用甘油盐水延长猪瘟兔化弱毒疫苗有效期试验

一、概述及试验目的猪瘟兔化弱毒牛体反应疫苗,按中央农业部(63)农牧伟字第116号《颁发修订猪瘟兔化弱毒湿疫苗制造及检验规程》规定,分装好的脾淋组织,在0—4℃下不超过十五天,疫苗利用率低,这对农村防疫,平时补     

用甘油生理盐水延长猪瘟兔化弱毒牛体反应苗有效期试验

猪瘟兔化弱毒牛体反应苗,按中央农牧伟字第116号《颁发修定猪瘟兔化弱毒湿苗制造及检验规程》规定,在0—4℃下保存,有效期不超过15天。由于疫苗保存期短,对     

兔化猪瘟弱毒山羊体一代反应苗的应用

兔化猪瘟弱毒冻干苗在未大批生产供应防疫使用之前,兔化猪瘟弱毒山羊体、绵羊体或牛体反应苗在我省和兄弟省区曾经有效地用于防制猪瘟,在控制和消灭猪     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株复合实时荧光定量RT-PCR鉴别方法的建立

根据GenBank中的猪瘟病毒强毒和弱毒株基因组序列设计了1对针对猪瘟病毒的通用引物和2条分别针对猪瘟病毒强毒和猪瘟兔化弱毒疫苗株的特异性TaqMan水解探针，建立了一种能区分猪瘟病毒强毒和兔化弱毒疫苗株的复合实时荧光定量RT—PCR检测方法。结果显示，该方法能将我国大陆流行的不同基因亚群的猪瘟病毒强毒株与猪瘟兔化弱毒疫苗株完全区分开来，而不与其他猪源病毒发生非特异反应，分别可检测到初始模板中41．8和81．5个拷贝的病毒RNA，与已建立的复合RT-套式PCR的敏感性相近，两种方法对152份样品检测的符合率达96．9％～100％。通过对8份猪瘟兔化细胞疫苗效价的检测，证实本方法与兔体反应热测定法有一定的相关性，可用于猪瘟病毒强毒株和兔化弱毒疫苗的定量和鉴别检测。     

齐卡肉兔接种猪瘟兔化弱毒(C株)的热型观察

为了查找生产中原料兔接种猪瘟兔化弱毒C株病毒后定型热比例常低于70%的原因,观察了无猪瘟病毒抗体的8个批次,共3 512只中型齐卡肉兔对猪瘟兔化弱毒C株病毒的热型反应。结果:定型热占(91.3±1.5)%,轻热(5.8±1.2)%,可疑(1.8±1.5)%,无反应(0.9±0.7)%;8个批次的试验兔,对5个毒种代次的体温反应,差异不显著(P0.05)。研究认为,来自农村养兔户的原料兔,可能接触过猪瘟病毒,致定型热比例下降;无猪瘟抗体的中型齐卡肉兔,对不同代次的猪瘟兔化弱毒C株病毒均有良好的体温反应,可作为猪瘟弱毒疫苗(脾淋源)的原料兔。     

是否能在猪瘟疫区直接应用猪瘟兔化弱毒疫苗进行预防注射?

在猪瘟疫区的键康猪,为了使其迅速产生免疫力,通常是先用抗猪瘟血清进行预防注射,经10—14日,再注射猪瘟兔化弱毒疫苗。63年1月,猪瘟在我县开始大流行,为了克服抗猪瘟血清供应不足的困难,要求立即控制猪瘟流行,先在一有疫情的大队70头猪中试验证明,在猪瘟疫区,直接用猪瘟兔化弱毒疫苗预防注射,可以控制猪瘟流行,但也有些猪只会发生反应。为慎重起见,除号召防疫人员严格遵守预防注射的技术操作规程外,在保证抗猪瘟血清用于因预防注射而发生反应的猪只的前提下,推广了直接用猪瘟兔化弱     

猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞旋转培养制造猪瘟冻干苗的研究

为了克服猪瘟兔化弱毒乳免疫苗成本高,易污染的缺点,弥补采用常规猪肾细胞制造猪瘟弱毒疫苗的潜在致病危险性。本文成功的在犊牛睾丸细胞上连续增殖猪瘟化弱毒,特别是利用次代或二代细胞进行转瓶堵养,收获的猪瘟兔化弱毒其毒价稳定,细胞不易老化脱壁。现已制成猪瘟兔化弱毒犊牛睾丸细胞培养冻干疫苗,生产工艺简单,成本较低。疫苗对猪的免疫原性良好,免疫期一年以上。性能稳定,在-15℃可保存13个月,4℃保存半年以上,25℃也可保存14天。经7691头猪的免疫接种试验,证明本苗安全,无一死亡,个别猪有反应,其反应率仅为0.74%。     

猪瘟兔化弱毒疫苗中病毒含量实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及初步应用

为建立敏感、特异的评价猪瘟兔化弱毒(HCLV)疫苗中病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法,参照中国猪瘟石门株兔化弱毒全长序列,在猪瘟兔化弱毒活疫苗基因组5'非编码区设计1对标准品引物、1对特异性引物和1条探针,建立检测猪瘟兔化弱毒活疫苗病毒含量的实时荧光定量RT-PCR方法.该方法检测的敏感度达1.20×10⁵拷贝/mL;对猪繁殖与呼吸综合征、猪乙型脑炎、仔猪副伤寒和猪伪狂犬病4种活疫苗基因组扩增结果均为阴性;重复性试验结果显示,批内变异系数为0.29%～0.39%,批间变异系数为0.32%～0.61%.应用此方法对6个不同厂家生产的7种猪瘟兔化弱毒活疫苗中病毒含量进行了检测,发现不同厂家生产的疫苗中病毒含量存在较大差异.结果表明,建立的猪瘟兔化弱毒疫苗实时荧光定量RT-PCR方法能特异地检测疫苗病毒含量,可用于初步评价猪瘟兔化弱毒疫苗抗原含量.     

猪瘟兔化弱毒牛体反应苗(湿苗)低温保藏试验

我们试制了猪瘟兔化弱毒通过牛体反应制苗,证明牛体反应苗对猪安全,效力良好,就地制苗使用方便,成本低廉。在实际应用中,如能低温保藏牛反应苗组织块可以延长病毒活力,减少浪费。试验用结冻保藏了118天后的牛反应苗组织块,接种猪体作免疫力测定,仍能赋予猪体以坚强的免疫力。本文报导试验情况及一些经验体会,供同志们参考。     

猪瘟兔化弱毒疫苗的研究概况

猪瘟病毒兔化弱毒株因其优良的免疫原性,成为我国至今唯一使用的猪瘟疫苗株。本文就猪瘟兔化弱毒株的生物学特性、猪瘟兔化弱毒组织疫苗和细胞疫苗的研制以及疫苗的应用进行了综述。     

猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组的遗传变异分析

参照已发表的猪瘟病毒基因组序列设计了9对引物，用RT-PCR从猪瘟兔化弱毒疫苗株细胞培养物中扩增得到了覆盖猪瘟病毒基因组全长的9个cDNA片段，将所得cDNA片段分别克隆至pMD18-T载体中，经测序和拼接后，获得了猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组全序列。序列分析表明，猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组全长12310个碱基，其5’非编码区（5＇-NCR）和3＇-NCR分别由373和239个碱基组成，在3’末端有富含T的碱基插入，其间为1个大的开放阅读框架，编码3898个氨基酸残基的多聚蛋白，与国内外已发表的另外7个猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组全序列相比，核苷酸同源性为98．7％～99．9％，氨基酸同源性为98．6％～99．9％。基因组全序列比较显示，猪瘟兔化弱毒疫苗株基因组在遗传上相当稳定。     

自疫苗瓶中分离获得一株猪瘟病毒的人工接种试验

<正> 作者在某厂生产的猪瘟兔化弱毒乳兔冻干疫苗中发现有猪瘟野毒污染(编号为63疫苗毒株),经人工接种易感猪和兔体交互免疫试验,证实为猪瘟病毒,这对用乳兔生产猪瘟弱毒疫苗是一个严重的潜在危险,不可掉以轻心,故报告如下,以引起同道们的重视。     

影响猪瘟疫苗质量的几个关键因素分析

正猪瘟是由猪瘟病毒引起猪的以高热和出血为特征的,高度接触性、致死性传染病,严重危害养猪业生产。我国自1956年开始使用猪瘟兔化弱毒疫苗以来,猪瘟疫情逐步得到了控制。虽然我国驯化的猪瘟兔化弱毒疫苗毒株(C株)是目前世界上最优秀的猪瘟疫苗毒株且在我国广泛使用多年,但猪瘟在我国仍时有发生。其可能原因之一是猪瘟疫苗质量跟不上当前防疫的完全需求。笔者根据自己从事动物疫苗研发、生产和技术服务的工作体会,     

猪常用疫苗基本特性及使用方法

(一)猪瘟疫苗免疫接种是预防和控制猪瘟的主要手段,目前我国瘟猪疫苗种毒均为猪瘟兔化弱毒,疫苗有组织苗和细胞苗2种类型。组织苗主要是利用猪瘟兔化弱毒接种3～5日龄乳兔,接种36小时后取乳兔的肝、脾及肌肉组织制成的疫苗。细胞苗是猪瘟兔化弱毒经犊牛睾丸细胞或ST细胞培养制成的疫苗,犊牛睾丸细胞有可能携带牛病毒性腹泻粘膜病病毒。生     

荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系

为探讨荧光定量RT-PCR技术与传统兔体定型热试验对于检测猪瘟兔化弱毒疫苗的平行关系,本研究采用荧光定量RT-PCR方法与兔体定型热试验对5份猪瘟兔化弱毒细胞苗成品和6份半成品样品进行平行检测.结果表明,两种检测方法存在正相关性,最低105个病毒拷贝可以使家兔产生定型热反应,最低103个病毒拷贝可以使家兔产生轻热反应.荧光定量RT-PCR检测方法的检测过程仅需3.5h,大大缩短了猪瘟疫苗的检测时间,该方法可以补充传统的兔体定型热反应用于猪瘟兔化弱毒疫苗半成品与成品的检验.     

猪瘟兔化弱毒对山羊的感染性

为了解决无兔源地区应用兔化猪瘟弱毒疫苗的问题,我们进行了兔化猪瘟弱毒对山羊的感染试验,其经过和结果报告于下:(一)试验用材料试验所用的兔化猪瘟弱毒种毒和效检用的猪瘟强毒是中监所发给。结晶紫组织苗是四川兽医生物药品厂出品。试验用的山羊,年令不超过二岁,不分性别,选用体格健康,体温不超过39.8℃以上者。     

猪瘟兔化弱毒疫苗过敏所致速发型变态反应

猪瘟兔化弱毒疫苗产生免疫力快,免疫力坚强,多年来收到可靠的免疫效果。但对极少数过敏体质的猪只,偶能引起速发型变态反应。现将我县靠山乡在1982年秋季防疫工作中,应用猪瘟兔化弱毒疫苗注射,使同     

化学药剂延长兔化猪瘟弱毒疫苗保存期试验

自农业部颁布兔化猪瘟弱毒疫苗的制作方法,并加以推广应用后,近几年来兔化猪瘟弱毒疫苗已成为目前我国农村扑灭猪瘟的有力武器,全国各地已广泛使用。根据各地使用的结果已肯定兔化猪瘟弱毒疫苗有其多方面的优点,如在注射后短时间即可产生免疫力,其所产生的免疫力亦较之一般猪瘟疫苗(如结晶紫疫苗)为强,而且成本低廉,制造     

RT-PCR法快速检测与鉴别诊断猪瘟病毒野毒株和三个兔化弱毒疫苗株的研究

基于猪瘟病毒基因组中富含T的插入序列建立起的简捷一步法RT-PCR技术,用于同步检测与鉴别野毒株和疫苗株。依据猪瘟病毒兔化弱毒疫苗株3′NTR独立存在富含T的插入序列,设计特异性的扩增引物,使用简捷一步法RT-PCR或巢式PCR之后用琼脂糖凝胶电泳或多毛细管电泳方法进行分析,能检测到并且准确鉴别在临床标本中的古典猪瘟病毒野毒株和兔化猪瘟疫苗株。这些检测技术至少可用于3个兔化弱毒疫苗株LPC、HCLV和C-株的检测。野毒株RT-PCR检测限量是6.3TCID50/mL,巢式PCR检测限量是0.63TCID50/mL。在前一次研究中,在猪瘟兔化弱毒疫苗株的基因组的3′NTR发现有12～13nt的富含T的插入序列;本次研究中,在LPC/PRK和LPC/TS兔化疫苗株的基因组中发现2个长为42和36nt富含T的插入序列。这些长为12、36、42nt富含T的插入序列增加PCR片段的大小,有利于遗传标记对猪瘟病毒野毒型和不同兔化疫苗株间的快速检测和鉴别。     

猪瘟兔化弱毒冻干疫苗常温保存效力测定

<正> 猪瘟兔化弱毒冻干疫苗保存的好坏直接影响到防疫效果。在目前情况下,基层站由于种种原因,经常把疫苗放在室内、地窖等处长期保存使用,达不到规定的低温保苗条件。为掌握疫苗在温常保存后的效力,我们对稀释后的疫苗进行了有效期测定试验,现将其结果报告如下: