鸡血液中乙酰胆碱酯酶的提取研究

[目的]为了研究硫酸铵盐析法在乙酰胆碱酯酶分离纯化中的效果,从而利用乙酰胆碱酯酶的活性变化反映农药的污染情况。[方法]采用硫酸铵盐析和等电点区分的方法从鸡血中提取乙酰胆碱酯酶,并探讨其适宜的pH值范围。[结果]结果表明:pH值4.5左右大量的杂蛋白能被除去,可获得较高乙酰胆碱酯酶得率;采用饱和度为50%~60%的硫酸铵盐析效果较好,据此得出较佳的提取工艺。[结论]该研究结果为后续鸡血AChE的提取、分离、纯化等工作提供了相应的参考,同时为利用乙酰胆碱酯酶指示环境受有机磷和氨基甲酸酯类农药污染的后续研究和应用提供了理论依据。     

玉米幼苗节和节间中乙酰胆碱酯酶测定

用生化分析结合细胞显微观察研究了黄化玉米幼苗节和节间细胞中乙酰胆碱酯酶(acetylchohnesterase，AChE)的活性和分布特征。结果表明乙酰胆碱酯酶的专一性抑制剂可以抑制该酶的活性。节细胞具有较高的、特异水解乙酰胆碱酯酶活性，是节间组织中该酶活性的近2倍。组织化学定位结果显示，在节细胞中，乙酰胆碱酯酶的反应产物主要分布于细胞核中，而在节间组织中，酶反应产物多位于细胞间隙。这些结果提示AChE在玉米幼苗节和节间中可能具有不同的生理功能。     

有机磷类杀虫剂的种类及驱虫应用

正有机磷类杀虫剂通过使乙酰胆碱酯酶失活而发挥其毒性。失活的过程分为两步,首先有机磷类与乙酰胆碱酯酶可逆性结合,随后磷酸盐不可逆地结合使乙酰胆碱酯酶磷酰化。一旦发生不可逆性结合,乙酰胆碱酯酶将不能再生,因此组织必须合成新的酶。氯磷定能逆转第一步反应并使酶重新恢复活性,因此,一旦发现中毒,立即使用氯磷定解毒最有效。1脂肪族衍生物脂肪族衍生物是很早问世的第一个商业化有机磷类杀虫剂,其中的敌敌畏和乙硫磷迄今仍用于动物。脂肪族衍     

农残快速检测技术及常见问题解决方法

正一、农残快速检测原理有机磷和氨基甲酸酯类农药是我国目前使用量最大的农药,而且较多的是禁止使用在果品、蔬菜上的。该类农药在生物体内可以与乙酰胆碱酯酶(Ache)结合,并不易分离,即乙酰胆碱酯酶的活性被抑制,致使人体神经传导中的乙酰胆碱不能水解而积累,神经过度兴奋,出现中毒症状甚至死亡。基于此原     

东莨菪素对朱砂叶螨的毒力及杀螨机理初探

采用玻片浸渍法测定东莨菪素对朱砂叶螨的触杀毒力,观察东莨菪素对朱砂叶螨的致毒症状,并测定其对朱砂叶螨神经系统靶标酶(乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶)活性的影响。结果表明,东莨菪素对朱砂叶螨24 h的触杀LC50值为1.24 mg/mL;中毒试螨表现出神经毒剂的致毒症状,如兴奋、痉挛等。在活体和离体试验中,东莨菪素均显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶、单胺氧化酶、Na+-K+-ATP酶和Ca2+-Mg2+-ATP酶的活性。研究还发现东莨菪素会引起试螨乙酰胆碱含量增加,可能是东莨菪素显著抑制试螨乙酰胆碱酯酶活性引起。据此推测东莨菪素对朱砂叶螨可能有神经毒性。     

青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青虫3种酶活性的影响

[目的]研究青翅蚁形隐翅虫毒素的杀虫机制,为研制开发该杀虫剂提供理论依据。[方法]采用青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物饲喂和点滴菜青虫,测定和分析了虫体组织中肠酯酶、谷-丙转氨酶、乙酰胆碱酯酶和乙酰胆碱的变化情况。[结果]饲喂夹毒叶片的3龄菜青虫在48h后中肠酯酶含量下降明显,酶活性略受抑制。经毒素点滴处理的3龄菜青虫谷-丙转氨酶含量24、48h后均降低,24、48h后酶比活力均呈现增强趋势;经毒素粗提物处理的菜青虫24、48h后乙酰胆碱酯酶含量变化不大,但均有明显的降低,酶比活力增强。毒素粗提物对乙酰胆碱有抑制作用。[结论]青翅蚁形隐翅虫毒素粗提物对菜青虫幼虫具有较好的抑制作用。     

罗非鱼肝脏乙酰胆碱酯酶的双水相萃取

乙酰胆碱酯酶是监测环境中有机磷和氨基甲酸酯类农药的重要靶标物质.应用聚乙二醇(PEG)/磷酸氢二钾(K2HPO4)双水相体系对罗非鱼肝脏乙酰胆碱酯酶的萃取分离进行了研究.采用单因素试验,探讨了PEG1000的质量分数、K2HPO4的质量分数、pH值及NaCl的质量分数对酶萃取的影响,并通过正交试验进一步优化萃取条件.结果表明:K2HPO4质量分数、PEG质量分数、pH值对酶的萃取影响最大.室温下在K2HPO4质量分数为15.0％、PEG1000质量分数为22.0％、pH值为7.0的双水相体系中,酶的分配系数最大、可达5.65,萃取率为72％.放大试验结果表明,该双水相体系对乙酰胆碱酯酶的萃取效果比较稳定,是提取分离乙酰胆碱酯酶的一种新方法.     

针麻前后血中胆碱酯酶活力变化及其与针麻效果的关系

许多资料证明,神经系统的机能活动和体液因素,在针刺镇痛中起着重要作用。体液因素中的神经介质,是针刺调整作用的一个方面。乙酰胆碱是胆碱能神经的传导介质,而胆碱酯酶的活力又与乙酰胆碱的分解代谢密切相关。因而,为了研究针刺麻醉中乙酰胆碱的变化,近年来许多单位进行了人或动物针麻前后全血或其它组织胆碱酯酶活力变化的测定,但结果尚不一致。为了进一步探讨针麻前后血中胆碱酯酶是否有规律性的变化,我们结合临诊对10例马属动物(驴、马)进行了18头次针麻前后全血胆碱酯酶活力的测力。     

萝卜叶不同萃取物对乙酰胆碱酯酶抑制活性研究

[目的]研究萝卜叶不同萃取组分对乙酰胆碱酯酶的抑制活性。[方法]通过对萝卜叶水提原液、水提不同萃取组分及萃取后的水相进行乙酰胆碱酯酶抑制活性测试,对萝卜叶抑制乙酰胆碱酯酶能力进行评价。[结果]以石杉碱甲为对照,萝卜叶不同萃取物对乙酰胆碱酯酶的抑制能力从大到小依次为石杉碱甲、二氯甲烷组分、乙酸乙酯组分、石油醚组分、正丁醇组分、水相、萝卜叶水提原液。[结论]萝卜叶具有较好的乙酰胆碱酯酶抑制活性,并呈现一定的浓度依赖性。     

三化螟两个乙酰胆碱酯酶基因克隆及序列分析

乙酰胆碱酯酶(ACh E)是有机磷(Organophosphate,OP)和氨基甲酸酯(Carbamate,CB)类杀虫剂的作用靶标。昆虫乙酰胆碱酯酶基因(ace)表达量的上升或基因突变导致其对杀虫剂的敏感性下降是昆虫产生抗药性的重要原因。本研究利用RT-PCR技术和c DNA末端快速扩增(RACE)技术成功克隆到三化螟(Scirpophaga incertulas Walker)的两个乙酰胆碱酯酶基因,分别命名为Siace1和Siace2。Siace1的完整开放阅读框(Open reading frame,ORF)长2 085 bp,编码含694个氨基酸的乙酰胆碱酯酶1(Si ACh E1)。Siace2的ORF长1 917 bp,编码含638个氨基酸的乙酰胆碱酯酶2(Si ACh E2)。将三化螟的两个乙酰胆碱酯酶与已报道的各物种的乙酰胆碱酯酶进行相似性比较,结果显示在蛋白水平上,Si ACh E1与台湾稻螟的ACh E1有最高的相似性,达到94%;Si ACh E2与二化螟的ACh E2具有最高的相似性,为98%。本研究为水稻上重要螟虫的乙酰胆碱酯酶基因对比研究提供了基础。     

Al^3＋对蚯蚓和家兔乙酰胆碱酯酶的毒性研究

[目的]探讨Al3＋对蚯蚓和家兔乙酰胆碱酯酶的毒性。[方法]通过体外试验,分别研究了Al3＋对蚯蚓乙酰胆碱酯酶（AChE）和家兔脑部AChE的毒力（IC50）和双分子速率Ki的影响。[结果]Al3＋对蚯蚓AChE和家兔脑部AChE的IC50分别为5.4和4.2 mmol/L;4.2mmol/LAl3＋对家兔大脑AChE的双分子速率Ki值为5.4mmol/LAl3＋对蚯蚓AChE双分子速率Ki值的1.02倍,表明家兔脑部AChE对A l3＋的敏感性较蚯蚓AChE对Al3＋的敏感性强。[结论]为从整个动物界层面阐明铝对AChE的毒性性质以及利用AChE快速检测铝的污染提供了理论依据。     

大豆异黄酮改善高血脂小鼠记忆及有关机制的研究

[目的]探讨大豆异黄酮对高血脂小鼠记忆的影响及有关机制。[方法]将小鼠分为4组,基础饲料对照组;高脂饲料对照组;低剂量大豆异黄酮组:高脂饲料+SI[50mg/(kg·bw)];高剂量大豆异黄酮组:高脂饲料+SI[100mg/(kg.bw)]。连续灌胃大豆异黄酮30d后,测定小鼠记忆能力,同时检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和β-脂蛋白含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,血液、大脑皮质和海马中胆碱酯酶(AChE)活性。[结果]在试验期内造成了高脂模型,与对照组比较,高血脂小鼠记忆明显降低,而大豆异黄酮明显改善高血脂小鼠记忆能力,同时使小鼠血清中TC、TG和β-脂蛋白含量以及大脑皮质和海马中AChE活力显著降低,而使血清SOD活力显著提高。[结论]大豆异黄酮改善高血脂小鼠记忆的机制可能与其降血脂、抗氧化作用以及调节中枢胆碱类神经递质的代谢有关。     

鱼病病原动物及其在动物学实验教学中的应用

以大庆地区鱼病病原动物为研究基础,以病原动物在动物学实验教学中的应用为核心,阐述了大庆地区常见鱼病病原动物的种类及季节分布,把鱼病知识融入到动物学的实验教学内容中,分别介绍了原生动物、扁形动物及线形动物及节肢动物在动物学实验教学中的应用,拓宽了动物学实验材料来源,为动物学的教学与科研提供素材,为动物学的教学改革提供了思路。     

家蝇乙酰胆碱酯酶的纯化、生化性质及其对杀虫剂敏感性的研究

采用CEA亲和层析法对家蝇AChE进行纯化,测定了不同温度、pH值、ATChI浓度、DTNB浓度对AChE活性的影响,并测定了不同杀虫剂对纯酶和粗酶的抑制作用.结果表,CEA纯化倍数为672.36,产率为34.68%;当温度为35℃时,粗酶和纯酶的AChE活性最高;当pH=7.2时,纯化后AChE的活性最高,随后随着pH的升高AChE的活性反呈下降趋势;当pH=7.8时,粗酶AChE活性最高;当底物浓度的2 500 umol·L-1时,纯化AChE活性达到最大值,当底物浓度为l 500 μmol·L-1时,粗酶活性达到最大值;粗酶和纯化的AChE活性的两个波峰出现在DTNB浓度为0.2 mol·L-1和0.4 mol·L-1时;仲丁威、乙酰甲胺磷、速灭威、甲胺磷、毒死蜱、克百威、抗蚜威、灭多威和辛硫磷等9种杀虫剂对粗酶和纯酶AChE的IC50比值都大于6,甲萘威对纯酶和粗酶AChE的IC50比值为4.826,二嗪磷的为1.184,三唑磷的为0.099.     

苦参碱对小菜蛾幼虫毒力测定及其对害虫体内2种酶活性的影响

采用生物测定和酶活力测定方法,研究苦参碱对小菜蛾Plutella xylostella L．的胃毒活性及其对幼虫体内谷胱甘肽-S-转移酶、乙酰胆碱酯酶活性的影响。试验结果表明：苦参碱对小菜蛾幼虫具有一定的胃毒作用。2mg／mL苦参碱处理叶片饲喂小菜蛾幼虫12h校正死亡率为37．93％,72h后小菜蛾幼虫的校正死亡率为95．83％。不同质量浓度苦参碱处理小菜蛾幼虫后,幼虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶（GSTs）和乙酰胆碱酯酶（AchE）活力与对照相比均产生波动。经125×10 -3mg／mL苦参碱处理4h,小菜蛾体内GSTs活力最高,为1610．72U／（mg·min）。经125×10mg／mL苦参碱处理16h,小菜蛾体内的AChE酶活力最高,为10．63U／（mg·min）。各处理24h,小菜蛾体内GSTs活力和AChE酶活力均有明显降低。说明苦参碱对小菜蛾幼虫体内谷胱甘肽-S-转移酶活力和乙酰胆碱酯酶活力有一定的影响。     

凡纳滨对虾乙酰胆碱酯酶组织分布及对有机磷农药敏感性分析

采用改进的ELLMAN法测定凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）脑神经节乙酰胆碱酯酶（acetylcholinesterase,AChE）活性,确定其适宜测定条件,并在此基础上测定对虾不同组织AChE活性,比较毒死蜱、敌敌畏、辛硫磷和乙酰甲胺磷4种有机磷农药对凡纳滨对虾脑神经节AChE活性的影响。结果表明,温度35 ℃,磷酸缓冲液pH 7.5时,凡纳滨对虾的AChE活性最高,保温时间对酶活性影响很小;对虾AChE活性存在着明显的组织分布差异性,脑神经节AChE活性最高,为（49.73±8.42） nmol/(min·mg),分别是鳃、肌肉和肝胰腺的3倍、15倍和19倍;对虾AChE 对敌敌畏最为敏感,IC₅₀为0.19 μg/mL,对毒死蜱和辛硫磷敏感性较强,IC₅₀ 分别为7.20 μg/mL和9.39 μg/mL, AChE对乙酰甲胺磷敏感性最弱,IC₅₀ 为136.77 μg/mL。由此可见,对虾养殖中应注意防范敌敌畏、毒死蜱和辛硫磷等有机磷农药的毒性危害。     

蛇床子素对小菜蛾幼虫的胃毒作用及对虫体内两种酶活性的影响

采用生物测定和酶活力测定方法,研究了蛇床子素对敏感品系小菜蛾Plutella xylostellaL.的胃毒作用及其对小菜蛾幼虫体内谷胱甘肽-S-转移酶、乙酰胆碱酯酶活性的影响。结果表明：蛇床子素对小菜蛾幼虫具有一定的胃毒作用。2 mg/mL的蛇床子素处理萝卜苗叶片后饲喂小菜蛾幼虫12 h校正死亡率为37%,72 h时后小菜蛾幼虫的校正死亡率为93%。处理24 h时,LC50为1 521.25 mg/mL,处理48 h时,LC50为865.93 mg/mL。处理72 h时,LC50为515.5 mg/mL。不同浓度蛇床子素和不同时间处理小菜蛾幼虫后,幼虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶和乙酰胆碱酯酶活力均产生了消长变化。经125×10-3mg/mL蛇床子素处理16 h时,小菜蛾体内的GSTs活力最高为209.15 U.mg-1prot.min-1。经125×10-3mg/mL蛇床子素处理4 h时,小菜蛾体内的AchE酶活力最高,为0.648 1 U.mg-1prot.min-1。各处理在24 h时,小菜蛾体内的GSTs活力和AchE酶活力均有明显的降低。说明蛇床子素对小菜蛾幼虫体内的谷胱甘肽-S-转移酶和乙酰胆碱酯酶活力重要的影响。     

水产动物疾病无公害防治技术应用进展

总结了微生态制剂、免疫增强剂、水产疫苗、中草药、生物渔药、环保型水体消毒方法、健康养殖等水产动物无公害防治技术在水产养殖中的应用,为水产动物病害的防治提供参考。     

纳米技术在畜牧业中的应用前景

纳米技术是在纳米尺度(10-9m)下对物质进行制备、研究和工业化以及利用纳米尺度物质进行交叉研究和工业化的综合性技术体系,是21世纪科技发展的主流。纳米材料以其独特的物理、化学、生物学特性在畜牧业中的广泛应用,能增进畜禽健康,促进动物生长,提高畜禽产品品质。现就纳米技术在饲料添加剂、动植物品种改良、动物疫病防治、提高畜产品品质、新型兽药研发、改善饲养环境等方面的应用进行综述,以期能达到人们对纳米技术的应用有更加深入的了解。     

Comparisons of Properties of Acetylcholinesterase from Two Field-Collected Populations of Oxya chinensis Thunberg (Orthoptera: Acrididae) and the Role of Acetylcholinesterase in the Susceptibility to Malathion

In this study, acetylcholinesterase (AChE) was extracted from two field-collected populations of Oxya chinensis (Xinxiang City, Henan Province and Changzhi City, Shanxi Province). AChE activities were decreased when concentrations of ATC increased, showing a characteristic phenomenon of substrate inhibition at high concentration in both populations. Such inhibition occurred at relatively low concentration for AChE from Xinxiang population but relatively high for AChE from Changzhi population. The kinetic study showed that there were no significant differences between the two populations in the Km values. The Km value in Changzhi population was only 1.09-fold higher than that in Xinxiang population. However,significant differences were observed between the two populations in Vmax values. The Vmaxvalue in Changzhi population was 1.32-fold higher than that in Xinxiang population. The inhibition study in vitro showed that the AChE from both populations exhibited similar rank order in sensitivity to inhibition by three OPs, as determined by comparison of their bimolecular rate constants (ki), from the most potent inhibition to the least was chlopyrifos-oxon ＞ paraoxon ＞demeton-s-methyl for AChE from the two populations and that the ki values in Xinxiang population were lower than those in Changzhi population. The I50 values of AChE from Xinxiang population were 4.84-, 2.66-, and 1.92-fold less sensitive to inhibition by paraoxon, chlopyrifos-oxon, and demeton-s-methyl. These results were consistent with the results in bioassay. It is inferred that AChE insensitivity to OP insecticides plays an important role in the differences of insusceptibility of Oxya chinensis to malathion between the two populations.