百菌清人工抗原的合成及多克隆抗血清的制备

将百菌清(CTN)进行化学修饰后引入羟基活性基团,合成具有半抗原结构特征的百菌清衍生物(CTN-OH);采用N,N-羰基二咪唑法(CDI)将CTN-OH与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成人工免疫抗原CTN-BSA和包被抗原CTN-OVA,用紫外分光光度法(UV)和凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定;通过动物免疫试验获得鼠源多抗血清,并使用间接ELISA和阻断ELISA的方法对多抗血清进行鉴定。结果表明,半抗原CTN-OH与载体蛋白偶联成功;受免3只小鼠的效价均达1∶12 800,且2号小鼠对CTN的IC50为93.593μg/L,成功获得高效价、高敏感性、特异性强的鼠源多克隆抗血清,为CTN单克隆抗体制备及快速检测方法的建立奠定基础。     

T2毒素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备

合成并鉴定T 2毒素人工抗原,通过动物免疫制备敏感性高、特异性好的鼠源T 2毒素多克隆抗血清。采用琥珀酸酐法将T 2毒素活化为T 2HS,T 2HS在碳二亚胺(EDC)作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原T 2 BSA和检测抗原T 2OVA,经鉴定后,分别按30、50μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定其敏感性和特异性。结果表明,免疫的6只小鼠效价均达到了1∶104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,其半数抑制质量浓度(IC50)为324ng/mL,且具有良好的特异性。成功合成了T 2毒素人工抗原,制备了多克隆抗体血清,为T 2毒素单克隆抗体的制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。     

盐酸金霉素人工抗原的合成及鼠源多抗血清的制备

采用碳二亚胺法将金霉素(chlortetracyline,CTC)偶联到载体蛋白BSA(牛血清白蛋白)和OVA(鸡卵清蛋白)上,形成免疫原BSA-CTC与包被原OVA-CTC。通过紫外分光光度法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法进行抗原鉴定,用间接ELISA测定多抗血清(pAb)效价,阻断ELISA鉴定其敏感性。结果表明,在UV下出现了明显特征峰,BSA-CTC的峰与BSA、CTC相比均发生改变,表明半抗原与载体成功偶联。共免疫了5只小鼠,pAb效价均达到1×10-3,其中3号小鼠多抗血清抑制效价最低,IC50(半数抑制质量浓度)为71.47ng/mL。由此得出,获得了高效价、强特异的盐酸金霉素多抗血清,为盐酸金霉素单抗的制备奠定了基础。     

植酸酶鼠源多克隆抗血清的制备

 【目的】制备灵敏性高、特异性强的植酸酶多克隆抗体。【方法】将初步纯化的麸皮植酸酶蛋白经凝胶电泳鉴定纯度后,按50 μg蛋白/只?次免疫Balb/C小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后一次免疫60 d后,摘眼球取血,制备抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定敏感性和特异性。【结果】凝胶电泳的麸皮植酸酶只有一个条带;血清植酸酶抗体效价达1×104;半数抑制浓度达148.87 ng?mL-1。此抗血清对市售的普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩的微生物植酸酶的半数抑制浓度分别达到165.59 、163.80和166.51 ng?mL-1,交叉反应率分别为89.85%、90.88%和89.41%。100℃煮沸5 min后的麸皮、市售普通微生物植酸酶、市售包被微生物植酸酶及浓缩酶半数抑制浓度分别为2 871.34、5 208.85、7 914.12和5 804.24 ng?mL-1,交叉反应率分别为5.18%、2.86%、1.88%及2.56%。【结论】制备出了具有高效价、高灵敏度和特异性的鼠源植酸酶多克隆抗体,为植酸酶单克隆抗体制备及植酸酶ELISA检测试剂盒研制奠定了基础。     

巴氯芬人工抗原的合成及其鼠源多克隆抗体的制备

【目的】合成巴氯芬（baclofen,BA）人工抗原并制备其多克隆抗体,为巴氯芬免疫学快速检测方法的建立奠定基础。【方法】采用碳二亚胺（EDC）法将BA分别与牛血清白蛋白（BSA）和鸡卵清白蛋白（OVA）偶联,合成免疫抗原BA-BSA和包被抗原BA-OVA,通过紫外扫描和SDS PAGE凝胶电泳鉴定其偶联效果。将免疫抗原BA-BSA免疫BALB/c小鼠,利用间接ELISA、间接竞争ELISA及交叉反应试验分别对所获多克隆抗体的效价、敏感性、特异性等免疫学特性进行鉴定。【结果】紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳结果表明人工抗原偶联效果良好。ELISA结果表明,多克隆抗体的效价达到1∶256 00,半数抑制浓度（IC₅₀）为22.33 ng/mL,且与巴氯芬结构类似物及其他瘦肉精类药物（γ-氨基丁酸、氯丙那林、可乐定、赛庚啶、克伦特罗、沙丁胺醇、莱克多巴胺）交叉反应率均小于0.3%,具有良好的敏感性和特异性。【结论】成功合成了巴氯芬人工抗原,并制备了免疫学特性良好的巴氯芬鼠源多克隆抗体。     

6-苄基腺嘌呤人工抗原的合成及鼠源多克隆抗体的制备

为制备6-苄基腺嘌呤(6-benzylaminopurine,6-BA)的抗体,利用高碘酸盐法将6-BA的代谢产物6-苄基腺苷(6-benzylaminopurine riboside,6-BAR)分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,制备出免疫抗原6-BAR-BSA和包被抗原6-BAR-OVA.采用紫外...     

头孢氨苄人工抗原的合成及多克隆抗体的制备

为合成头孢氨苄(Cefalexin,CEX)的人工抗原,制备特异性的CEX多克隆抗体。采用戊二醛法合成头孢氨苄全抗原CEX-BSA、CEX-OVA,紫外分光光度计(ultraviolet spectrophotometry,UV)、SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)鉴定,用CEX-BSA免疫BALB/c小鼠,间接ELISA测定多抗血清效价,阻断ELISA鉴定其敏感性、特异性。结果显示,紫外扫描测得CEX-BSA、CEX-OVA中CEX和BSA、OVA的分子结合比分别为21.7∶1和14.6∶1;SDS-PAGE结果表明,BSA的泳动速度大于CEX-BSA,说明CEX-BSA的分子质量大于BSA,进一步说明CEX与BSA偶联成功;2号小鼠抗血清的效价最高,对CEX的IC50为769.588μg/L,与头孢拉定的交叉反应率为1.283%,与其他药物无交叉反应。说明通过系列ELISA鉴定,获得高价、敏感、特异的多克隆抗体。     

磺胺二甲基嘧啶人工抗原合成及多克隆抗体制备

磺胺二甲基嘧啶(SM2)为只具有反应原性而无免疫原性的半抗原。本试验将SM2重氮化后分别连接人血清白蛋白(HSA)、卵清蛋白(OVA),合成人工抗原,经紫外光谱扫描验证偶联结果,计算结合比分别为4∶1、3∶1。用偶联物SM2-HSA免疫新西兰白兔,以SM2-OVA为包被原,4次免疫后ELISA方法测定抗血清效价为1∶12 800。表明抗原合成成功,这为小分子药物残留的免疫学检测奠定了技术基础。     

磺胺二甲嘧啶人工抗原合成及单克隆抗体制备

采用重氮化法将SM2分别与BSA、OVA偶联,合成人工免疫抗原SM2-BSA和人工检测抗原SM2-OVA,并通过紫外光谱扫描(UV)、SDS-PAGE、红外光谱扫描(IR)验证偶联成功,偶联比分别为14:1、10.5:1.用SM2-BSA免疫BALB/c小鼠,通过细胞融合技术制备了2株特异性分泌SM2抗体的杂交瘤细胞株...     

甲拌磷人工抗原的合成及多克隆抗体制备

以五硫化二磷与无水乙醇为原料,首先制得硫化物中间体,再添加甲醛和2-巯基乙醇进行反应,得到甲拌磷半抗原.在DMAP作为催化剂的条件下,甲拌磷半抗原与丁二酸酐反应,得到甲拌磷半抗原的衍生物.通过碳二亚胺法将甲拌磷半抗原衍生物分别与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA)共价偶联,得到免疫抗原和包被抗原.用免疫抗原免疫兔子获得了高效价的多克隆抗体,抗血清效价达到了1∶50 000.通过试验确立甲拌磷标准曲线,检测限为6.383μg/L,检测线性范围为6.383～10 000μg/L.     

林可霉素人工抗原的合成与鉴定

拟合成并鉴定林可霉素( Lincomycin,LIN)人工抗原,通过动物免疫生产亲和力高、特异性好的鼠源LIN多克隆抗血清.采用高碘酸钠法将林可霉素与牛血清白蛋白(BSA)及鸡卵清蛋白(OVA)分别偶联,合成免疫原LIN-BSA和包被原LIN-OVA,并采用紫外分光光度法(UV)和聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行鉴定.结果表明,半抗原LIN和载体蛋白偶联成功.动物免疫试验(免疫BALB/c纯系小鼠)结果显示,3只小鼠效价均达1∶3 000,且2号小鼠多抗血清抗LIN的半数抑制质量浓度IC50为3.85 μg/L,与莫能菌素的交叉反应率为6.19％,与其他药物无交叉反应.表明成功获得高效价、特异性好、亲和力高的鼠源抗LIN多抗血清.     

盐酸可乐定人工抗原及其鼠源多抗的制备

以盐酸可乐定（Clonidine hydrochloride,CLO）的衍生物盐酸阿可乐定（Apraclonidine hydrochloride,ACLO）为半抗原,采用重氮化法合成人工抗原,免疫小鼠制备高敏感性、特异性的CLO鼠源多抗并进行鉴定,为CLO单克隆抗体的制备奠定基础。将ACLO分别与牛血清白蛋白（Bovine serum albumin,BSA）和鸡卵清蛋白（Ovalbumin,OVA）偶联,合成免疫原CLO-BSA和包被原CLO-OVA,经紫外扫描和SDS-PAGE凝胶电泳鉴定偶联效果后,免疫BALB/c小鼠,并对获得的鼠源多抗采用间接ELISA和间接竞争ELISA鉴定其特性。结果显示,免疫的4只小鼠血清抗体效价均达到1∶25 600以上,其中2号小鼠的抗体敏感性最高,半数抑制质量浓度（IC₅₀）为7.026 ng/mL,与其他几种常见瘦肉精类药物的交叉反应率均小于0.1%,特异性良好。表明成功合成免疫原性良好的CLO人工抗原,并获得敏感性高、特异性强的CLO鼠源多抗,为其单克隆抗体的制备及免疫学快速检测方法的建立奠定良好基础。     

二氯喹啉酸人工抗原的合成与鉴定

 以除草剂二氯喹啉酸（quinclorac，Q）、氯化亚砜、氨基己酸和氨基丁酸等为起始原料，经2步化学反应分别合成了2种二氯喹啉酸半抗原：6-(3,7-二氯-8-喹啉甲酰基)氨基己酸（QC）和4-（3,7-二氯-8-喹啉甲酰基）氨基丁酸（QB）。并通过碳化二亚胺法和混合酸酐法将Q、QC和QB分别与载体蛋白（BSA、OVA）偶联制备了二氯喹啉酸的免疫抗原和包被抗原。再将Q-BSA、QC-BSA和QB-BSA分别免疫新西兰大白兔获得了3种抗二氯喹啉酸的多克隆抗体：抗Q-BSA抗体(Q-Ab)、抗QC-BSA抗体(QC-Ab)和抗QB-BSA抗体(QB-Ab)，当相应的包被抗原浓度均为4 ?g·ml-1时，相应的冻干粉效价分别为2×103，1.2×106和1.6×106。由于Q-Ab效价偏低，不适合用于检测。采用同源间接ELISA竞争法测定时，其他2种抗体（QC-Ab、QB-Ab）的抑制中浓度(IC50)均大于50 mg·L-1，检测灵敏度也较低。因此本文对异源间接竞争ELISA法进行了研究，结果表明，异源反应的检测灵敏度高于同源反应，其中QB-Ab的IC50为0.4 mg·L-1；最低检测限为0.006 mg·L-1。     

玉米赤霉醇完全抗原的制备及质量鉴定

旨在合成玉米赤霉醇(ZER)人工抗原,并用其免疫小鼠以获得含高滴度ZER多克隆抗体的小鼠血清,为ZER单克隆抗体的制备奠定基础。改造ZER第16位上的羟基,合成半抗原ZER-16-羧丙基丁醚,然后分别采用混合酸酐法和碳二亚胺(EDC)法将改造后的半抗原与载体蛋白BSA或OVA偶联,制备免疫原ZER-BSA和包被原ZER-OVA,并采用凝胶电泳、动物免疫对人工抗原进行质量鉴定,间接ELISA测定抗血清效价,间接竞争(阻断)ELISA测定抗血清的敏感性和特异性。结果表明,用制备的免疫原免疫小鼠血清效价均已达到1∶104以上。6号鼠的血清敏感性最高,对ZER的半数抑制质量浓度(IC50)达15.77ng/mL,获得的血清除与α-玉米赤霉醇特异性反应外,与其结构类似物β-玉米赤霉醇、α-玉米赤霉烯醇、β-玉米赤霉烯醇、玉米赤霉酮、玉米赤霉烯酮分别有12.5%、100%、12.5%、25%、100%的交叉反应,与其他霉菌毒素交叉反应性均小于0.5%。表明试验成功获得ZER人工抗原,通过动物免疫制备敏感性好、特异性强的ZER多克隆抗体,为ZER单克隆抗体的制备及其免疫学检测方法的建立奠定基础。     

恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体的制备

[目的]制备恩诺沙星人工抗原及多克隆抗体。[方法]采用活性酯法合成恩诺沙星的人工抗原,并通过紫外光谱扫描和SDS-PAGE电泳对其进行鉴定。利用免疫原(ENR-BSA)免疫新西兰大白兔,制备抗恩诺沙星的高亲和力和高特异性的多克隆抗体。[结果]恩诺沙星成功地偶联到载体蛋白上。通过动物免疫,获得了高效价的抗血清,最高效价达到1∶100 000,说明人工抗原成功地诱导机体产生免疫应答。[结论]恩诺沙星的人工抗原合成路线简单易行,可为进一步建立恩诺沙星的免疫检测方法奠定了基础。     

磺胺间二甲氧嘧啶人工抗原的合成与鉴定

用重氮化方法将SDM偶联于载体蛋白BSA和OVA上,合成免疫抗原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM,通过紫外扫描(UV)、SDS-PAGE凝胶电泳试验。结果显示:BSA-SDM和OVA-SDM的UV与BSA、SDM的相比均发生了改变,出现了明显的特征峰。这表明半抗原和载体偶联成功。用BSA-SDM免疫BALB/C小鼠,间接ELISA测定多抗上清(pAb)效价。结果表明,获得了高效价的pAb,为SDM残留免疫学检测方法的建立奠定了基础。