猪链球菌2型毒力因子研究进展

猪链球菌2型(SS2)是一种重要的人兽共患病病原菌,其主要毒力因子包括荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、溶血素、纤连蛋白结合蛋白、谷氨酸脱氢酶等,但是这些经典的毒力因子不足以解释猪链球菌病发病的临床症状,而且毒力表型往往与实际毒力及临床症状不符。近年来随着研究的深入,鉴定出一系列毒力相关元件,主要有Sao蛋白、存在于89K毒力岛的双信号转导系统(salk-salR)、dltA基因、pgdA基因、srtA基因、Ⅳ型二肽基肽酶(dipeptidyl peptidaseⅣ,DPPⅣ)、毒力调控子R(control of virulence R,CovR)、烯醇酶(enolase)、谷氨酰胺合成酶(glutamine synthetase,GlnA)等。论文对以上毒力因子研究进展进行综述,以期为SS2毒力因子及致病机制研究提供参考。     

猪链球菌2型毒力因子研究进展

猪链球茵(SS)病是一种严重危害养猪业的人畜共患病,呈世界性分布.根据荚膜抗原特性的不同,猪链球茵被分为35个血清型(1/2型,1型～34型),其中以猪链球菌2型(SS2)流行最广,毒力最强.SS2主要的毒力因子有溶菌酶释放蛋白、胞外蛋白因子、荚膜抗原、溶血素等.然而,新近发现的一些与SS2致病性相关的基因序列和蛋白片段已经成为当前研究的重点和热点.在基因水平上的新发现主要有orf2毒力因子、89 kb毒力岛、转录调节因子、氨基酸通透酶、ABC转运子及表面锚定蛋白基因、反应调节因子RevS基因、纤连蛋白结合蛋白基因、编码噬茵体的基因序列Ssl和分泌性核酸酶SsnA基因等.蛋白水平上的新发现主要有脂磷壁酸的D-丙氨酰位点、自溶素、精氨酸脱亚氨酸酶系统、浑浊因子,38,45,39,44 ku蛋白,以及一些蛋白酶和纤维蛋白溶血酶原受体等.     

猪链球菌2型的鉴定及其毒力因子检测

猪链球菌的感染不仅对养猪业造成巨大的损失,同时对公共卫生尤其是相关从业人员的生命造成威胁,严重感染引起死亡.根据参考文献,设计了1对猪链球菌2型特异性引物.对四川分离的7株链球菌、江苏分离的1株、北京分离的6株和菌种中心保存的5株C群马链球菌兽疫亚种、1株D群链球菌、4株R型链球菌、2株S群链球菌和E、F、G、K、L、M、N、O、P群链球菌各1株进行了检测.结果7株四川分离株均为2型;1株江苏分离株为2型;6株北京分离株有3株为2型;1株R群、2株s群链球菌为2型猪链球菌.对检测出的14株猪链球菌2型的毒力因子做进一步检测.MRP基因检出率为92.9%(13/14);EF基因检出率为100%(14/14);sly基因检出率为71.4%(10/14);Cps2A基因检出率为92.9%(13/14);gapdh基因检出率为64.3%(9/14);FBPS基因检出率为92.9%(13/14);orf2基因检出率为71.4%(10/14).毒力因子全为阳性的菌株有6株,MRP-EF+菌株有2株.本研究从259份健康猪扁桃体中分离到16株2型猪链球菌,健康猪带菌率为6.2%(16/259).16株猪链球菌2型中,MRP、EF、Cps2A全为阴性,只从1株2型猪链球菌中检测到了sly基因(1/16);gapdh基因检出率为56.25%(9/16);FBPS基因检出率为75.0%(12/16);Orf2基因检出率为37.5%(6/16).     

猪链球菌2型的致病特性与毒力因子

介绍了猪链球菌２型对猪人、人、其他动物及实验动物的致病特性;概述了猪链球菌溶菌酶释放蛋白（ＭＲＰ）、细胞外蛋白因子（ＥＦ）、溶血素、英膜多糖、４４ｋｂ蛋白和ＩｇＧ结合蛋白及纤毛、粘着素等毒力因子的研究概况。     

猪链球菌2型毒力因子与MLST分型分析

为了解我国猪链球菌2型毒力因子和MLST型的特点,对四川、重庆和山东等地的22株猪链球菌2型进行毒力因子检测和ST型分析。结果显示,78%(17/22)的分离株为sly+mrp+epf+基因型的强毒株,仅山东省的5株分离株为弱毒力型。四川省和重庆市89%(15/17)的分离株为毒力较强的ST7型,而山东省的分离株均为毒力稍弱的ST1型。结合这些地区的猪链球菌病发病情况,分析提示猪链球菌2型的毒力因子和ST分型与菌株的致病性有一定的相关性。     

广州周边地区健康猪群猪链球菌携带情况调查

为了解广州周边地区健康猪群猪链球菌(Streptococcus suis,SS)的携带情况,本研究于2014-2015年在广州周边地区共采集488份屠宰猪群扁桃体样品和健康猪群鼻拭子样品,SS分离鉴定发现有165份样品为SS 16S rRNA阳性,共分离到68株SS菌株,对所分离的菌株进行血清型分型和3个常用毒力标记基因mrp,epf,sly的检测分析。结果显示:所采集样品SS的阳性率为33.81%(165/488),其中哺乳仔猪的鼻拭子样品的携带率最高68%(34/50),母猪次之为49.15%(29/59);对分离的68株SS进行血清型定型,定型率为73.52%(50/68),主要分布于16型,2型(1/2型),29型等16个血清型中;毒力基因在本批菌株中分布较少。本研究为监控广州周边地区SS的流行情况提供了试验参考数据。     

猪链球菌2型毒力相关因子的研究进展

目前,猪链球菌(Streptococcus suis)病已成为严重影响各国养猪业发展和人类健康的一种重要的人兽共患传染病。猪链球菌的血清型众多,有35个血清型,其中猪链球菌2型(Streptococcus suistype 2,SS2)的致病性强、流行范围广,而且它的毒力因子在该菌的致病过程中发挥着重要的作用。但是猪链球菌2型毒力因子认识的缺乏是制约该病有效防制的关键,因此作者对SS2已发现的毒力因子和新发现的一些毒力相关因子进行了广泛深入的论述,为该病的预防、治疗提供科学依据和参考。     

2型猪链球菌毒力因子概述

2型猪链球菌感染已成为影响全世界养猪业的重要问题之一。它主要引起猪脑膜炎、肺炎、心内膜炎、关节炎、败血症等,并可感染人。猪链球菌2型致病机理还不太清楚,至今为止,已知的毒力因子有荚膜多糖、溶菌酶释放蛋白、胞外蛋白因子、溶血素、粘附素等。文章对猪链球菌2型毒力因子做一系统概述。     

猪链球菌2型的毒力因子及诊断方法

猪链球菌2型(Streptococcussuistype2)又称为猪链球菌血清2型或荚膜2型猪链球菌,是革兰氏阳性兼性厌氧菌,为条件性致病菌,是猪链球菌35种血清型中流行最广、毒力最强的一种。它所引起的猪链球菌病是影响全世界养猪业的重要问题之一,且属于人畜共患病。该菌通常引起猪脑膜炎、败     

猪链球菌2型毒力因子及疫苗候选蛋白研究进展

猪链球菌2型（ss2）是一种重要的人兽共患病病原菌,可引起人和猪发生严重疾病。SS2的经典毒力因子有荚膜抗原、溶菌酶释放蛋白、溶血素等。随着研究的深入．又发现了一些与SS2致病性相关的基因和毒力相关元件,以及一些蛋白酶类,这些毒力因子多数具有较好的免疫原性,并在链球菌致病和生长过程中发挥十分重要的作用。通过对一些具有免疫原性的SS2毒力因子蛋白片段进行体外重组表达,有望研制出有效预防SS2感染的基因工程疫苗。     

猪链球菌2型感染猪和人的现状及研究进展

猪链球菌2型可引起人和猪的感染,甚至死亡,是一种严重的人兽共患病病原,其引起的疫病在我国被列为二类疫病。它能引起仔猪脑膜炎、支气管肺炎、败血症、关节炎及人的化脓性关节炎、眼内炎和心内膜炎等。在世界上许多国家和地区广泛分布,已发现的致病因子有十多种,但致病机理尚未彻底阐明。由于该菌引起的疫病危害性大,所以对该菌的快速诊断检测和防治方法也在不断改进。论文对猪链球菌2型病的流行状况、致病性、检测方法、防治等研究现状进行综述。     

临床健康猪群猪链球菌2型带菌率流行情况调查

为了解钦州市临床健康猪群中猪链球菌2型的流行情况,采用PCR方法对采集的病料进行检测分析。374份样品的PCR检测结果显示,链球菌、猪链球菌、猪链球菌2型的带菌率分别为81.8%、48.9%、2.9%,表明钦州市健康猪中猪链球菌带菌率高,但猪链球菌2型带菌率较低。     

重庆地区表观健康猪中猪链球菌的检测

本研究旨在调查重庆地区表观健康猪的猪链球菌带菌情况,并揭示健康猪群携带猪链球菌的公共卫生学意义。随机采集重庆市17个区县(市)定点屠宰场表观健康猪的腭扁桃体1 360份,进行猪链球菌的分离鉴定,并对致病性较强的1、2、7、9、14型及1/2型进行分型与毒力因子分析。结果共分离到225株猪链球菌,分离率为16.54%;检出猪链球菌2型4株,猪链球菌7型3株,猪链球菌9型3株,猪链球菌1/2型1株;毒力因子谱分析发现多数(10/11)分离株缺失部分毒力因子,但也存在具有全部已知毒力因子的强毒株,且在国内首次检出小片段mrp型猪链球菌1/2型1株和7型2株。结果提示,重庆地区健康猪群带菌现象普遍,且流行菌株具有与国外不同的特点,对屠宰场工作人员健康造成威胁。     

猪链球菌2型感染SPF小型猪模型的构建

构建了致病性猪链球菌2型(SS2)感染模型。通过典型临床症状观察、剖检病变和组织学观察及病原分离鉴定,证实该模型能成功模拟自然感染状态下SS2引起的典型临床症状和病理变化特点,稳定性好,可进一步用于致病性SS2在动物体内动态分布规律、致病机制和机体免疫应答以及疫苗的效果评价和相关药物筛选等方面的研究,对于猪链球菌2型感染的防控具有重要意义。     

育成猪对猪链球菌的免疫应答

取 7周龄长大杂交猪 12头 ,随机均分为试验组和对照组。试验组按每公斤体重 4.5亿个菌腹部皮下接种猪链球菌 C551 2 6复制猪链球菌病 ,接种后 0、7、14、2 1、2 8d,自前腔静脉采血 ,计数红、白细胞总数和白细胞分类 ,用硝基蓝四氮唑 (NBT)还原试验定量检测嗜中性粒细胞吞噬功能 ,噻唑蓝 (MTT)比色法检测外周血中淋巴细胞转化 ,单向免疫扩散法测定血清 Ig G浓度 ,5 0 %溶血试验测定血清中补体总活性 ,同时 ,用植物血凝素 (PHA)皮肤试验检测迟发型超敏(DTH)反应。结果表明 ,接种后 7d开始 ,试验组白细胞总数升高 ,接种后 14d嗜中性粒细胞百分含量低于对照组 ,淋巴细胞百分含量则升高 ;嗜中性粒细胞还原硝基蓝四氮唑 (NBT)能力均极显著高于对照组 (P<0 .0 1) ,PHA诱导的淋巴细胞转化则极显著降低 (P<0 .0 1) ,DTH只在接种后 2 1d显著低于对照组 (P<0 .0 5 ) ,血清中 Ig G总量接种后 7d降低 (P<0 .0 5 ) ,14d却极显著升高 (P<0 .0 1) ,此后恢复正常 ,血清补体总活性只在接种后 7d降低 (P<0 .0 5 )。可见 ,猪对猪链球菌的免疫应答除了常见的抗原抗体反应外 ,还表现在免疫细胞数及其功能的变化 ,以及补体活性的改变。     

猪链球菌4型GalR蛋白的生物信息学分析及原核表达

试验旨在了解猪链球菌4型（Streptococcus suis serotype 4,SS4）转录调控因子GalR蛋白生物学信息并对其进行原核表达。使用相关生物信息学分析网站对SS4 SH1510菌株GalR蛋白进行序列同源性和功能结构域检索,并对信号肽、跨膜区和等电点进行预测;同时,对SS4 SH1510菌株GalR基因进行扩增、原核表达、纯化,并用SDS-PAGE分析重组蛋白的可溶性,用Western blotting鉴定重组蛋白的反应原性。氨基酸序列比对显示,SH1510菌株GalR蛋白与变形链球菌、无乳链球菌、绿脓杆菌、马链球菌兽疫亚种、肺炎链球菌、口腔链球菌及李斯特菌的GalR家族蛋白的氨基酸序列分别具有57%、56%、55%、55%、52%、52%和49%的同源性;结构域检索发现GalR蛋白N-末端具有螺旋-转角-螺旋（helix-turn-helix,HTH）基序的小DNA结合结构域,C-末端具有Ⅰ型周质结合蛋白折叠的调节配体结合域,在这两个功能结构域的中间含有一个约18-氨基酸的连接子;GalR蛋白无信号肽,无跨膜区,等电点为5.10。SDS-PAGE分析显示,GalR蛋白绝大部分表达在上清,分子质量为56 ku;Western blotting鉴定结果显示,His单克隆抗体和粗制SS4多克隆抗体兔血清能特异性识别可溶性GalR蛋白。本研究对GalR蛋白进行了生物信息学分析并成功地表达和纯化了GalR蛋白,为进一步研究GalR蛋白在SS4中的作用奠定了基础。     

天津地区2型猪链球菌的分离鉴定及耐药性分析

为了解天津地区2型猪链球菌的流行及耐药情况,本研究收集该地区部分规模化养猪场疑似猪链球菌病病料317份,通过病原分离培养、染色特性观察、生化试验、PCR扩增等方法进行鉴定,并对分离菌进行致病性及药敏试验。结果从样品中分离鉴定出11株2型猪链球菌。对小鼠的致病力试验结果显示,应用0.5×10⁸ CFU/mL的细菌攻击小鼠,11株2型猪链球菌分离株中有6株具有致死性,其中1株致死率较强,5株致死率较弱。药敏试验结果表明,11株分离菌对9种临床常见药物均表现出很强的耐药性,其中对阿米卡星、四环素和强力霉素耐药性最强,耐药率达到100.00%;且所有分离株均呈多重耐药,其中4个分离株为9重耐药,占36.36%（4/11）。本试验结果表明,天津地区存在2型猪链球菌感染情况,且对多种抗菌药均产生了耐药性,应引起养殖户的高度重视,在防制猪链球菌病时,应有针对性地合理、科学、规范用药和交替用药。