利用远缘杂交创造核果类果树新种质的研究 Ⅱ.李、杏远缘杂种胚抢救及杂种鉴定

 对李、杏远缘杂交杂种胚败育的时期进行了调查,建立了李、杏远缘杂种胚抢救技术体系,并对部分杂种进行了鉴定。结果表明,李、杏杂种胚的败育时期从第3周开始;不同胚龄李、杏杂种胚的萌发及生长不同。PF值>0.5的杂种胚可以萌发及生长,PF值<0.5的幼胚不能正常萌发。在远缘杂种胚抢救技术体系中,杂种胚最佳萌发及分化培养基为MS+6-BA 2 mg·L-1+IAA0.3 mg·L-1,胚萌发及分化率达80％,多丛芽诱导及增殖培养基为MS+6-BA1.5 mg·L-1+IAA 0.3 mg.L-1,生根培养基为1/2M     

柑橘杂种胚挽救及早期鉴定

柑橘的多胚现象是柑橘杂交育种工作中面临的主要问题,胚挽救技术是解决多胚问题的有效方法。介绍了胚挽救技术中胚分离时间、培养基和培养温度等对合子胚发育的影响,并详细介绍了适合柑橘合子胚早期鉴定的分子标记技术（RAPD、AFLP、SSR和SNP等）及它们在早期鉴定中的优势和不足。     

冰糖橙与枸橼C-05对溃疡病菌生长特性的影响

【目的】采用新的接种方式,比较冰糖橙与枸橼C-05叶片对溃疡病菌生长特性的的影响,探讨冰糖橙与枸橼C-05对溃疡病菌敏感度的差异性。【方法】将完全展开、颜色淡绿的冰糖橙与枸橼C-05叶片进行75%酒精和1% NaClO消毒并切割后,分别与溃疡病菌在离体条件下共培养,观察叶片在MT培养基（对照）、MT中间嵌入NYGA培养基（MA）中对溃疡病菌生长的影响;分别提取冰糖橙和枸橼C-05叶片的粗提液,并以25%、50%和75%的比例添加至MT培养基中,观察冰糖橙和枸橼C-05叶片提取液分别对溃疡病菌生长的影响;同时以不同比例的叶片粗提液添加至NYGB培养基中,观察冰糖橙与枸橼C-05叶片提取液分别对溃疡病菌胞外多糖含量的影响。【结果】Xac在培养冰糖橙叶片的MT培养基中生长迅速,接种1周后即出现Xac的增殖现象,菌斑直径均值比对照大0.5 mm;接种2周后菌斑直径均值为5.27 mm,几乎是对照的3倍;而2-3周为Xac的急速生长期,菌斑直径由5.27 mm快速增长至13.41 mm,是对照菌斑直径的5倍多;3周后菌斑生长缓慢趋于平稳;各个时间点的菌斑直径与对照相比均达到极显著差异水平。在培养冰糖橙叶片的MA培养基中,Xac生长1 d后菌斑直径均值为4.58 mm,小于对照的6.19 mm;接种3 d后Xac继续生长,菌斑直径几乎与对照组相同,差异不显著;但是在接种5 d后,菌斑直径快速增长至21.31 mm,大于对照组的16.33 mm,3个菌斑长势连在一起,两者差异达到极显著水平。冰糖橙的叶片提取液对溃疡病菌的生长及胞外多糖含量均有促进作用,随着其添加浓度的增加,促进效果越明显,与对照相比均可达到极显著水平。Xac在培养枸橼C-05叶片的MT培养基中生长较为缓慢,在接种1周后菌斑直径与对照相比差异不显著;2周后菌斑直径约为对照的一半;3周时,菌斑直径均值为2.06 mm,小于对照的2.62 mm;2周和3周时的菌斑直径与对照相比均达到显著水平。在培养枸橼C-05叶片的MA培养基中,Xac生长较为缓慢,菌斑直径均小于对照组,在1、3和5 d时与对照相比均达到极显著水平。枸橼C-05的叶片提取液对溃疡病菌生长和胞外多糖含量的影响不大,与对照相比均差异不显著。【结论】冰糖橙叶片中存在可促进溃疡病菌的生长、增加胞外多糖含量的物质,这种物质可能突破了其自身免疫系统,导致其对Xac高度敏感而极易感病。枸橼C-05叶片与溃疡病菌共培养时,分泌抑制溃疡病菌生长的物质,使得枸橼C-05对Xac具有较低敏感度而表现抗性。     

植物的胚抢救

综述了开展胚抢救的背景、目的以及胚抢救技术的发展、培养需求和应用领域,提出胚抢救作为一种育种手段不仅可以拓宽杂交范围,还可抢救即将败育的胚,缩短育种周期,具有广阔的发展前景。     

文心兰杂种胚培养研究

以文心兰‘红狐狸’与‘百万金币’杂种胚为外植体,采用种胚→原球茎→完整植株→移栽的途径,探讨植物生长调节剂、有机添加物等因素对文心兰杂种胚萌发、原球茎分化、生根等各阶段的影响,建立文心兰杂种胚离体培养及植株再生技术。结果表明,适宜萌发的培养基为花宝+6-BA 0.5 mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+CM 150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖20g·L~(-1),培养90~100d后相对萌发率为155.6%,原球茎基本不增殖,利于叶的分化;适宜分化的培养基为花宝+6-BA 0.1mg·L~(-1)+NAA 0.1mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.0g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1),分化率显著最高,为87.8%,添加马铃薯泥能显著提高分化率,促进芽苗的粗壮;将分化的芽苗在花宝+NAA 0.2mg·L~(-1)+马铃薯泥150g·L~(-1)+AC 1.5g·L~(-1)+蔗糖25g·L~(-1)培养基上培养40d后生根率为100%,且根系发达,植株健壮;生根苗炼苗后以水苔作为基质,移栽成活率达91.7%。     

冰糖橙胚状体、胚性愈伤组织的诱导及植株再生

以冰糖橙（Citrus sinensis）成熟果实中未发育胚珠为外植体,以MT为基本培养基,通过添加不同种类植物生长调节剂（ZT、GA3、BA、IAA以及2,4-D）、麦芽浸出物（ME）或AgNO3,诱导胚状体、胚性愈伤组织,并进行了植株再生研究。结果表明：不同培养基不仅影响胚状体的诱导率,而且影响诱导胚状体的类型;MT培养基有利于诱导出球型胚状体,MT＋1.0 mg/L GA3＋500 mg/L ME培养基有利于诱导子叶形胚状体;不同类型的胚状体在不同培养基中胚性愈伤组织发生的频率不同,球形胚状体和MT＋0.5 mg/LIAA＋0.1 mg/L ZT培养基最有利于胚性愈伤组织的诱导,球形胚状体接种于此培养基上胚性愈伤组织的发生率高达40%。这些胚状体经过生芽和生根培养,再生了大量完整植株。     

结球甘蓝与油菜杂交胚挽救及其后代倍性鉴定

为将油菜中根肿病抗性基因CRR导入到甘蓝从而获得抗根肿病的结球甘蓝材料,以二倍体结球甘蓝与四倍体人工合成油菜为亲本进行正反杂交,采用MS和B5培养基对杂交子房和胚珠进行胚挽救试验,研究不同取样时期、培养基、基因型以及暗处理对胚珠萌发率的影响,并采用流式细胞仪法对杂交后代幼苗倍性进行初步鉴定。结果表明:胚珠培养优于子房培养。以人工合成油菜为母本的杂交组合获得的杂种苗数(57株)远多于反交组合(仅获得7株杂种苗)。子房培养取材时间以蕾期授粉后第10天为宜,以B1(B5+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+水解酪蛋白0.5%+活性炭0.5%)培养基最好(萌发数6株);胚珠培养适宜取材时间为蕾期授粉后第11天,以M1(MS+6-BA 1.0 mg/L+NAA 0.1 mg/L+水解酪蛋白0.5%+活性炭0.5%)培养基最佳(萌发率13.55%)。胚珠经过暗处理(24 h)后萌发率明显提高。倍性鉴定结果显示,胚挽救获得的64株幼苗中有57株为三倍体植株(89.06%)。     

硝酸银对冰糖橙胚性愈伤组织诱导的影响

为了诱导冰糖橙的愈伤组织和建立胚性细胞系，以冰糖橙成熟果实中未发育胚珠为外植体，将乙烯合成抑制剂AgNO3应用于冰糖橙胚性细胞系的建立，AgNO3设有5，10，12mg／L等3个处理，以未加AgNO3的MT培养基为对照。结果表明，在诱导培养基中添加AgNO3不能促进胚性愈伤组织的形成，反而抑制了胚状体的发生。然而在继代培养基中添加5mg／L的AgNO3有利于小而弱的胚状体基部形成胚性愈伤组织，胚性愈伤组织发生率达28％。经过5次继代处理建立了冰糖橙的胚性细胞系。     

百合杂种胚的离体培养

以剥除胚乳的两个百合杂交组合的杂种胚，进行离体培养，５ｄ后即开始萌发，１５ｄ后，萌发率达８８％。在不同激素含量的培养基比较试验中，发现以ＭＳ＋ＮＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ＋ＫＴ１．０ｍｇ／Ｌ激素浓度培养基培养效果最好，其中，７５％的种胚长成完整植株，１２．５％的种胚长出幼芽，培养过程中，无根的幼苗生长至３ｃｍ左右，约５张叶片时，转移至ＭＳ＋ＮＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基上，２￣３周后，有８０％的幼苗长出根。     

SRAP分子标记鉴定百合杂交后代

研究应用SRAP分子标记对亚洲百合杂种系亲本(‘橙色热情’ב迷恋’)、东方百合杂种系亲本(‘热情’ב甜梦’)及其杂交子代植株的DNA分别进行扩增,分析杂交后代植株与亲本间扩增谱带差异。从80对引物组合中筛选出具有父本特征带的引物组合,选出带型清晰、稳定、特征带较多的引物组合进行杂种真实性鉴定。结果如下:具有父本特征带的引物组合共有57对,选取其中6对引物对亲本(‘橙色热情’ב迷恋’)及其子代进行标记,选取其中7对引物对亲本(‘热情’ב甜梦’)及其子代进行标记。2个杂交组合共计10个后代,均具有父本特征带,鉴定其为真杂种。     

冰糖橙及冰糖脐橙果实的总糖与总酸的变化规律

为增进对冰糖橙及冰糖脐橙果实发育全过程的了解，制定相关的生产管理措施，对其进行了总糖和总酸含量的测定。结果表明，在果实生长发育过程中，冰糖橙和冰糖脐橙果汁中总糖含量，7月25日至9月5日逐渐增加，以后增加趋缓，10月15日至11月25日又快速增加，总酸含量在7月25日至9月5日增加非常明显，以后增加开始减慢，10月15日至11月25日果实中酸含量下降最显著，基本上达到成熟时的水平。     

主要气象因子对冰糖橙果实品质的影响

冰糖橙是湖南省最具特色的柑橘地方优良品种,但同一果园不同年份的果实品质有明显差异,研究不同气象因子对冰糖橙果实品质的影响,可为提高冰糖橙果实品质制定相应的栽培技术措施提供参考。在湖南省永兴县选取3个冰糖橙品系,对2009~2012年连续4年果实的可溶性固形物、可滴定酸、果实大小分别进行测定,并对日照时数、昼夜温差、降雨量等相关数据进行统计分析。结果表明,9~11月的总日照时数多、平均昼夜温差大的年份果实的可溶性固形物含量高;年降雨量大,尤其是6~11月的总降雨量大的年份,可滴定酸含量高;年降雨量小,尤其是6~11月的总降雨量小,年日照时数多,尤其是6~11月的总日照时数多的年份,固酸比值大;7~9月的总降雨量大的年份冰糖橙的果实大。日照时数、昼夜温差、降雨量等气象因子对冰糖橙果实的可溶性固形物含量、酸含量和果实大小等品质有重要影响。     

甜橙汁囊培养的脱分和再分化

以雪柑（甜橙，ＣｉｔｒｕｓｓｉｎｅｎｓｉｓＯｓｂｅｃｋ）果实不同发育时期的汁囊为外植体，在添加不同激素的ＭＳ培养基中，均脱分化获得了愈伤组织，但衰老汁囊获得率低。在培养过程中，接种后１０天内可溶性固形物和含酸量迅速下降，１０天后又趋于平稳。同工酶凝胶电泳分析表明：成熟汁囊未见水溶性蛋白质带和过氧化物酶带，但经过１５天培养，开始产生愈伤组织，谱带明显增加，随培养时间增加，谱带加强，汁囊愈伤组织培养１６５天后，分化出了根、胚状体和类汁囊，类汁囊具汁囊相似的形态解剖特征。     

保鲜剂宝特对甜桔贮藏品质的影响

以春甜桔和明柳甜桔果实为材料,研究了经保鲜剂宝特不同浓度处理后果实中的Vc、可滴定酸、可溶性糖和可溶性固形物含量以及好果率在贮藏期间的变化情况.结果表明,宝特200倍处理比较适宜春甜桔贮藏保鲜,宝特300倍比较适合明柳甜桔贮藏保鲜,保鲜处理后甜桔果实的Vc、可滴定酸、可溶性糖和可溶性固形物含量能维持在一个合适水平,且好果率较高.     

茶叶香精油的提取制备方法

\t\t\t\t\t目的\t\t\t\t\t对分子蒸馏得到的云南冰糖脐橙精油香气成分进行分析,为调香提供依据。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t方法\t\t\t\t\t选用云南特有地理品种冰糖脐橙的代表“褚橙”作为原料,采用分子蒸馏技术对压榨得到的褚橙全果初油进行分离,并对馏分进行GC-MS分析,结果与ISO标准中甜橙油的主要化学成分比较,最后对褚橙精油进行加香评价。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结果\t\t\t\t\t褚橙精油中共鉴定出58种化学组分,占褚橙精油化学成分的97.344%;其中,醇类7种(2.418%),醛类11种(3.403%),酯类2种(0.034%),烷烯烃类31种(90.959%),酮类3种(0.164%)以及其他化合物6种(0.521%),烷烯烃类化合物含量占主要地位。主要化学成分包括柠檬烯(76.769%)、月桂烯(7.001%)、芳樟醇(1.912%)、正癸醛(1.112%),α-蒎烯(3.046%)、桧烯(1.783%)和辛醛(0.959%)等。检测结果与ISO标准中甜橙油的主要化学成分进行对比,发现甜橙油中14个主要化学成分在褚橙精油中均被检出,但含量占比差异较大。将分离产物用于卷烟加香试验,感官评吸表明：添加褚橙精油的卷烟样品香气细腻度增加,口腔舒适度提高,甜味明显增加,丰富性提高,生津感较好,口腔残留有所改善。\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t\t结论\t\t\t\t\t分子蒸馏得到的褚橙精油与传统的甜橙油主要化学成分相近,但所占比例差异较大。研究为卷烟调香中不同橙油的开发及应用提供参考依据。\t\t\t\t     

建立脐橙实蝇非疫区研究

建立脐橙实蝇非疫区,围绕脐橙果园桔小实蝇发生规律的研究,综合应用了实蝇的生物学、实蝇的监测、实蝇的综合治理以及果园管理技术,探索在桔小实蝇发生区内建立实蝇非疫区的技术.经过3年的研究,积累了相关的经验,初步探索出研究的方法、程序.在脐橙产区建立实蝇非疫区研究结果表明,在实蝇发生区建立实蝇非疫区是可行的.     

百合远缘杂交的胚囊和胚胎发育及胚拯救

采用石蜡切片和子房切片培养方法,对百合杂交组合‘多安娜’ב西伯利亚’和‘普瑞头’ב雪皇后’授粉前后胚囊(胚胎)发育以及胚拯救效果进行了研究。结果表明:‘多安娜’子房内成熟胚囊高峰期滞后于‘普瑞头’3 d左右,而开花后8、10 d时其保持成熟胚囊的比例高于后者。两杂交组合的双受精作用开始于授粉后10 d左右,较亚洲百合自交亲和组合晚,且均存在不同程度的受精后障碍。子房切片培养和胚珠培养仅使‘多安娜’ב西伯利亚’组合获得幼苗。授粉70 d后,两杂交组合都收获少量成熟种子,并经MS培养基培养30 d后萌发成苗。     

木纳格葡萄胚挽救苗的获得及其无核性状分子鉴定

以木纳格葡萄败育型胚珠为材料进行胚挽救,按照已建立的适合白木纳格葡萄败育型胚珠培养体系进行实验,获得了大量木纳格葡萄胚挽救幼苗,炼苗后移栽到大田中种植。并结合已有分子标记技术,对胚挽救幼苗进行鉴定,结果显示45株胚挽救幼苗中,有21株扩增获得了目的片段,初步确定为具有无核性状的葡萄苗。     

甘薯抗黑斑病材料AFLP标记分子鉴定初步研究

以南薯88等12个抗感黑斑病品种为材料,通过甘薯黑斑病室内抗性鉴定,确定其抗感病程度。通过DNA提取、酶切、PCR扩增、凝胶电泳等系列程序摸索和优化,建立了甘薯黑斑病的AFLP分子标记体系。并用该体系找到了与甘薯抗黑斑病紧密相关的特异性DNA片段,对该片段克隆、测序后发现该DNA片段由320个碱基组成,为进一步分析该片段的特异性和灵敏性为甘薯抗黑斑病分子标记辅助育种奠定了基础。     

南极适冷菌Pseudomonas sp. P4-11抑菌活性 物质的分离纯化与结构鉴定

以尖孢镰刀菌为指示菌,对南极适冷菌Pseudomonas sp. P4-11 发酵液中的抑菌活性物质稳定性进行了 研究。结果表明,在温度30~60益和pH 值6~10 的范围内发酵液上清的抑菌活性稳定。通过抑菌活性追踪检测,利用 乙酸乙酯萃取、硅胶柱层析及HPLC 等方法对抑菌活性物质进行了分离纯化,获得了2 个具有明显抑菌效果的化合 物（T2-20-7-11-5,T2-20-7-11-7）,结构鉴定表明,二者均为壬基酚聚氧乙烯醚类化合物。利用扫描电镜对化合物 T2-20-7-11-5 抑制尖孢镰刀菌孢子的初步研究表明,该化合物可能主要作用于细胞壁或细胞膜,造成细胞内容物 外泄,最终对孢子萌发以及菌丝体生长起到抑制作用。