利用SSR标记鉴定两系杂交稻种子纯度

利用SSR标记RM21和田间种植调查鉴定了30份两优287杂交稻材料的纯度．并利用SSR标记1LM21对田间调查鉴定中的全部10种杂株类型的特异性进行了验证。标记检测和田间调查鉴定结果基本吻合．而且标记检测的样本数量越大,其与田间调查的结果吻合度越高．对企业两系种子的销售具有一定的指导意义。同时利用SSR标记RM21对所有杂株类型的进一步研究发现．所选择的SSR分子标记能有效地区分其中6种杂株类型．对由串粉和变异引起的4种杂株类型则不能有效地区分开。因此．利用SSR标记RM21检测两优287的纯度．必须结合杂交种子大田生产的实际情况具体分析。     

醇溶蛋白法和SSR标记法检测小麦种子纯度的比较

为了比较SSR标记法和醇溶蛋白法检测小麦种子纯度的准确度,以参加冬小麦区域试验的8个品系为试材,利用SSR标记法和醇溶蛋白法分别检测8个品系中的杂株,以田间表型鉴定结果为对照.结果表明,在800个单株(每个品系取100个单株)中,醇溶蛋白法和SSR标记法分别检出44和55个杂株,田间表型鉴定出49个杂株.这49个杂株中,有41株同时被SSR标记法和醇溶蛋白法鉴定出来,另有8株仅被SSR标记法鉴定出来.证明SSR标记法检测小麦种子纯度较醇溶蛋白法更加准确.     

小麦种子纯度的分子标记检测方法

为了探索一种准确评价小麦品种种子纯度的技术体系,在比对了400个小麦品种的SSR、EST-SSR和AFLP-SCAR指纹以及对上千份种子进行纯度检测的基础上,提出了检测种子纯度的策略:(1)联合使用SSR、EST-SSR和AFLP-SCAR标记检测种子纯度,并推荐了7对SSR引物、5对EST-SSR引物和3对AFLP-SCAR引物为检测种子纯度的核心引物;(2)在待测品种的种子之间比对核心分子标记位点的带型,当某(些)个体与多数个体之间≥3位点的带型不同时,方可判定为杂株.此外,本文还就如何提高种子纯度检测的工作效率、降低检测成本,提出了合理利用核心引物和合理混合DNA样品的方法.     

2个杂交籼稻和2个粳稻品种SSR指纹图谱的构建及双重PCR技术的初步研究

 用460对水稻SSR引物对5个杂交籼稻及其双亲和16个粳稻品种（系）进行了PCR扩增和聚丙烯酰胺凝胶电泳,筛选出12对稳定性好、多态性高、杂带少的SSR引物作为核心引物,构建了国稻6号和两优培九的SSR指纹图谱。另外,还筛选出9对核心引物,构建了粳稻品种盐稻8号和徐稻4号的分子指纹图谱。其中,筛选出国稻6号的特异性标记5个,两优培九的特异性标记3个,盐稻8号的特异性标记1个,徐稻4号的特异性标记2个。这些特异标记可用于种子纯度的快速鉴定。另外,挑选扩增条带稳定、特异性较好的引物组合,进行了双重PCR分析。     

不同引物鉴定同一杂交水稻种子样品纯度结果的差异及其原因分析

在对冈优158、Ⅱ优808、五优308及天丰优316的杂交种子样品进行室内纯度鉴定时,发现不同SSR引物鉴定的纯度结果存在明显差异。为了探讨其原因,将这4个组合的种子样品在海南进行田间种植鉴定,并按单株进行了分子与田间表型的对比分析。结果表明,冈优158、Ⅱ优808、五优308和天丰优316分别用引物RM208、RM264、RM242和RM164鉴定种子纯度时,只能鉴定出不育系(母本)杂株,室内分子鉴定纯度均高于相应的田间纯度;而分别用引物RM341、RM297、RM21、RM110鉴定时,不仅能鉴定出不育系(母本)杂株,还能鉴定出串粉株,室内分子鉴定纯度与田间鉴定纯度相当。因此,室内纯度鉴定应采用多对引物进行检测,以增加识别串粉株的几率。     

我国主要杂交水稻组合及其亲本SSR标记和纯度鉴定

选用分布于水稻12条染色体上的26对SSR引物对我国9个主要的杂交水稻组合及其亲本进行了SSR标记分析,21对多态性引物共扩增出62条条带,平均2.95条,能够有效地区分所有恢复系和大部分不育系。杂交种条带均为父母本的互补型,很适合做杂交种纯度鉴定。用引物RM17对杂交稻组合汕优63和两优培九进行了100粒单种子SSR鉴定,所测纯度分别为96.0%和98.0%,与田间纯度96.2%和97.7%非常接近,显示出SSR技术在品种认证和纯度鉴定中有广阔的前景。     

基于NY/T 1433—2014推荐SSR标记检测不同世代恢复系配制杂交种的纯度研究

采用田间性状稳定的不同世代恢复系YR179(F8、F9和F10代)、YR092(F8和F9代)和YR018(F8和F9代)及其与稳定不育系03S配制的杂交种为材料,利用《水稻品种鉴定技术规程SSR标记法》(NY/T 1433—2014)中推荐的48对SSR引物检测各世代恢复系的纯合位点数,通过室内分子鉴定与田间植株性状鉴定的一一对应检测,研究不同世代恢复系所配杂交种种子室内分子鉴定纯度结果与田间种植鉴定纯度结果的吻合度,并对各杂株类型进行一一对应分析。结果表明,当YR179、YR092和YR018分别选育至F10、F9和F9代时,全部48个位点均已完全纯合,此时,其对应杂交种室内分子鉴定纯度与田间种植鉴定纯度吻合率分别为99.4%、99.4%和100%,且各杂株类型的室内与田间鉴定结果也基本一致。说明当恢复系完全纯合时,可用室内SSR分子标记鉴定替代田间种植鉴定来鉴定其杂交种的纯度。     

利用PCR产物确定杂交水稻品种与亲本间的亲缘关系

以杂种F_1代两优336、德两优华占及两优336的母本C815S及父本R336为材料,利用中华人民共和国农业行业标准(NY/T 1433—2014)水稻品种真实性鉴定所采用的48对SSR引物进行PCR扩增,确定杂交水稻品种与双亲之间的亲缘关系。结果表明,利用双亲混合DNA与杂种F_1样品DNA的PCR扩增产物进行比较,可以鉴定出杂交水稻品种与双亲之间的亲缘关系。该方法不仅减少了检测的样品量,而且鉴定结果直观性好,准确性高。     

2011年黄河流域棉花区试对照种的SSR指纹图谱

 利用22对核心引物对2011年黄河流域棉花品种区域试验的对照种中植棉2号、鲁棉研28和瑞杂816进行SSR标记纯度检测,3个对照种纯度均较好。参考SSR标记纯度结果进行田间比对,每个品种抽取2个有代表性的植株用24对核心引物构建指纹图谱,并比较品种间的差异,每个品种均有特异的指纹图谱。     

利用SSR分子标记构建Y58S及部分重要两系杂交水稻亲本的DNA指纹图谱

以优良光温敏核不育系Y58S及其杂交组合Y两优1号和生产中广泛应用的部分光温敏核不育系和恢复系等18个水稻品种为材料,利用SSR分子标记进行了DNA指纹图谱的构建。聚类分析表明,18个供试水稻品种的遗传相似度为0.672-0.945;利用筛选到的RM164、RM18和RM258等3对引物扩增出的14条多态性片段初步构建了18个供试水稻品种的DNA指纹图谱,每个品种的DNA指纹图谱具有特异性,可互相鉴别;引物RM164可在超级杂交稻组合Y两优1号、两优培九中扩增出父母本的互补带型,从而可鉴别其杂交种子中混杂的母本杂株。     

SSR指纹图谱在棉花杂交种C111纯度鉴定中的应用研究

采用8对SSR（Simple sequence repeats）核心引物构建了棉花杂交种C111 F1的电泳指纹图谱,在花铃期考察株型、主茎茸毛和颜色、叶形和叶色、花和铃形等性状,比对田间表型与分子检测结果。结果显示：SSR引物检测认定的杂株和大田检测认定的杂株之间没有对应关系,田间表型鉴定纯度高于分子标记检测纯度。本试验结果将为进一步研究分子检测棉花杂交种纯度提供借鉴。     

SSR分子标记技术在杂交棉纯度鉴定中的应用

 利用SSR(Simple sequence repeats)分子标记技术,对湖北惠民农业科技有限公司的3个品种的棉花杂种F₁共计31份田间材料进行分子标记纯度鉴定。通过田间纯度鉴定与SSR分子标记纯度鉴定对比,运用相关分析和回归分析的统计方法,研究SSR分子标记纯度鉴定在杂交棉花制种中的可行性。结果表明,相关分析得出SSR分子标记鉴定纯度和田间鉴定纯度具有很强的相关性,相关系数在0.7以上;回归分析得出SSR分子标记鉴定纯度与田间鉴定纯度呈现极显著正相关,SSR分子标记鉴定纯度能够准确预测田间纯度。因此,SSR分子标记纯度鉴定能够应用于棉花杂交制种。     

SSR荧光标记毛细管电泳检测法在水稻DNA指纹鉴定中的应用

 以16个杂交水稻不育系、恢复系及组合为材料,初步建立了水稻品种SSR荧光标记毛细管电泳检测方法。与常规凝胶电泳检测方法相比,荧光标记毛细管电泳检测方法可以读出目标DNA片段的准确大小,检测数据更为精确,检测效率更高。常规凝胶电泳检测方法验证表明,利用SSR荧光标记毛细管电泳检测方法进行水稻品种DNA指纹鉴定,方法可行、结果可靠。     

四川省主要杂交稻亲本的SSR多态性分析和指纹图谱的构建与应用

利用微卫星标记对四川省主推杂交水稻品种进行了DNA指纹图谱构建和品种鉴定研究。208对引物中具有多态性的引物共123对,占所用引物的59.13%。不同染色体的微卫星分析的多态性不同,第9、10染色体微卫星的多态性高于其他染色体,第12染色体上的微卫星标记的多态性最差,仅为46.15%。42份常用杂交水稻亲本材料聚类分析表明,恢复系和不育系的遗传基础均较狭窄,但恢复系和不育系之间的遗传距离相对较远,从一定程度上反映了遗传距离与杂种优势的正相关。筛选出的各个亲本材料的特异引物或引物组合,能够将某个亲本材料与其他材料相区分。利用这些SSR引物建立了四川省主要杂交水稻亲本的DNA指纹数据库,可以有效地解决杂交水稻及其杂交种的鉴定问题,以及有效地分析各材料间的亲缘关系。从DNA指纹数据库中筛选出D优527的特异引物RM337、RM244和RM346,可以鉴定出D优527中的纯度,与田间鉴定结果一致;在真伪性鉴定中将同一不育系配组的D优527和D优68区分开,说明微卫星鉴定结果是准确可靠的,可用于品种权保护和品种真伪性及纯度鉴定。     

甘蓝型油菜自交不亲和系杂种纯度鉴定

利用共显性分子标记技术SSR、显性形态标记性状花叶及显性生化标记种子芥酸含量鉴定甘蓝型油菜自交不亲和系SI-1300与恢复系花叶恢杂种F1种子纯度.结果表明,3种方法鉴定结果基本一致,F1杂种种子纯度达到91%以上;不同SSR引物鉴定结果完全相同,一对SSR引物即可用于鉴定F1杂种纯度.SSR扩增产物具有很高的多态性和严格的保守性,不仅可以用于油菜杂种纯度鉴定,亦可以用于不同品种(组合)真实性鉴别.研究结果还表明,自然条件下放养蜜蜂用于自交不亲和系杂种制种是一种稳妥、切实可行的方法.     

两系杂交稻亲本SSR指纹图谱的建立及其在种子纯度鉴定中的应用

利用筛选到的20对SSR引物建立了两系杂交稻32个亲本(24个光温敏不育系和8个恢复系)的DNA指纹图谱,针对所涉及的9个杂交稻组合,获得能在父、母本间表现出多态性的特异SSR标记48个.以杂交稻组合两优932为例,在实验室用一个特异SSR标记(RM302)对200粒种子样本进行了纯度鉴定,结果鉴定纯度为90.50%,与田间种植鉴定结果90.60%(海南鉴定)和91.57%(武汉鉴定)基本一致,表明SSR标记技术适用于构建DNA指纹图谱和种子纯度鉴定.     

SSR标记在宁波地区水稻品种DNA指纹图谱构建及纯度鉴定中的应用

利用农业行业标准NY/T-1433-2007、NY/T-1433-2014中推荐的53对SSR引物,对宁波地区34个水稻品种进行DNA指纹图谱构建和遗传多样性分析。53对引物在研究材料中共获得183个等位基因,每对引物得到的等位基因数为1～7个,平均每对引物可获得3.5个等位基因。遗传相似性和聚类分析结果表明,34份水稻品种在遗传相似系数为0.5处可分为籼粳两个类群,其中,甬优系列籼粳杂交组合、6个常规粳稻及3个糯稻归为粳稻类群,6个常规籼稻和5个杂交籼稻归为籼稻类群。用RM590和RM3331对19个甬优杂交稻系列品种进行100粒种子的纯度鉴定,仅甬优2640和甬优50检测到1个单株的混杂。结果为SSR标记在宁波水稻品种的纯度和真伪鉴定方面的应用提供了一定的技术支撑。     

上海地区主要杂交粳稻组合分子标记指纹图谱的构建

随着分子生物学技术的快速发展,利用分子标记技术对品种进行真伪性和纯度鉴定已成为发展趋势。本研究通过SSR标记对上海近年主要推广的杂交粳稻组合进行分析研究,建立了DNA指纹图谱,以期为当地的水稻品种权保护、种子纯度鉴定等方面提供一定的理论依据和技术支持。     

玉米品种SSR分子标记与田间小区种植一致性鉴定结果的比较

利用国家玉米区域试验品种DNA指纹鉴定所用的20对SSR核心引物,对10个参试玉米品种进行了一致性鉴定,检测SSR标记应用于玉米品种一致性鉴定的可靠性。每个品种选取20个单株,同时对这200个单株进行田间小区种植鉴定。结果显示：田间鉴定结果与SSR分子标记鉴定结果相吻合的植株占总株数的83%。同时表明,分子标记方法比田间小区种植鉴定的精确度高,存在分子标记未能检测到的性状差异,需要筛选与这些性状相关的标记添加到核心引物中。     

大豆地方品种遗传结构及其保存研究

我国具有丰富的地方品种,但在大豆育种中利用率较低,这与对地方品种的保存和鉴定研究较少有关.通过利用全基因组SSR标记扫描的方法对地方品种羊眼豆和毛豆进行纯度鉴定,旨在为地方品种的纯化及遗传完整性的保存提供科学依据.结果表明:羊眼豆在502个SSR标记位点的多态性为44.8%,毛豆在405个SSR标记位点的多态性为41.2%;检测2个地方品种纯度所需的最少标记数和种子粒数分别为3个标记和4粒种子;根据遗传一致性分别对2个地方品种进行聚类,在相似系数为0.85时,均被分为3个组.因此,这2个地方品种纯度较低,根据遗传一致性分组情况,对两个地方品种的一组进行提纯后作为一个品种保存,而另外2个组则可分别作为2个不同的地方品种保存其遗传完整性.