南方型紫花苜蓿Millennium组织培养及其再生

以南方型紫花苜蓿Millennium种子发育5~7 d无菌苗的子叶、下胚轴为外植体,对紫花苜蓿愈伤组织诱导和植株再生进行了研究。结果表明,在愈伤组织诱导中,下胚轴为最佳外植体材料,出愈率随着2,4-D质量浓度的增加呈明显的升高趋势,最佳愈伤组织诱导培养基为2,4-D 2 mg/L+6-BA 0.5 mg/L,诱导率达到100%。紫花苜蓿诱导最佳愈伤组织的分化培养基为MS+KT 1.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L,下胚轴愈伤组织分化率达到58%,子叶愈伤组织分化率达到40%。将苗切下转接到1/2 MS+20 g/L蔗糖质量浓度时,培养6 d即可诱导生根,诱导生根率达到100%,完成植株再生仅需60~70 d。成功地建立了南方型Millenni-um紫花苜蓿子叶和下胚轴的离体培养再生途径,并获得了再生植株。     

花椰菜再生体系的优化

以子叶和上胚轴为外植体,研究了不同激素浓度下花椰菜离体培养的再生体系.结果表明,上胚轴作为外植体时不定芽分化率较高,在不加IAA或添加0.5 mg/L IAA的培养基上均能达到100%,最佳诱导培养基为MS+1.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA.子叶作为外植体时不定芽分化率低,最高为40%.     

甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生体系的建立

【目的】探索甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的最佳离体培养条件。【方法】以甘蓝型油菜雄性不育系B2无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,研究了苗龄、预培养时间、预培养基和分化培养基中激素配比等对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴高频再生的影响。【结果】4因素对甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴的再生均有明显影响。4 d苗龄,在MS+6-BA 1mg/L+2,4-D 1mg/L预培养基上预培养3 d后诱导分化,子叶在添加NAA 0.02 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达80.45%,下胚轴在添加NAA 0.05 mg/L+6-BA 3.0 mg/L的分化培养基中分化率最高,达69.33%。【结论】建立了甘蓝型油菜雄性不育系B2子叶和下胚轴稳定高效的再生体系,为其遗传转化奠定了基础。     

芝麻菜愈伤组织诱导及植株再生*

 以芝麻菜(Eruca sativa Mill)无菌苗的下胚轴、子叶和子叶柄作为外植体,研究了不同的激素浓度和组合对其愈伤组织诱导和植株再生的影响。结果表明,分别以MS+0.8mg／L 2,4-D,MS+0.8mg／L 2,4-D+0.1mg／L 6-BA,MS+0.8mg／L 2,4-D+0.2mg／L 6-BA为下胚轴、子叶柄和子叶的愈伤组织诱导培养基时,效果较好,出愈率依次为86.3%,78.2%,97.6%;将下胚轴、子叶柄和子叶的愈伤组织分别转移到分化培养基MS+3.0mg／L 6-BA+0.1mg／L　NAA,MS+3.0 mg／L 6-BA+0.2mg／L NAA上再生不定芽,效果最佳,不定芽再生频率分别为72.7%,63.6%,69.2%。将不定芽切下转移至1／2 MS+0.5mg／L IBA培养基上诱导生根,生根率达81％以上。     

白三叶草高频率植株再生系统的研究

通过对白三叶草子叶和下胚轴植株再生系统的研究发现 ,白三叶草胚轴生长点的再生能力最强 ,子叶和下胚轴再生能力极低 ;胚轴生长点直接再生频率在 6 6 %以上 ,以 6BA 3mg/L时再生频率最高 ,达 95 % ;再生植株的快速繁殖以 6BA 1～ 2mg/L ,NAA0 .5～ 0 .8mg/L较适宜 ;生根培养以IBA0 .1～ 0 .3mg/L ,NAA0 .1～ 0 .2mg/L较适宜     

甘蓝CMS下胚轴和子叶的离体培养与植株再生研究

【目的】探索一种利用甘蓝胞质雄性不育系(CMS)下胚轴和子叶进行快速扩繁的技术,为利用CMS大量繁制甘蓝杂交种提供一条新途径。【方法】以甘蓝CMS 05-2-10为试材,将苗龄5~7 d无菌苗的下胚轴和子叶切下,接种于MS培养基上,45~50 d后统计再生芽数,比较6-BA与NAA不同质量浓度配比对不定芽的诱导情况;将诱导出的不定芽接种于添加不同质量浓度(0,0.1,0.3,0.5 mg/L)NAA的MS生根培养基上,20 d后比较生根率和根的长势。【结果】在对下胚轴和子叶进行不定芽诱导时,MS培养基中分别添加1.0和4.0 mg/L的6-BA对下胚轴、子叶的诱导效果较好,其芽再生频率和分化系数分别为83.3%,53.0%和3.6,3.0。在MS培养基中添加1.0mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA,其对下胚轴不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为80.7%,分化系数为3.4,褐化率为1.5%;在MS培养基中添加4.0 mg/L 6-BA+0.3 mg/L NAA,其对子叶不定芽的诱导效果较好,芽再生频率为50.0%,分化系数为3.2,褐化率为3.4%;二者的褐化率均明显低于仅添加6-BA的处理。在MS生根培养基中添加0.3 mg/L NAA时,不定芽的生根效果较好,生根率达100%,且根系生长健壮。【结论】利用甘蓝胞质雄性不育系CMS 05-2-10的下胚轴和子叶作为外植体进行不定芽的诱导,对于下胚轴,其适宜培养基为MS+1.0 mg/L6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂;对于子叶,其适宜培养基为MS+4.0 mg/L 6-BA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。不定芽诱导生根的最适培养基为MS+0.3 mg/L NAA+30 g/L蔗糖+8 g/L琼脂。     

"保冠一号"番茄子叶与下胚轴的愈伤组织诱导与植株再生

目的:研究不同浓度的CPPU诱导"保冠一号"番茄子叶及下胚轴在培养条件下的植株再生情况,确定CPPU诱导番茄植株再生的最佳浓度.方法:采用CPPU与NAA的不同浓度组合,诱导"保冠一号"番茄子叶及下胚轴的愈伤组织形成、不定芽发生及植株生长.结果:各种浓度在CPPU和NAA组合对"保冠一号"番茄的植株再生有不同的影响.子叶以MS+CPPU 0.05 mg/L+NAA 0.01 mg/L,下胚轴以MS+CPPU 0.025 mg/L+NAA 0.01 mg/L为最佳再生培养基,对愈伤组织的形成和不定芽的分化都有良好的效果;不定芽在1/2MS+IBA 0.5 mg/L和1/2MS+NAA 0.5 mg/L培养基上生根效果最佳.     

甘蓝型油菜下胚轴离体培养再生植株研究

[目的]为进一步通过基因转化获得预期优良性状的甘蓝型油菜提供借鉴。[方法]以甘蓝型油菜的下胚轴为外植体,研究不同苗龄、不同基因型、不同预培养条件以及各种生长调节剂组合对油菜外植体高频率再生的影响。[结果]试验中,7 d苗龄的甘蓝型油菜下胚轴再生频率可达35.83%;经3 d预培养处理的油菜下胚轴芽再生频率可提高至57.78%,油菜品种史力丰下胚轴的芽分化率较高,达35.00%,其次是N481-1,而N370-1的芽分化率最低;其最高分化率的激素组合为6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L,达38.89%。史力丰品种6~8 d无菌种子实生苗的下胚轴在预培养基MS+2,4-D 1.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L上预培养3 d,在最适分化培养基MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.05 mg/L+TDZ 1.0 mg/L+AgNO35.0 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂4.5 g/L中培养,再生频率最高。[结论]建立了甘蓝型油菜下胚轴离体培养高频率再生植株模式。     

花生上胚轴为外植体的植株再生及转化研究

以8 d龄花生无菌苗的上胚轴为外植体,进行植株再生和农杆菌介导遗传转化研究.结果表明,上胚轴能高效诱导花生植株再生,外植体在MS 3 mg/L TDZ 6 mg/L 6-BA 1.5 mg/L NAA培养基上能高效诱导不定芽分化,10 d时诱芽率达100%;不定芽接种到MS盐 B5维生素 3mg/L TDZ 0.01%酵母粉培养基中15 d诱导出大量丛生芽;MS 0.5 mg/L NAA培养基较适合诱导丛生芽生根,25 d时生根率达82%.筛选确定35 mg/L潮霉素浓度为转化筛选压,以含AtRD29Ap::GUS融合基因的根癌农杆菌侵染8 d龄上胚轴10 min,共培养3 d,经上述再生体系,以潮霉素筛选获得1株拟转化再生植株.     

低频再生黄瓜离体培养体系的优化

【目的】优化低频再生黄瓜离体培养体系,为黄瓜遗传转化体系的进一步完善奠定基础。【方法】以低频再生黄瓜种质Q24和L66为材料,分别以黄瓜的子叶、子叶节和下胚轴为外植体,研究外植体类型对黄瓜再生频率的影响;在MS培养基中添加不同质量浓度6-苄基腺嘌呤(6-BA)和脱落酸(ABA),研究激素配比对黄瓜再生频率的影响;将获得的黄瓜子叶节外植体置于1/2 MS培养基上预培养0,1,2,3和4 d,研究预培养处理对黄瓜再生频率的影响。【结果】不同基因型黄瓜再生频率差异显著,其中Q24整体上具有相对较高的再生频率,其子叶节再生频率为54.8%,下胚轴再生频率为50.0%;L66的再生频率相对较低,其子叶节再生频率为36.9%,下胚轴再生频率为16.7%。激素配比显著影响黄瓜子叶节外植体的再生频率,其中1.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA对Q24子叶节不定芽的诱导效果最好,再生频率达到60.7%;2.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA对L66子叶节不定芽的诱导效果最好,再生频率达到42.9%。预培养处理可显著提高L66子叶节的再生频率,经过1～3 d预培养,其再生频率逐渐增加并达到最高(32.1%),4 d后再生频率开始降低;Q24子叶节经3 d预培养再生频率达到最高,为27.4%,但与对照相比差异不显著。【结论】Q24子叶节外植体最适激素配比为1.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA,经3 d预培养后其再生频率可达60.7%;L66子叶节外植体最适激素配比为2.00 mg/L ABA+1.00 mg/L 6-BA,经3 d预培养后再生频率可达42.9%。     

黑芝麻不同外植体离体培养研究

以黑芝麻无菌苗的下胚轴、幼根、子叶为外植体,以MS+2,4-D1.5mg/L+ZT0.5mg/L为愈伤组织诱导培养基;MS+6-BA2mg/L-IAA0.5mg/L为分化培养基;1/2MS+0.5mg/LNAA+IAA0.25mg/L为生根培养基进行培养.结果表明,幼根能产生少量愈伤组织,尚未分化出苗;子叶愈伤组织能分化出苗,但分化率低;下胚轴愈伤组织不仅可分化出苗(分化率为36%),而且可形成大量具有分化潜力的胚性愈伤组织,分化绿苗的频率可达67%.     

辣椒全基因组测序材料Capsicum annuum cv.CM334再生体系的建立

选用辣椒全基因组测序材料Capsicum annuum cv. CM334、高抗CMV辣椒材料C. frutescens cv.PBC688和高感CMV辣椒材料C. annuum cv. G29,以其幼苗的子叶、下胚轴作为外植体,研究了不同激素组合对辣椒组织培养再生的影响。结果显示:最佳的芽分化培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+5000.0mg/L DJ+10.0 mg/L AgNO_3;促进再生芽伸长的最优培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+2.0 mg/L GA_3+5000.0 mg/L DJ+10. 0 mg/L AgNO_3; 3个基因型子叶的平均芽分化率(5.9%)高于下胚轴的(2.4%);CM334的再生能力最强,以子叶和下胚轴作为外植体时,其芽分化率分别为10.74%和4.85%,芽伸长率分别为54.54%和53.33%,分别获得可移栽的生根再生植株30株和8株; PBC688和G29的再生能力较差,只获得少量的再生植株。     

孜然芹下胚轴胚性愈伤组织的诱导及再生植株的研究

以孜然芹下胚轴为外值体,研究了在不同种类和浓度激素处理下产生愈伤组织,经继代增殖成胚性愈伤组织,在分化培养基上,胚性愈伤组织进一步分化,得到了再生植株.结果表明:下胚轴在光照时间16 h/d,MS+2,4-D 0.5 mg/L的愈伤组织诱导启动培养基中,20 d愈伤诱导率达100;,继代培养基为MS+NAA 0.5 mg/L+6-BA 2 mg/L培养基中,增殖率达80;,在MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L培养基中光照16 h/d培养30 d,可见再生植株,再生率为18.75;.     

辣椒全基因组测序材料Capsicum annuum cv.CM334再生体系的建立

选用辣椒全基因组测序材料Capsicum annuum cv. CM334、高抗CMV辣椒材料C. frutescens cv.PBC688和高感CMV辣椒材料C. annuum cv. G29,以其幼苗的子叶、下胚轴作为外植体,研究了不同激素组合对辣椒组织培养再生的影响。结果显示:最佳的芽分化培养基为MS+5.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+5000.0mg/L DJ+10.0 mg/L AgNO_3;促进再生芽伸长的最优培养基为MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L IAA+2.0 mg/L GA_3+5000.0 mg/L DJ+10. 0 mg/L AgNO_3; 3个基因型子叶的平均芽分化率(5.9%)高于下胚轴的(2.4%);CM334的再生能力最强,以子叶和下胚轴作为外植体时,其芽分化率分别为10.74%和4.85%,芽伸长率分别为54.54%和53.33%,分别获得可移栽的生根再生植株30株和8株; PBC688和G29的再生能力较差,只获得少量的再生植株。     

薹菜再生体系的建立

为了建立薹菜再生体系进而为转基因工作做准备,以薹菜无菌苗子叶-子叶柄和下胚轴为外植体,研究了适于薹菜再生的外植体类型,以苗龄、AgNO3 的质量浓度和植物生长调节剂组合,建立了薹菜的再生体系.结果表明,5 d苗龄的子叶-子叶柄为最佳外植体材料. 筛选出最佳培养基为1/2NH4+浓度的MS+BAP 5 mg/L+ZT 2 mg/L +NAA 0.7 mg/L+AgNO3 7.5 mg/L,子叶-子叶柄再生频率达67.8%.     

甘蓝型油菜离体培养再生体系的优化

为优化甘蓝型油菜离体培养再生体系,本研究分析了影响再生频率的多个关键因素,包括品种、外植体类型、苗龄、预培养时间以及激素浓度与配比等。结果表明:品种对再生频率影响较大,Westar的外植体再生频率高于宁油18号和中双11号;不同外植体再生频率也存在差异,子叶柄的再生频率显著高于下胚轴;苗龄以4 d较好,预培养时间以2 d较适宜;预培养基中激素2,4-D最适浓度为1 mg/L,分化培养基中,6-BA/NAA比例为10∶1时子叶柄的再生频率最高,为70.79%,6-BA/NAA比例为9∶1时下胚轴的再生频率最高,达到96.73%。经过优化后,油菜外植体再生频率得到显著提高。     

青花菜高效离体再生体系的建立

以青花菜为试验材料,探讨了影响离体再生的一些因素,结果表明:取用4～5 d龄无菌苗的带柄子叶和下胚轴,分别培养在MSB+NAA 0.2 mg/L+6-BA 2 mg/L和MSB+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.0 mg/L+AgNO3 2.5 mg/L培养基上,获得了较高的分化率(80%);再生芽插入MS+IBA 0.2 mg/L培养基,生根率达100%.     

北柴胡幼根、子叶和下胚轴组织培养研究

研究了北柴胡幼根、子叶和下胚轴愈伤组织诱导、分化的条件。结果表明,MS+2,4-D1.0 mg/L+KT0.1 mg/L的培养基最适合于幼根、下胚轴和子叶愈伤组织的诱导,其中,幼根和下胚轴愈伤组织诱导率高于子叶;在B5+6-BA 1.5 mg/L+NAA 0.03 mg/L+CH 250 mg/L的培养基中,下胚轴和子叶愈伤组织的分化率最高;北柴胡试管苗生根培养基为1/2 MS+NAA0.5 mg/L。     

豌豆再生体系的建立

【目的】建立用于豌豆组织培养与转基因的再生体系.【方法】利用植物组织培养的外植体的消毒、接种、脱分化、再分化和生根等方法进行豌豆再生体系的建立.【结果】以‘陇豌1号’为试验材料,其胚轴为豌豆愈伤组织诱导最佳外植体;适宜诱导培养基为MS+1.0mg/L 2,4-D+0.2mg/L 6-BA;最佳增殖培养基为:MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA;胚轴在MS+0.2mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA培养基中分化率最高,达26.21%,MS+B5+0.5mg/L NAA+2.0mg/L 6-BA条件下最适宜子叶的分化(14.80%);不定芽在1/2 MS+0.5mg/L NAA下生根率最高,达66%.【结论】‘陇豌1号’的这一再生体系可用于其转基因受体系统的建立和种苗的组培快繁.     

激素和外植体对亚麻愈伤组织形成的影响

为了建立亚麻的愈伤组织再生体系,以亚麻无菌苗的下胚轴、子叶为外植体,研究了不同激素、外植体对亚麻愈伤组织形成的影响。结果显示:亚麻种子最佳的灭菌方法是用0.1%的HgCl2处理6 min;亚麻愈伤组织适宜形成外植体的部位是下胚轴,可以形成较多疏松、绿色的愈伤组织;4 mg/L浓度的6-BA有利于子叶愈伤组织的形成,愈伤组织的形成百分率最大,为87.5%;子叶诱导愈伤组织的最佳配方为MS+4 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IAA;1～4 mg/L 6-BA+0.05 mg/L IAA处理亚麻下胚轴均可有效诱导其愈伤组织的分化。