3种杜仲枝叶总RNA提取方法的比较

采用改良过的CTAB - LiCl法、RNApure Plant Kit法和RNAiso Plus法分别提取杜仲枝叶总RNA,以期筛选出适于杜仲枝叶高质量总RNA提取方法;用琼脂糖甲醛变性凝胶电泳检测总RNA的完整性,以紫外分光光度计检测总RNA的纯度和得率.结果表明,改良过的CTAB - LiCl法和RNApurePlant Kit法提取的RNA完整性好,纯度高,RT - PCR可获得目的基因cDNA片段;RNAiso Plus法得到的RNA降解严重,纯度低.改良过的CTAB - LiCl法和RNADure Plant Kit法提取杜仲枝叶总RNA完全能满足后续的RT - PCR和RACE等分子生物学研究.     

杜仲叶和树皮总RNA的快速提取法

文中提出了一种适用于杜仲Eucommia ulmoides Olive树皮和树叶总RNA快速提取的方法，用本方法提取的杜仲树皮树叶的总RNA具有正常的光谱吸收，OD260／OD280为1．930。琼脂糖电泳后，28S RNA的亮度基本为18S RNA的亮度的2倍，说明提取的RNA完整，并未降解。同其它的方法比较，该法提取的RNA质量高、简便、快速、经济，可用于RT—PCR、Northern杂交、cDNA文库的构建。     

杉木总RNA 3种提取方法的比较研究

通过3种杉木总RNA提取方法的比较试验,找到了一种适用于杉木总RNA提取的新方法.用该方法提取杉木幼茎总RNA具有正常的光谱吸收,D_(260nm)/D_(280nm)比值为1.90～2.03,D_(260nm)/D_(280nm)比值为2.84～4.04,经琼脂糖电泳后,28S和18s RNA条带清晰,提取的RNA可用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA文库的构建,同时该方法还适用于青蒿总RNA的提取.     

杜仲乔林与叶林树皮中次生代谢物含量的比较

通过回流提取法,对杜仲乔林与叶林2种栽培模式下树皮中次生代谢物的含量差异进行了分析。结果发现,乔林树皮中杜仲醇、总黄酮和杜仲胶的含量均比叶林树皮中的高,而叶林树皮中绿原酸、京尼平甙酸和桃叶珊瑚甙却比乔林树皮中的高;同时比较将杜仲树皮碾成粉状和丝绵状2种处理方式对次生代谢物提取的影响发现,二者效果相差不明显,但考虑到后期要提取杜仲胶,建议将杜仲皮碾成丝绵状。     

甜高粱总RNA提取方法的比较研究

以LTR102甜高粱为材料,比较改良TRIzol法、CTAB法和SDS法提取甜高粱总RNA的效果.利用普通琼脂糖凝胶分析3种不同方法所提取的RNA的完整性,并用紫外分光光度计分析RNA的纯度.结果表明:改良TRIzol法能有效去除多糖和蛋白,提取的RNA中28S rRNA亮度约为18S rRNA的2倍,D260 nm/D280 nm值介于1.8～2.0;CTAB法提取的RNA泳道模糊不清,杂质多,有污染现象;SDS法提取的RNA中28S rRNA有缺失现象,降解严重.改良的TRIzol法适合甜高粱总RNA的提取.     

蓝莓果实总RNA提取方法比较

为了在蓝莓果实中提取出高质量RNA,比较了改良CTAB法、TRIzol法、试剂盒法和SDS法4种方法.结果表明:改良CTAB大量法能有效地去除果实中的多糖和酚类物质,获得的总RNA质量较好,纯度较高.28s∶18s的亮度约为2∶1,OD260/OD280在1.8～2.0,OD260/OD230的比值都大于2.0,且得率也较高,幼果期为23.978 μg·g-1,完熟期为30.817 μg·g-1.完全能适用于RT-PCR、转录组测序等分子生物学实验.     

棉花总RNA的快速提取方法

介绍了一种适合于棉花各种组织的RNA提取方法。它具有简便、快速等特点，且所提取的RNA样品质量较高，可直接用于cDNA合成、RNA dut blot等分子生物学操作。     

番茄腺毛总RNA提取方法比较

番茄腺毛与其防御性反应及次生代谢产物的合成密切相关,为了进一步研究腺毛特异性表达基因,试验比较研究了改良的异硫氰酸胍(GTC)法、CTAB 法、Trizol 法对番茄腺毛总RNA 的提取效果。结果表明,改良GTC法提取的总RNA 质量最好,电泳显示条带清晰完整,OD260/OD280比值为1.98。用该法获得的RNA 更适合后续分子生物学研究。     

马铃薯块茎总RNA提取方法比较

以马铃薯普通栽培品种“米拉”块茎为材料,对Trizol法、改良Trizol法、Logeman法和改良异硫氰酸胍法提取的总RNA进行比较与分析.结果显示,Trizol法提取的总RNA含有轻微蛋白质污染,经过改良后可完全除去,但成本高适合小量快速提取;Logeman法和改良异硫氰酸胍法均可提取得到高质量的RNA,而且成本较低适合大量提取.     

三七种子总RNA提取方法的比较

从三七种子中提取高质量的RNA。采用CTAB法、天根试剂盒法、普通Trizol法、改良Trizol法对三七种子总RNA进行提取比较。结果表明,改良Trizol法提取的三七种子RNA纯度好、浓度高、无DNA污染,且成本低廉、操作简单,质量符合后续的基因克隆、cDNA文库构建、基因表达等分子生物学研究的要求。     

杜仲节区结构与输水功能的研究

以杜仲（散孔材）为试材,以一年生枝条为样本,对节和节间木质部进行解剖,用冲洗法测节和节间导水率损失的百分数。结果表明,对于杜仲枝条的各个部位,单位面积节间导管的数量总高于节区的数量;节间木质部单位面积导管的平均内径均大于节区导管的内径,其中在中部区别较为明显;节间导水率损失的百分数大于节区。     

杜仲翅果籽油和杜仲胶提取工艺优化

[目的]获得优质长丝杜仲胶和杜仲翅果籽油。[方法]以杜仲翅果整果为原料,杜仲翅果籽油和杜仲胶的最佳提取条件为：经稀碱和纤维素酶处理后,经石油醚提取或结合超声波用石油醚提取,并与将翅果粉碎后直接用石油醚提取的常规方法比较。[结果]用0．50％NaOH于70℃下除去整果角质层,然后用纤维素酶在pH为4、温度40℃的条件下破坏翅果细胞壁,于常温用石油醚提取杜仲籽油,苒用石油醚回流提取杜仲胶。与常规工艺相比,油脂得率提高23．00％,杜仲胶得率提高58．00％。杜仲翅果整果经稀碱和纤维素酶处理后,结合超声波用石油醚提取,与常规工艺相比,油脂得率提高42．oo％,杜仲胶得率提高76．00％,时间缩短90．00％。[结论]实际生产中可根据条件选择适合的工艺,该研究为生产出高品质和高产率杜仲翅果籽油和杜仲胶提供了科学依据。     

杜仲叶挥发物质气相色谱-质谱研究

[目的]研究杜仲叶挥发油的化学成分。[方法]杜仲叶经水蒸气蒸馏得挥发油,运用GC-MS技术,结合计算机检索对其化学成分进行分析和鉴定。用峰面积归一法计算各组分相对含量。[结果]分离鉴定了38个化合物,占挥发油总量的96.18%。其中,含量在3%以上的组分有：叶醇（19.61%）、3四-氢呋喃甲醇（57.02%）、植醇（6.37%）。[结论]为进一步开发利用杜仲叶药用价值提供科学依据。     

杜仲愈伤组织诱导与继代培养研究

[目的]对杜仲进行愈伤组织诱导及继代培养,建立愈伤组织的培养系统。[方法]以杜仲子叶、幼叶、下胚轴为外植体,接种于不同培养基中诱导和继代。[结果]不同外植体愈伤组织的诱导率高低顺序为：下胚轴〉子叶〉幼叶。子叶和幼叶在MS＋NAA 1.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳;胚轴在MS＋NAA 3.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中诱导出的愈伤组织在MS＋6-BA1.00 mg/L＋NAA 2.00 mg/L、MS＋6-BA 1.00 mg/L＋NAA 1.00 mg/L和MS＋2,4-D 1.00 mg/L培养基中继代培养为佳。[结论]杜仲的子叶、幼叶和胚轴可采用多条途径实现愈伤组织的诱导和继代增殖培养,为进一步筛选高产细胞系打下基础。     

杜仲不同部位绿原酸含量的比较

采用超声技术提取杜仲叶和皮中的绿原酸,并建立了HPLC-PAD法测定绿原酸的含量。结果表明,杜仲叶的绿原酸含量均高于杜仲皮。该方法简便、准确,线性范围宽,可用于评价含绿原酸成分的药材质量。     

杜仲皮和叶中儿茶素含量差异的研究

[目的]研究杜仲皮和叶中儿茶素含量的差异,为杜仲以叶代皮入药提供依据。[方法]选取3个产地的杜仲皮和叶样品进行提取,并采用反相高效液相色谱法测定儿茶素的含量,色谱柱为Agilent HC-C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为乙腈-浓度0.4%磷酸溶液(13∶87,V/V);流速为1.0 ml/min,检测波长280 nm。[结果]所取3个产地的同株杜仲的皮和叶中儿茶素的含量不同,其中河南信阳、四川绵阳和贵州遵义产的杜仲皮中儿茶素的含量分别为1.919、1.279和1.167 mg/g,所产的杜仲叶中儿茶素的含量分别为49.34、35.75和33.72 mg/g;同株杜仲叶中儿茶素含量明显高于杜仲皮。[结论]研究所采用分析方法简便、快速,重现性良好,适用于杜仲不同部位儿茶素含量的测定。测定结果表明杜仲叶资源值得开发利用。     

杜仲专用肥肥效试验

通过大田多点肥料对比试验,研究了杜仲专用肥的肥效.结果表明,施用杜仲专用肥能极显著地促进杜仲高、径的生长及树体的生物量.施用专用肥,杜仲当年平均高生长比不施肥处理和施用等氮、磷、钾养分处理分别增加了63.0和20.5,胸径分别增加了 43.2和17.8;当年干皮、叶生物量和地上部分生物量施用专用肥与不施肥比较分别增加了68.4、71.6和75.8,与等氮、磷、钾养分处理相比也分别提高了25.8、56.0和28. 6.同时,专用肥具有较长的后效,施专用肥处理比不施肥处理第2 a的胸径增长和高生长分别增加了92.9和103.8,比等氮、磷、钾养分处理分别增加了42.1和6.0,专用肥处理比不施肥处理2 a总的胸径增长和高生长分别增加了64.6和76.3,比等养分肥分别增加了 28.9和14.6.     

杜仲肉桂醇脱氢酶基因克隆及序列分析

以杜仲一叶一心期幼叶为材料，提取总BNA，采用RT-PCR技术分离得到498bp核苷酸片段，此核苷酸片段与CenBank中的苹果树肉桂醇脱氢酶(CAD)基因序列有64．1％的同源性，与桉树mRNA CAD有63．9％的同源性。所克隆的cDND编码165个氨基酸残基，其序列与苹果树CAD相应片段有68．5％的同源性，与桉树mRNA CAD相应片段有66．1％的同源性。推测克隆的核香酸片段为杜仲CAD的基因片段。     

杜仲树体矿质元素分布特点与需肥规律

本文对杜仲地上部不同组织中养分含量和养分携出量,杜仲对养分的吸收比例,杜仲年高生长和地径生长节律等进行了研究,并根据杜仲养分吸收特点提出了基本肥料施用比例.结果表明,杜仲生长期间吸收的养分主要储存于叶子和皮中,木质部数量较少;皮和叶的利用将使养分大量损失,应通过施肥加以补充.杜仲对氮磷钾(N:P2O5:K2O)养分的相对吸收比例为1:0.3:1.6,考虑氮磷钾肥料养分的利用率后,提出适于杜仲施肥的氮磷钾养分基本比例为N:P2O5:K2O=1:0.6:0.9.实践中应用时,可根据当地土壤供应不同养分的状况,     

杜仲根组织分化的观察与分析

杜仲(Eucommia ulmoides Oliv.)的根为主根系。根尖顶端原始细胞分旱层为中柱原、皮层原和表皮-根冠原。整个根尖基本生长速率,自原始细胞向基端320μm前后最大,1200μm处下降到最小。原始细胞最初无分化,向基100μm处开始分化为初生分生组织,210μm处中柱鞘开始分化,500μm处出现最早筛管分子,620μm处出现最早导管分子,1300μm处表皮成熟形成根毛,2500μm处初生结构分化完成。内皮层凯氏带不明显,中柱鞘由一层细胞构成。木质部束多数为二原型,另外有三原、四原和五原型。韧皮部薄壁细胞形成许多橡胶丝。初生结构形成后,维管形成层即活动,产生次生维管组织,同时皮层第二层细胞分裂形成第一次的木栓形成层,产生周皮。次生韧皮部的轴向系统中也分化产生橡胶丝。侧根原基由木质部放射棱顶端中柱鞘细胞发生,根尖及成熟结构与主根相同。