辽宁绒山羊卵泡闭锁中颗粒细胞凋亡特点的研究

本试验采用TUNEL原位法和DNA梯度电泳法等方法对卵巢上闭锁卵泡中凋亡的颗粒细胞类型和分布状况等进行研究。结果表明,辽宁绒山羊闭锁卵泡是细胞凋亡引起的。DNA梯状电泳表明,不同健康程度卵泡颗粒细胞凋亡程度不同;而颗粒细胞TUNEL原位标记表明,健康卵泡、轻度闭锁卵泡及闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡比例分别为13.21%±1.23％、32.13%±2.13％、51.31%±3.02％;不同健康程度卵泡中类固醇激素水平不同,健康卵泡中E2水平较高,孕酮浓度较低;闭锁卵泡中E2浓度较低,P4浓度较高,健康、轻度闭锁和闭锁三类卵泡中E2/P4比值分别是2.62±0.03、0.074±0.0003、0.028±0.0004。     

促卵泡素对体外培养牛卵泡类固醇合成相关基因表达的影响

本研究旨在探究促卵泡素（follicle stimulating hormone,FSH）处理对体外培养的牛有腔卵泡颗粒细胞和膜细胞类固醇激素合成相关基因表达的影响。采集牛卵巢表面直径9~11 mm的有腔卵泡,用含不同浓度FSH的DMEM/F12体外培养牛有腔卵泡24 h。提取卵泡颗粒细胞、膜细胞RNA并反转录成cDNA,利用实时荧光定量PCR检测卵泡颗粒细胞、膜细胞中类固醇激素合成酶基因（CYP11A1、3β-HSD、CYP17A1、CYP19A1、17β-HSD）和促性腺激素受体基因（FSHR、LHR）的表达水平。结果显示,FSH处理上调了颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP19A1基因表达,其中,25 ng/mL FSH处理极显著上调了CYP11A1基因表达（P<0.01）,10 ng/mL FSH处理显著上调了3β-HSD基因表达（P<0.05）,50 ng/mL FSH处理显著上调了CYP19A1基因表达（P<0.05）;50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达（P<0.05;P<0.01）,但在10和25 ng/mL FSH处理组中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因表达显著或极显著下调（P<0.05;P<0.01）。对FSHR、LHR基因研究结果显示,不同浓度FSH处理对颗粒细胞中FSHR、LHR基因的表达均无显著影响（P>0.05）,只有25和50 ng/mL FSH处理显著或极显著上调了膜细胞中LHR基因表达水平（P<0.05;P<0.01）,且不同处理组之间膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达变化与LHR基因表达变化趋势较一致。结果表明,FSH处理可提高牛有腔卵泡颗粒细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因的表达,膜细胞中CYP11A1、3β-HSD和CYP17A1基因对LH的刺激更敏感,FSH可能通过影响LHR基因的表达来调节膜细胞中类固醇合成酶基因的表达。     

辽宁绒山羊卵泡闭锁与颗粒细胞凋亡的研究

采用TUNEL原位法和DNA梯度电泳法等方法对卵巢上闭锁卵泡中凋亡的颗粒细胞类型和分布状况等进行研究.结果表明,辽宁绒山羊闭锁卵泡是细胞凋亡引起的.DNA梯状电泳表明,不同健康程度卵泡颗粒细胞凋亡程度不同;而颗粒细胞TUNEL原位标记表明,健康卵泡、轻度闭锁卵泡及闭锁卵泡中颗粒细胞凋亡比例分别为13.21%±1.23%、32.13%±2.13%、51.31%±3.02%;不同健康程度卵泡中类固醇激素水平不同,健康卵泡中E2水平较高,孕酮浓度较低;闭锁卵泡中E2浓度较低,P4浓度较高,健康、轻度闭锁和闭锁三类卵泡中E2/P4比值分别是2.62±0.03、0.074±0.000 3、0.028±0.000 4.     

反季节生产技术对鹅FSHβ和FSHR基因表达的影响

为研究反季节生产技术对鹅FSHβ和FSHR基因表达的影响,选取经反季节生产技术控制的处于产蛋期和正常处于休产期扬州鹅,测定血清中FSH含量,并应用实时荧光定量PCR技术研究FSHβ和FSHR基因mRNA在下丘脑-垂体-性腺轴中的表达水平变化。结果表明,试验组(反季节生产技术控制处于产蛋期)鹅的血清中FSH水平极显著高于对照组(未调控处于休产期)鹅的血清中FSH水平(P<0.01);FSHβ和FSHR基因在垂体、下丘脑和卵巢组织中均有表达,且FSHβ在垂体中表达最高(P<0.01),FSHR基因在卵巢组织中表达最高(P<0.01);FSHβ基因在试验组鹅垂体中的表达量极显著高于其在对照组鹅垂体中的表达量(P<0.01);FSHR基因在产蛋期鹅卵巢组织中的表达极显著高于休产期鹅卵巢组织中的表达量(P<0.01)。反季节生产技术控制下鹅生殖轴组织中FSHβ和FSHR基因表达显著增加,血清中FSH测定结果与之一致,表明FSH与生殖周期密切相关。     

辽宁绒山羊胚胎移植试验报告

为充分发挥我国绒山羊的繁殖潜力,对我国培育成的绒山羊品种—辽宁绒山羊首次进行了胚胎移植试验。于2005年4月2日～8日共产下辽宁绒山羊54只。对10只辽宁绒山羊供体母羊用促卵泡素(FSH)进行超排处理,头均获可用胚胎10.(6106/10)枚。对进口与国产FSH对辽宁绒山羊超数排卵效果的影响进行了比较。结果表明,进口FSH比国产头均获可用胚胎数多2.67枚。用孕激素(栓塞)法对受体母羊同期发情,结果表明,栓塞法的同期发情率为88%。     

卵光刺激素基因研究概况

通过候选基因法 ,证明了卵泡刺激素基因与动物产仔性能显著相关 ,其显著效应受到国内外普遍关注。本文从FSH基因的分子结构、生理功能和生物合成、基因定位及其在遗传图谱的位置、突变与生殖的关系四个方面作一综述 ,并探讨了FSH基因的研究趋势及应用前景     

卵泡直径对辽宁绒山羊卵母细胞体外培养的影响

本试验以屠宰场绒山羊卵巢为材料,采用抽吸法收集不同直径卵泡卵母细胞,研究卵泡直径对卵母细胞回收效果和体外成熟、体外受精的影响。结果表明,卵泡直径直接影响卵母细胞的回收效果及随后的体外成熟、体外受精;卵母细胞的回收率和可用卵的比率及成熟率与卵泡直径呈正相关;直径2.1～5 mm卵泡的卵母细胞由于处于生长旺盛期,受精率和卵裂率分别为59.15%和42.50%,显著高于直径5 mm卵泡和≤2 mm卵泡,适合体外胚胎的生产,而直径≤2 mm卵泡的卵母细胞因未发育充分体外发育潜能最差;直径5 mm卵泡的卵母细胞可能因体外培养成熟过度而老化导致受精率和卵裂率降低,缩短其体外成熟时间可能会提高其体外发育潜能。     

促卵泡素对绒山羊超排效果的研究

试验对38只绒山羊采用3种不同厂家生产的促卵泡素（FSH）进行超排处理,结果显示,回收胚胎总数量、可用胚胎数量为宁波激素厂生产的效果较好。今后对绒山羊进行胚胎移植时,使用国产（宁波激素厂）FSH,即可保证绒山羊的超排效果,又能降低超排成本,有利于胚胎移植技术在养羊业生产中的推广应用。     

重组促卵泡素及长效类似物的研究进展

垂体分泌的糖蛋白促性腺激素-促卵泡素(FSH)是动物卵泡和睾丸精细管发育的基本激素.相对于尿FSH,重组FSH具有纯度高、结构稳定等优点,长效FSH类似物还具有更长的半衰期.     

辽宁绒山羊母羊FSH全年分泌规律的研究

利用激素放射免疫测定法对辽宁绒山羊双羔型和单羔型的母羊全年及发情期外周血清中FSH分泌水平进行检测。结果表明:双羔型和单羔型母羊在全年各个月间FSH的分泌水平不均衡,从每年的8月份开始逐渐升高,10月份达到高峰,11月份以后开始逐渐下降,并且双羔型和单羔型在秋季的FSH分泌量差异显著(P<0.05)。双羔型和单羔型绒山羊FSH在发情期呈脉冲式分泌并有明显的分泌高峰,双羔型的FSH的排卵前峰值出现时间比显著地晚于单羔型(P<0.05)。     

不同月龄绵羔羊卵泡发育的比较研究

本研究旨在比较1、3月龄绵羔羊激素处理后卵巢、子宫及血液中促卵泡激素(FSH)变化,研究不同月龄对羔羊卵泡发育的影响。通过对1、3月龄羔羊进行FSH和孕马血清促性腺激素(PMSG)处理,比较羔羊在激素处理前后血液中FSH水平和卵巢、子宫大小变化,卵巢上2～8 mm卵泡的数量和卵母细胞体外成熟、受精后胚胎的发育情况。结果表明:1月龄羔羊实验组体内整体FSH水平高于3月龄羔羊(P<0.05)。1月龄羔羊注射外源激素后两侧卵巢可获卵母细胞数(42.3±2.5、36.8±1.1)枚及体外受精囊胚发育率(16.33%±0.96%)显著高于3月龄羔羊卵母细胞数(10.0±0.7、8.5±0.6)枚及囊胚率(9.29%±1.55%)(P<0.05)。羔羊进行超数排卵处理时卵巢上卵泡发育与血液中FSH水平密切相关,且较高的FSH水平预示着较多的卵泡发育。     

奶牛发情周期中FSH和LH浓度与卵泡发育的对比分析

选择从澳大利亚购进的2岁左右、发情周期为21天的育成母牛10头，用放射免疫测定法（RIA）测定了发情周期血清中促卵泡素（FSH）和促黄体素（LH）的浓度，用B-型超声波诊断仪检测发情周期卵巢卵泡发育变化。结果显示：FSH和LH浓度在奶牛发情周期中主要表现出两个波峰，其中一个波峰较小，这与卵泡两个发育波态势相似。     

文昌鸡促卵泡素受体(FSHR)基因外显子区域SNPs分析

寻找与鸡繁殖性能相关的遗传标记,为高繁殖力的标记辅助选择提供科学依据.本研究以促卵泡素受体(FSHR)基因作为影响鸡繁殖性状的候选基因,采用PCR-SSCP技术结合测序对FSHR基因部分包括所有外显子区域进行单核苷酸多态性检测和分析.结果发现,在区域2、区域4、区域6、区域9共4个区域存在SNPs位点.exon4编码区43 bp处T→C突变,但没有导致翻译后氨基酸序列的改变,在exon2中编码区5'端-49 bp处的C→T突变;exon6编码区3'端+12 bp处的A→G突变;exon8编码区3'端+38 bp处的G→T突变.促卵泡素受体(FSHR)是促卵泡素(FSH)的特异性受体,这些位点的单核苷酸多态性为下一步研究探讨FSHR基因对文昌鸡繁殖性能的遗传效应奠定了基础.     

绵羊卵泡期卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体的表达

为探讨卵泡期卵泡颗粒细胞促卵泡素特异性受体(FSHR)差异剪接体表达的变化,选择30只道寒杂交一代育成母羊肌注PG+埋植CIDR+肌注PG进行同期发情处理,选取9只发情母羊屠宰,取两侧卵巢组织,按小卵泡(≤3.0 mm),中等卵泡(3.0～5.0 mm)和大卵泡(≥5.0 mm)级别分别收集卵泡液和颗粒细胞,采用放射性免疫法测定类固醇激素(E_2和P_4)和FSH浓度,实时定量PCR检测不同直径卵泡颗粒细胞FSHR差异剪接体表达水平。结果表明,小卵泡和中等卵泡中FSHR1和FSHR3 mRNA的表达量极显著高于FSHR2和FSHR4(P0.01),在中等卵泡中FSHR3 mRNA的表达量显著高于FSHR1(P0.01);大卵泡中FSHR2 mRNA的表达量显著高于FSHR1、FSHR3和FSHR4(P0.01),FSHR1、FSHR3和FSHR4 mRNA的表达量差异不显著(P0.05)。大卵泡中雌激素浓度极显著高于小卵泡和中等卵泡(P0.01),孕酮浓度无显著性差异(P0.05),E_2/P_4比值与大卵泡中FSHR3 mRNA的表达量呈极显著负相关(P0.01)。由结果可知,卵泡发育过程中FSHR1和FSHR3可能是小卵泡和中等卵泡颗粒细胞增殖的2种主要剪接形式。     

双羔型辽宁绒山羊FSHR基因SNP分析的研究

分别选择遗传性能稳定的同一年龄的产双羔、单羔辽宁绒山羊母羊,对FSHR基因第10个外显子的1 487 bp至1 717 bp共230个碱基区段进行SNP分析,并以相同年龄的产双羔和单羔的萨能奶山羊为对照.从试验羊血液中提取基因组DNA,利用PCR法扩增FSHR第10个外显子的目的片段,利用PCR-SSCP法对PCR扩增的目的片段进行单核苷酸多态性分析.结果表明辽宁绒山羊FSHR基因第10个外显子突变率较大,并且其突变发生在第1 506个碱基,由C→T.说明FSHR基因的第10个外显子可以作为双羔性状的标记基因.     

辽宁绒山羊胎儿皮肤中Bcl-2\Bax基因表达变化的研究

胎儿期是辽宁绒山羊皮肤及毛囊形成的时期,在这个时期,Bax与Bcl-2基因能否在皮肤及毛囊表达,则与其发育及成熟密切相关.采用免疫组织化学方法,对辽宁绒山羊胎儿期的45、60、75、90、105、120和135 d胎儿皮肤上Bax和Bcl-2蛋白的表达量变化进行研究.结果表明:初级毛囊和次级毛囊、表皮、皮脂腺、汗腺上都存在Bax和Bcl-2阳性表达;两种蛋白在内根鞘上呈强表达,而在真皮乳头则弱表达.初级、次级毛囊上Bax平均光密度先增加后维持,而Bcl-2的平均光密度则是先不断增加,后稍有降低,Bax/Bcl-2比值的变化趋势也是降低的,表明随着初级和次级毛囊发育逐步成熟,细胞凋亡现象也逐渐减弱.     

辽宁绒山羊胎儿皮肤中Bcl-2/Bax基因表达变化的研究

胎儿期是绒山羊皮肤及毛囊形成的重要时期。这一时期,Bax与Bcl-2基因在皮肤及毛囊中正确表达与否,与皮肤及毛囊的发育及成熟密切相关。本研究采用免疫组织化学的方法,采集辽宁绒山羊胎儿期第45、60、75、90、105、120天和第135天皮肤,对胎儿皮肤和毛囊中Bax和Bcl-2蛋白的表达进行检测。结果表明:Bax和Bcl-2在初级和次级毛囊、表皮、皮脂腺、汗腺中都呈阳性表达;且2种基因在内根鞘上呈强表达,而在真皮乳头中为弱表达。初级和次级毛囊中Bax平均光密度先增加,随后达到一定阈值后维持水平;而Bcl-2的平均光密度则呈现先增加后稍有降低;此外,Bax/Bcl-2比值也表现为降低的趋势。因此,可以推断,随着辽宁绒山羊初级和次级毛囊发育逐步成熟,细胞凋亡现象也逐步减弱。     

促卵泡素受体基因的研究概况

促卵泡素受体(follicle-sti mulating hormone receptor,FSHR)是介导促卵泡素(follicle-sti mulating hormone,FSH)生理学信息发挥的受体,该受体基因结构对FSHR的表达具有重要的意义。作者对FSHR结构及其表达与调控的研究概况进行了系统的总结和分析,尤其是对FSHR基因作为调控不同动物繁殖性状的候选基因方面的研究结果进行了系统的评价。     

撒坝猪促卵泡素β亚基基因多态性及其与头胎产仔性能相关性研究

此文分析了促卵泡素(FSH)β亚基基因在撒坝猪群体中的多态性分布及其不同基因型与头胎产仔性能的相关性。结果表明,撒坝猪FSHβ亚基基因等位基因A及其基因型AA在群体中占优势,频率分别为0.8490和0.7604。FSHβ亚基基因在群体中处于哈迪-温伯格不平衡状态。乳头数以AA基因型最高,产仔数、产活仔数、初生窝重和45日龄窝重以AB基因型最高,BB基因型在所有分析性状上均表现最低,但3种基因型间的差异均不显著(P>0.05)。