但两者在子宫壁内的分布和数量不同.双重染色证明,SBA受体细胞和肥大细胞是存在猪子宫内膜的不同细胞.     

哺乳动物体细胞核移植中供体细胞的研究进展

本文对哺乳动物核移植供体细胞的研究进展进行了综述。主要涉及细胞类型、细胞年龄和细胞所处的周期时相对核移植胚胎发育的影响，以及目前核移植技术存在的问题等。     

不同细胞培养基细胞培养动力学比较试验

应用宜兴赛尔生物化工厂产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基与美国Ｓｉｇｍａ公司产１９９、Ｆ－１０、１６４０和ＤＭＥＭ细胞培养基分别配制细胞培养液，培养ＳＰ２／０和Ｖｅｒｏ细胞系及原代鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ），做细胞培养动力学比较试验。比较这两种来源的细胞培养基对细胞生长的形态、分裂速度及鸡马立克氏病毒（Ｍａｒｅｋ＇ｓｄｉｓｅａｓｅｖｉｒｕｓ．ＭＤＶ）疫苗毒株ＨＶＴ－ＦＣ１２６和ＲｉｓｐｅｎｓＣＶＩ９８８在ＣＥＦ单层上增殖量的差异。研究结果表明，四种国产细胞培养基与对应的四种进口培养基对细胞生长及病毒增殖的影响无显著差异     

血细胞免疫研究进展

综述红细胞和白细胞免疫研究进展 ,对于进一步了解血细胞在正常的生理活动中和一些疾病的病理生理发展过程中的作用以及探讨血细胞的免疫调节机制有一定的启发。     

干细胞研究的新进展

近年来 ,干细胞因其自身的许多特性成为生命科学的研究热点。干细胞能够自我更新和多向分化的生物学特性 ,具有重要的医学价值 ,在基因治疗、组织工程学、药学研究等许多领域都具有广泛的应用。而且干细胞的研究对于科学家重新认识细胞生长、分化、生物发育机制等基本生命规律也将起到重大作用。虽然干细胞的研究已取得许多重大的研究进展 ,并展现出诱人的应用前景 ,但仍存在不少技术难题有待于进一步的研究。文章就干细胞的概念、特性、主要研究领域的最新进展、研究存在的问题及其应用前景作一概述     

胰高血糖素样肽-2促进细胞增殖、抑制细胞凋亡的分子机制

胰高血糖素样肽-2(GLP-2)是近年发现的一种由肠道L细胞分泌的功能性小肽,对胃肠道具有特异性的调节功能,能通过刺激肠细胞的增殖,抑制肠细胞凋亡和水解而增加肠绒毛高度、黏膜厚度及肠道重量等,进而影响肠道正常的结构和功能.GLP-2对肠细胞增殖、凋亡的调节涉及多种细胞信号传导途径,主要有G蛋白偶联的环化一磷酸腺苷/蛋白激酶A(cAMP/PKA)或磷脂酰肌醇-3激酶/Akt(PI-3K/Akt)途径、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)参与的Wingless(Wnt)/β-连环蛋白(β-catenin)途径、酪氨酸蛋白激酶介导的细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)等信号通路,其中以G蛋白偶联的信号途径为主要途径.这些途径相互协调,共同调控肠上皮细胞的稳态发育和肠道适应.本文将对GLP-2影响细胞增殖、凋亡的分子机制作一综述,为深入认识GLP-2的作用机理提供参考.     

动物体细胞克隆技术的研究进展

体细胞克隆绵羊“多莉”(Dolly)的诞生,表明成年哺乳动物体细胞具有基因组的全能性。本文从“多莉”诞生的背景、体细胞克隆技术的研究现状、体细胞核移植过程中的核质互作、该技术目前存在的问题及其在制作转基因动物上的应用等方面,概述了体细胞克隆技术的研究进展。     

肥大细胞的异质性

肥大细胞广泛分布于人和多种动物体内，分为粘膜肥大细胞和结缔组织肥大细胞两个亚群。在不同种属、同一种属的不同个体、同一个体不同部位的肥大细胞都存在着异质性。本文从肥大细胞的分布、形态结构（显微结构、超微结构）、组织化学特征、功能等方面论述了肥大细胞的异质性。     

鸡胚骨骼肌细胞增殖和融合培养模型的建立

本实验建立了鸡胚骨骼肌细胞增殖和融合培养模型,增殖和融合培养液分别为添加5％胎牛血清(FCS)和添加10％FCS+0．5％鸡胚浸出液的DMEM培养液。结果表明:培养的骨骼肌细胞增殖和融合情况良好,可存活1周以上。胰岛素(INS,10-1 000 ng/mL)处理48 h显著促进骨骼肌细胞增殖,而100-1000 ng/mL INS处理96 h可显著促进骨骼肌细胞融合。该模型可用来研究激素、生长因子或营养物质对骨骼肌细胞增殖和分化的影响。