云南省紫茎泽兰根结线虫病病原种类鉴定

为明确云南省紫茎泽兰根结线虫病的病原种类,于2019年2月在云南省澜沧县林下三七种植区采集根部带有明显根结的紫茎泽兰根系进行根结线虫分离,通过观察所分离根结线虫的2龄幼虫、雌成虫、会阴花纹特征对其进行形态学鉴定,并利用序列比对、系统发育树分析、序列特异性扩增区段(sequence characterized amplified region,SCAR)对其进行分子生物学鉴定。结果表明,该病原线虫雌成虫会阴花纹呈圆形至卵圆形,背弓中等高或低平,侧区一侧或两侧延伸形成翼状,尾区有刻点,2龄幼虫、雌成虫形态特征及形态测量指标与北方根结线虫Meloidogyne hapla相似;该病原线虫rDNA的ITS序列和mtDNA的COI序列与NCBI数据库中已登录的北方根结线虫相应序列相似度较高,分别达99.35%和98.05%以上;该病原线虫rDNA的ITS序列、mtDNA的COI序列分别以99%、100%的支持率与北方根结线虫聚为同一分支;利用SCAR特异性引物,该病原线虫均能扩增出大小约1 500 bp的基因特异性条带。综合形态学和分子生物学鉴定结果将云南省紫茎泽兰根结线虫病病原种类鉴定为北方根结线虫。     

8批调运入京草莓种苗根结线虫病的病原鉴定

对调入北京的草莓种苗根结线虫病的为害症状及病原进行了观察和鉴定,其症状为草莓种苗根部有明显而密集的根结,直径1~3 mm。通过根结长度百分数分级法明确根结指数为55.42;通过雌虫显微形态观察以及ITS序列测定,初步明确病原物为北方根结线虫(Meloidogyne hapla)。     

四川省茂县花椒根结线虫病病原鉴定

为明确四川省茂县花椒根结线虫的种类,通过根结线虫雌虫和2龄幼虫的形态特征及雌成虫的会阴花纹、雌虫酯酶同工酶及分子生物学检测（rDNA-ITS区和rRNA-IGS区）,对花椒根结线虫进行了种类鉴定。三种方法的结果均表明在茂县地区花椒上发现的根结线虫为北方根结线虫（Meloidogynehapla）,这是我国首次报道在花椒上发现北方根结线虫病,四川省是北方根结线虫新的分布区。     

甘肃省黄芩根结线虫病病原种类鉴定

通过形态学与分子生物学相结合的方法对引起甘肃省陇西县黄芩根结线虫病的病原种类进行了鉴定,并采用室内人工接种的方法测定其对黄芩的致病性。结果表明,从黄芩根系分离的根结线虫其形态特征及测量值与北方根结线虫Meloidogyne hapla基本一致。该线虫种群rDNA-ITS和28S rDNA D2/D3序列与NCBI数据库中的北方根结线虫序列相似性分别为99.60%和99.74% (rDNA-ITS: JX024147; 28S rDNA D2/D3: MW288147)。贝叶斯系统发育树显示,该线虫群体与其他北方根结线虫群体聚为一支,置信度在95%以上。利用北方根结线虫特异性引物Mh-F/Mh-R扩增并测序得到457 bp的特异性片段。因此,基于形态学结合rDNA-ITS、28S rDNA D2/D3序列和特异性片段长度,将黄芩根结线虫病病原鉴定为北方根结线虫M.hapla。接种该线虫后的黄芩生长缓慢,叶片黄化,40 d后须根上有明显的根结。经分离鉴定,致病群体为北方根结线虫。综上所述,甘肃省陇西县黄芩根结线虫病病原为北方根结线虫M.hapla,该线虫对黄芩具有较强的致病性,其繁殖系数为1.997。     

香蕉根结线虫病及其病原鉴定

香蕉根结线虫病在福建省香蕉种植区发生较普遍,1988年在南靖县金山乡调查,发生面积占当地蕉园总面积的64％,平均株发病率为53.4％,严重度一般为3～4级。香蕉根结线虫病在我国除台湾省外,其他地区尚未见报道。为此,我们对病害症状和病原线虫种进行了观察研究。     

甘肃省党参根结线虫病发生、分布及病原种类鉴定

为明确甘肃省党参根结线虫病的发生、分布及病原种类,在甘肃省党参主产区调查、统计田间根结线虫病发生情况,并通过形态学和分子生物学方法进行种类鉴定。结果表明,甘肃省6个党参主产区均有根结线虫病发生,病田率、病株率分别为40.7%、13.2%,病情指数为10.4。依据根结线虫各虫态的形态测量值和雌虫会阴花纹等特征,将危害党参的根结线虫初步鉴定为北方根结线虫Meloidogyne hapla Chitwood, 1949。rDNA-ITS区段和28S rDNA D2D3区段序列比对和系统发育树显示,6个根结线虫群体无核苷酸差异,与多个北方根结线虫聚为一支且有较高的置信度。利用特异性引物Mh-F/Mh-R扩增得到北方根结线虫的特异性片段,大小为462 bp。故综合形态学和分子生物学特征,将危害甘肃省党参的根结线虫鉴定为北方根结线虫。     

一年蓬根结线虫病的病原线虫鉴定

2021年11月在陕西省汉中市佛坪县采集到有明显根结症状的一年蓬植株样品,从其根部分离得到根结线虫雌虫,观察会阴花纹,并利用特异性引物扩增和ITS序列系统进化分析进行分子生物学鉴定。结果显示,根结线虫雌虫的会阴具有较为明显侧线,尾端具有刻点,与北方根结线虫相似。利用北方根结线虫特异性引物对分离到的线虫DNA进行扩增,能够得到610bp的特异性扩增条带。系统进化分析显示分离到的线虫ITS序列与NCBI数据库中已报道的北方根结线虫相应序列聚为一支。一年蓬根结线虫病在我国为首次报道,而侵染佛坪县一年蓬的根结线虫为北方根结线虫。     

甘肃河西地区番茄根结线虫病病原鉴定

利用形态特征对甘肃省河西地区番茄根结线虫病病原线虫进行鉴定,其重要的形态特征如下：雌虫体长L=599.0（510.0～690.0）μm,体宽W=439.0（409.0～473.0）μm,口针长ST=15.4(15.0～16.0)μm,背食道腺开口到口针基部球的距离DGO=3.6(2.0～4.3)μm。雌虫梨形,排泄孔位于口针基球处,会阴花纹背弓明显高,线纹由平滑到波浪状,有些线纹向侧面分叉,但无明显的侧线;2龄幼虫L=376.0（360.0～393.0）μm,W=14.8（14.2～15.2）μm,ST=11.7(11.2～12.5)μm,DGO=3.6(2.1～4.0)μm,头部前端平,口针基部球明显,半月体邻近分泌和排泄孔,尾透明且纤细,尾尖尖圆;雄虫L=1 411.0（532.0～1 720.0）μm,W=32.0（28.0～38.0）μm,ST=24.5(23.0～26.0)μm,DGO=3.2(2.0～4.1)μm,头区不缢缩,有不完全的头环,没有侧唇,口针基球圆形至扁圆形。综合以上雌虫、2龄幼虫和雄虫的形态特征,确定了该地区的番茄根结线虫病病原线虫为南方根结线虫（Meloidogyne incognita）。     

新疆设施蔬菜根结线虫病发生调查及病原鉴定

对新疆蔬菜根结线虫病的发生情况进行了调查,发现蔬菜根结线虫在和田、阿克苏、库尔勒、吐鲁番、伊犁等南北疆设施蔬菜上均有分布和发生危害,露地蔬菜尚未见发生。从各发生地温室中采集14份蔬菜根结线虫样本,寄主主要是番茄,另外还有豇豆、黄瓜、生菜、香芹、苦瓜。采用形态学以及根结线虫特异性引物PCR相结合的方法进行鉴定,结果表明新疆设施蔬菜上有南方根结线虫(Meloidogyne incognita)和北方根结线虫(M.hapla)两种,优势种群为南方根结线虫。     

黄花倒水莲根结线虫病的病原鉴定

2019年在福建省多个地方发现黄花倒水莲Polygala fallax遭受根结线虫的严重侵染,为明确病原线虫种类,运用形态学、rDNA-ITS序列分析及特异引物PCR扩增的方法对分离获得的根结线虫进行种类鉴定。结果表明,该病原线虫为南方根结线虫Meloidogyne incognita。黄花倒水莲根结线虫病在我国为首次报道。     

生姜根结线虫病原鉴定及发生规律

采用田间调查、接种试验、电镜与显微镜观察以及酯酶同工酶电泳等方法,对引发生姜癞皮病的病原及发生规律进行了研究.结果表明,引起生姜癞皮病的病原为南方根结线虫Meloidogyne incognita.该病在每年6月中旬开始发生,8、9月份危害严重.病原在生姜上一年可发生完整的4代,完成1代平均约需35天.病原主要在0～40cm的土层内分布和危害,但具体分布情况依寄主生长状况而稍有差异.南方根结线虫繁殖速率受初始接种密度的影响也很大,当初始接种密度较低时,线虫繁殖速率较高,初始接种密度增大,繁殖速率降低,其平衡密度为每100g干土746.20个卵.     

大蒜鳞茎腐烂病的病原鉴定

从江苏太仓产蒜区及南京周边市场采集的病蒜上分离到 5株细菌和 3种真菌 ,经柯赫氏法则验证 ,均确定为大蒜鳞茎腐烂的病原菌。经细菌形态特征观察和生理生化性状测定结果表明 :g W、g 1属芽孢杆菌 (Bacillus spp .) ;g Y、g 2为欧文氏菌 (Erwinia spp .) ;g 3属红球菌 (Rhodococcu ssp .)。真菌的形态特征观察鉴定结果表明 :3株真菌F1、F2、F3分别属于黄青霉 (Penicillium chrysogenum Thom)、黑曲霉 (Aspergillus niger van Tiegh)和尖胞镰刀菌 (Fusarium oxysporum)     

生姜癞皮病的发生危害及病原初步鉴定

生姜癞皮病在山东7月开始发病,8月中旬至9月中旬为盛发期。病株植株矮小、茎细、分枝少,叶色变淡,根茎表皮疣裂,根系腐烂,产量品质降低。病原物为南方根结线虫。砂质土壤、连作重茬、过量施钾肥均可加重该病的发生。     

生物熏蒸用于治理蔬菜根结线虫病的研究

将甘蓝(Brassica oleracea)、芥菜(B.juncea)和雪里蕻(B.junceavar.multiceps)的叶及芥菜疙瘩(B.napifor-mis)的块根组织以3.5 kg/m²的量分别施入密封于棉纱缸中的严重感染根结线虫(Meloidogyne incognita)的土壤中,在25℃和32℃下熏蒸6 d后对活体线虫的测定结果表明,在25℃下用上述4种材料熏蒸后活体线虫数量分别比对照减少80%、85%、87%和91%。32℃下的熏蒸效果明显优于25℃下的熏蒸效果,各处理土壤中均未发现活体线虫,而无处理对照土壤中的活体线虫数量为1 540条/kg土壤。对各类添加物增效作用的调查结果表明,添加麦麸的增效作用最明显。田间试验结果表明,植物材料单独或与添加物混合使用对根结线虫病的防效均显著高于太阳能和土壤还原消毒法的防效。其中芥菜添加麦麸在开花期和盛果期的防效分别为65.2%和66.0%,与对照药剂98%棉隆可湿性粉剂的防效无显著差异;各植物材料熏蒸效果大小依次为芥菜>雪里蕻>芥菜疙瘩>甘蓝。     

Molecular diagnostic key for identification of single juveniles of seven common and economically important species of root-knot nematode (Meloidogyne spp.)

A molecular protocol is presented for distinguishing seven of the most common and economically important Meloidogyne spp. DNA was extracted from individual second-stage juvenile (J2) nematodes of Meloidogyne spp. and amplified by PCR (polymerase chain reaction). Fifteen PCRs including amplification of rDNA, specific SCAR (sequence characterized amplified region) and RAPD (random amplified polymorphic DNA) fragments were possible from the extracted DNA. This enabled a molecular diagnostic key for M. incognita , M. javanica , M. arenaria , M. mayaguensis , M. hapla , M. chitwoodi and M. fallax to be designed. The key unifies published methods into a single logical schematic using primer combinations that were previously validated and shown to work reliably and specifically. The protocol can be used with single juvenile or adult nematodes and the schematic can readily be expanded to accommodate more species. The use of RAPD amplification to assist with identification of samples which do not yield diagnostic amplification products after the first three steps of the molecular key is also described.