高速逆流色谱法分离制备抱茎獐牙菜中龙胆苦苷和獐牙菜苦苷

[目的]建立抱茎獐牙菜（Swertia franchetiana H.Smith）中分离制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的高速逆流色谱法。[方法]采用溶剂系统为氯仿∶甲醇∶水=4∶4∶2（V/V/V）;上相为固定相,下相为流动相;上下相超声波脱气20min;转速850r/min;流动相流速2ml/min;检测波长254nm。所得产物用旋光仪测定其旋光度,计算其比旋光度,进行纯度鉴定。[结果]从100mg抱茎獐牙菜粗提物中得到龙胆苦苷14mg,獐牙菜苦苷27mg。测得龙胆苦苷和獐牙菜苦苷的比旋光度[a]Dt分别为-196.3°和-126.6°,纯度较高。[结论]该研究可为用高速逆流色谱法大量制备龙胆苦苷和獐牙菜苦苷提供可行的方法。     

HPLC法同时测定2种獐牙菜中4种苷类成分

建立并检测印度獐牙菜和川西獐牙菜中獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷、异荭草苷4种苷类成分含量的反相高效液相色谱分析方法.结果表明,该方法简单,准确,快速,可作为獐牙菜类药材的质量控制依据.     

RP-HPLC法测定秦艽不同器官中獐牙菜苦苷含量的研究

［目的］建立秦艽不同器官中獐牙菜苦苷含量测定的RP HPLC方法。［方法］定量分析秦艽不同器官中獐牙菜苦苷含量。［结果］獐牙菜苦苷 在0.20～1.8 μg范围内成良好的线性关系（r=0.999 9）,平均回收率为98.6%（RSD=1.32%）。麻花秦艽叶中獐牙菜苦苷的含量最高,茎中含量最低。［结论］该研究可为秦艽药材的合理开发利用提供依据。     

鱼胆草中獐牙菜苦苷提取工艺条件的优化

[目的]研究鱼胆草中獐牙菜苦苷超声提取工艺参数。[方法]以鱼胆草中的獐牙菜苦苷提取率为考察指标,先对乙醇浓度、提取时间、料液比和提取温度进行单因素试验,然后用L_(16)(4~3)正交设计对提取温度、料液比、乙醇浓度进行验证试验。[结果]鱼胆草中獐牙菜苦苷最佳提取工艺为料液比1∶10、提取温度60℃、乙醇浓度10%、提取时间10 min,獐牙菜苦苷提取率达88%。[结论]此工艺简单可行、重复性好,为鱼胆草的综合开发、利用提供了理论依据。     

RP-HPLC法测定青海不同地区麻花艽中獐牙菜苦苷含量

[目的]建立反相高效液相色谱法测定青海不同产地藏药麻花艽中有效成分獐牙菜苦苷含量的方法。[方法]采用Kromasil C18(250mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,26%甲醇水溶液(含0.04%H3PO4)为流动相,流速1 ml/min,检测波长240 nm,柱温30℃,测定獐牙菜苦苷含量。[结果]獐牙菜苦苷在14 min内与其他组分达均到基线分离,獐牙菜苦苷的线性范围是0.009 5~2.900 0μg/10μl(r=0.999 9),加标回收率为99.5%(RSD=3.2%)。[结论]RP-HPLC方法测定快速,结果准确、可靠。     

抱茎獐牙菜中3种药效成分的HPLC测定

[目的]测定抱茎獐牙菜中不同部位的药效成分。[方法]采用反相高效液相色谱法,测定抱茎獐牙菜中不同部位獐牙菜苦苷、龙胆苦苷及芒果苷的含量。[结果]结果表明,HPLC法测定3种药效成分的最佳条件为流动相甲醇-0．02％磷酸水溶液,梯度洗脱,洗脱条件0～25min,甲醇：20％～50％;流速1ml／min,检测波长为260nm。该方法具有很好的线性关系和回收率。[结论]抱茎獐牙莱根部龙胆苦苷的含量最高,其余2种药效成分在花的部位有较高的含量。     

高效液相色谱同时测定祁连獐牙菜中3种有效成分的含量

目的:建立反相高效液相色谱法同时测定祁连獐牙菜中3种有效成分含量的方法.方法:采用ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相甲醇和水(含0.04%磷酸)的比例在0～20 min内由20∶80至30∶70梯度洗脱,流速1 ml/min,检测波长240 nm,柱温35℃.结果:落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷与其他成分达到基线分离.线性范围分别为0.05～0.625 μg(r=0.999 9)、0.009 5～2.9 μg(r=0.999 8)和0.048 6～2.56 μg(r=0.999 6),加标回收率分别为103%(3.9%)、98.2%(4.0%)、101%(3.5%).结论 该方法简便、快速,结果准确、可靠.     

高效液相色谱法同时测定四数獐牙菜中4种有效成分含量

建立了反相高效液相色谱法同时测定四数獐牙菜中的落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷含量的方法。测定方法:在检测波长254 nm、柱温30℃、流速1 ml/min时,用ZORBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm i.d.,5μm)柱,以甲醇和水(含0.04%H3PO4)在0～20min内由20%至35%线性梯度洗脱。试验结果:4种成分均达到基线分离,落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、芒果苷的线性范围分别为0.05～0.625μ(g r=0.999 9)、0.095～2.9μ(g r=0.999 8)、0.049～2.56μ(g r=0.999 7)、0.006～2.8μ(g r=0.999 9);回收率分别为101%(RSD=4.3%)、98.7%(RSD=3.3%)、99.5%(RSD=3.5%)、102%(RSD=1.0%)。结论:测定方法快速,结果准确、可靠。     

贵州獐牙菜抗小鼠脂肪肝作用研究

[目的]探讨不同剂量的贵州獐牙菜对高脂饮食所致的小鼠脂肪肝的防治作用。[方法]采用高脂饲料(基础饲料78.39%+胆固醇10%+猪油10%+蛋黄粉10%+丙硫氧嘧啶0.61%)连续喂养28 d KM小鼠建立脂肪肝模型。用贵州獐牙菜水煎液灌胃给药28 d后,摘取小鼠肝脏观察制作石蜡切片和HE染色,比较各小鼠肝细胞的病理学变化;并测定小鼠血清中的总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)的含量。[结果]根据HE染色和切片结果,与空白组相比,模型组肝脏细胞结构变性;且模型组的血清TC、TG、LDL-C指数明显升高,HDL-C指数降低。贵州獐牙菜组的HE染色切片与模型组相比病理程度减轻,血清TC、TG、LDL-C指数表达量降低,HDL-C指数升高。[结论]贵州獐牙菜具有抗小鼠高脂血症及缓解脂肪肝的作用。     

青海4种入药獐牙菜的多糖及黄酮含量特征

为寻找入药的优质獐牙菜野生种,为人工选育和栽培提供依据,采用苯酚-硫酸法分别测定生长于青海的4种獐牙菜及其种子的多糖含量,利用紫外分光光度法测定其黄酮含量并进行差异性分析。结果表明:祁连獐牙菜植株和橙色花川西獐芽菜植株的多糖平均含量极显著(P0.01)高于紫色花川西獐芽菜植株,祁连獐牙菜植株和种子的多糖含量均高于川西獐牙菜;橙色花川西獐牙菜植株的黄酮含量极显著(P0.01)高于黄色花川西獐牙菜、紫色花川西獐牙菜和祁连獐牙菜;橙色花川西獐牙菜和黄色花川西獐牙菜种子的黄酮含量极显著(P0.01)高于紫花川西獐牙菜和祁连獐牙菜。橙色花川西獐牙菜黄酮可多糖含量均最高,可用于人工栽培。     

扇贝多肽对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用

[目的]建立H2O2诱导HaCaT细胞氧化应激损伤的体外模型,探讨扇贝多肽(PCF)对H2O2损伤HaCaT细胞的保护作用及其作用机制。[方法]采用不同浓度的H2O2(50、100、200、300、500μmol/L)作用HaCaT细胞12 h后,采用CCK-8法检测细胞存活率;用不同浓度(1.42、2.84、5.68 mmol/L)的PCF分别处理细胞12 h后,加入H2O2(300μmol/L)继续作用12 h,采用CCK-8法检测细胞活力,采用酶生化法法测定细胞上清液中LDH活性以及细胞质中GSH-Px、T-AOC和CAT水平。[结果]与正常组相比,50~500μmol/L浓度的H2O2依赖性地引起HaCaT细胞氧化损伤,300μmol/L的H2O2使存活率降低到56%(P0.01);与模型组相比,不同浓度的PCF均可保护H2O2诱导的氧化损伤,增加细胞存活率,降低细胞LDH的释放量,提高GSH-Px、T-AOC和CAT含量,增强细胞抗氧化作用。[结论]扇贝多肽能对抗H2O2诱导的氧化应激,对细胞受损具有保护作用,其机制可能与提高抗氧化酶活力有关。     

植物乳杆菌C88对H2O2诱导氧化损伤的 Caco-2细胞的保护作用

【目的】文章旨在研究植物乳杆菌（Lactobacillus plantarum）C88的抗氧化作用。【方法】采用0.1 mmol•L-1 和0.2 mmol•L-1浓度H2O2连续处理Caco-2细胞12—48 h造成氧化损伤,通过测定细胞培养液上清和细胞裂解液的自由基清除能力及抗氧化物酶活性,评价植物乳杆菌C88对Caco-2细胞抗氧化损伤的保护作用。【结果】与氧化损伤模型组相比,植物乳杆菌C88在1011CFU/mL浓度下,能显著提高细胞裂解液的谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性(P＜0.05)和总抗氧化（T-AOC）能力(P＜0.05);以及细胞裂解液的羟自由基清除率(P＜0.05)、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）(P＜0.05)和超氧化歧化酶（SOD）活性。细胞裂解液的羟自由基清除率低于氧化应激对照组。【结论】植物乳杆菌（L. plantarum）C88通过提高Caco-2细胞的自由基清除能力和抗氧化酶活性,表现出了较强的抗氧化活性。     

大孔吸附树脂提取分离藏茵陈中獐芽菜苦苷和龙胆苦苷的研究

[目的]提取并分离藏茵陈中的獐芽菜苦苷和龙胆苦苷。[方法]采用浙江大学研制的大孔吸附树脂9号对藏茵陈中的獐芽菜苦苷和龙胆苦苷进行分离纯化研究,以吸光度为响应值,依据单因素试验结果,以獐芽菜苦苷和龙胆苦苷的含量为评价指标,设计正交试验,优化相关参数,建立以大孔树脂提取分离藏茵陈中獐芽菜苦苷和龙胆苦苷的方法体系。[结果]上样液的浓度为0.02 g/ml,乙醇洗脱液的洗脱浓度为95%,洗脱液流速为3.0 ml/min时,藏茵陈中獐芽菜苦苷和龙胆苦苷分离效果最好。[结论]该方法经济、实用、快速,可用于藏茵陈中有效成分的提取。     

姜黄素通过Nrf2信号通路对H2O2诱导奶牛乳腺上皮细胞氧化应激的缓解

[目的]验证姜黄素是否能够通过转录因子E2相关因子2(Nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)信号通路减轻H2O2诱导的奶牛乳腺上皮细胞的氧化应激,为防治围产期奶牛代谢紊乱导致的氧化损伤提供理论依据.[方法]培养奶牛乳腺上皮细胞(MAC-T),用500μmol·L-1 H2O2处...     

狭鳕鱼皮胶原肽对过氧化氢诱导的人成骨细胞氧化损伤作用

[目的]复制过氧化氢诱导人成骨细胞氧化损伤模型,探讨狭鳕鱼皮胶原肽保护作用机制。[方法]以人成骨细胞为研究对象,将对数生长期的细胞分为6组:正常对照组、H_2O_2损伤组、胶原蛋白肽低(100μg/m L)、中(300μg/m L)、高(600μg/m L)浓度组、阳性对照组(300μg/m L维生素E),CCK-8法检测成骨细胞的存活率,酶联免疫法检测细胞培养液中SOD、MDA的含量,PCR技术检测Foxo3amRNA的表达水平,Western blot技术检测Sirt1、Foxo3a的蛋白表达水平。[结果]与模型组相比,胶原肽组细胞存活率及SOD的水平升高,MDA含量下降,Foxo3amRNA及蛋白表达水平下降,Sirt1蛋白表达水平上升。[结论]300μmol/L H_2O_2可成功复制成骨细胞氧化损伤模型;一定浓度的胶原蛋白肽能降低MDA的含量,提高SOD水平,并具有抗氧化损伤功能,胶原肽对成骨细胞的保护作用可能与下调Foxo3a和上调Sirt1的表达水平有关。     

热应激对鸡脾脏和法氏囊细胞凋亡的影响及其调节

 18只 AA肉鸡于22℃饲养。30日龄时，随机分成3组，分别进行0 、5和10h的41℃高温应激处理。用流式细胞仪检测应激后不同时间脾脏和法氏囊细胞 DNA含量、细胞凋亡率以及Caspase-3和Bcl-2的表达。结果表明，应激处理0、5和10 h时，脾脏DNA合成期（S期）细胞比例分别是4.67%、5.11%、4.78%，法氏囊S期细胞分别是30.52%、24.71%、24.04%；脾脏和法氏囊细胞凋亡率分别是0.22%、0.42%、0.32%和0.32%、0.62%、0.41%；脾脏和法氏囊 caspase-3表达阳性细胞率分别为5.49%、10.36%、9.80%和8.60%、10.51%、9.41%； Bcl-2表达阳性细胞率脾脏分别是31.32%、24.01%和29.26%，法氏囊则是30.24%、27.10%、31.54%；脾脏细胞凋亡率，应激后5 h 与 0 和10 h有显著差异（P＜0.05）；在高温应激过程中，脾脏和法氏囊的细胞凋亡率与Caspase-3表达阳性细胞率呈方向一致的变化关系，均是从0 h到5 h逐渐升高，以后又逐渐下降；而与Bcl-2表达阳性细胞率呈反向变化关系。据此说明高温应激能明显影响脾脏和法氏囊细胞凋亡，而这种细胞凋亡的变化受Caspase-3和Bcl-2表达的调节。     

三氧化二砷诱导大鼠睾丸生精细胞凋亡的研究

[目的]观察不同剂量的三氧化二砷对成年大鼠生精细胞凋亡的影响。[方法]40只健康雄性SD大鼠随机分成4组,分别为0.375、0.750、1.500 mg/kg 3个染毒组和对照组,灌胃法连续给药16周后对各组大鼠进行睾丸脏器系数、精子头计数,并计算每日精子生成量。采用甲基绿—派诺宁染色法和TUNEL法检测大鼠生精细胞凋亡情况。[结果]中剂量组(0.750 mg/kg)和高剂量组(1.500mg/kg)睾丸精子头计数和DSP均低于对照组;与对照组相比,中剂量组和高剂量组生精细胞凋亡指数(AI)均显著升高(P<0.01);生精细胞凋亡指数与每日精子生成量呈负相关(r=-0.563,P<0.01)。[结论]一定剂量的As2O3可通过促进生精细胞凋亡而导致精子生成量的减少,产生生殖毒性。     

异硫氰酸丙烯酯对大鼠肝细胞凋亡的影响

为研究异硫氰酸丙烯酯对细胞活性的影响,试验以20mg·L-1的内毒素(LPS)和1.25×10-5mol·L-1的异硫氰酸丙稀酯(AITC)分别或共同处理大鼠肝细胞3h后,用AnnexinV/PI双染色,流式细胞术分析细胞凋亡;反转录酶聚合酶链反应(RT-RCR)分析FasL和Caspase-8的表达情况。结果表明,AITC能有效抑制LPS(20mg·L-1)诱导的肝细胞凋亡,且在此过程中,FasL、Caspase-8的表达量均有减少。结果提示AITC可以通过Fas途径抑制LPS诱导的肝细胞凋亡,其作用有可能导致肿瘤的发生。     

外源NO对采后芒果果实低温胁迫后H2O2代谢的影响

一氧化氮（NO）是植物体内重要的信号分子。为了探讨NO对采后芒果低温胁迫后果实过氧化氢（H2O2）及抗氧化酶的影响,分别采用0.08 mmol/L NO供体SNP溶液和30 μL/L NO气体处理采后青芒果果实,并于3℃低温贮藏12 d后,检测芒果果皮和果肉中H2O2含量和相关抗氧化酶的活性。结果表明,外源NO浸泡处理能显著降低低温胁迫后芒果果皮中H2O2水平,提高超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化物酶（POD）和过氧化氢酶（CAT）的活性,其中NO对CAT活性的影响最大,可能是外源NO处理调控H2O2水平的关键作用点。NO供体SNP处理效果优于NO气体处理,主要作用部位为芒果果皮。     

鸡bcl-2表达质粒的构建及其对转染细胞凋亡的影响

 构建了 CMV驱动及牛生长激素 poly A加尾信号修饰的 bcl- 2 c DNA真核表达质粒p CDCB1。随后 ,采用脂质体转染方法 ,将扩增并纯化的 p CDCB1转染至培养的 SPF鸡胚次代单层成纤维细胞 (CEF)内 ,96h后收集全部贴壁及上清脱落细胞 ,用 Dotblot检测 bcl- 2的表达 ,用流式细胞术测定其细胞凋亡率。结果 ,p CDCB1转染后 96h,bcl- 2在 CEF中呈高度表达 ;CEF平均凋亡率为 1 .1 4% ,明显低于转染空白载体质粒的对照组 7.64%的凋亡率 ,DNA合成期 (S期 )细胞为 2 1 .58% ,也低于对照组。结果证实鸡 bcl- 2 的表达可显著抑制体外培养 CEF凋亡进程 ,其效应与细胞 DNA合成和增殖无关。