橡胶树PR107原生质体的分离和培养研究

以橡胶树PR107花药愈伤组织建立的胚性悬浮细胞为材料,进行原生质体的酶解分离和培养研究。结果表明：在酶组合为纤维素酶1.5 %+果胶酶0.15 %+离析酶0.5 %的酶解处理下,继代培养第6天、直径小于0.5 mm悬浮细胞团获得最高产量的原生质体,达到2.2×107个/mL PCV;原生质体在看护培养基上培养1周后观察到细胞开始发生分裂,培养2周后细胞分裂形成含8-10个细胞的小细胞团。看护培养45 d后原生质体持续分裂并发育成肉眼可见的小愈伤组织。     

龙眼胚性悬浮细胞原生质体培养及其体胚发生再生植株

以“红核子”、“东壁”、“十二月龙眼”等龙眼品种的胚性悬浮细胞为起始材料分离原生质体,采用液体浅层培养、包埋悬浮培养等方式,进行原生质体培养与植株再生研究。研究结果表明,海藻酸钙包埋悬浮振荡培养(50r/min)是龙眼悬浮细胞原生质体培养的适宜培养方式,在含有多种生长调节剂的改良MS培养基(MP6)上,再生小克隆的形成频率可高达5%;采用龙眼胚性愈伤组织体胚诱导、成熟和萌发的优化方案,原生质体再生小克隆分化子叶形胚状体的频率达100%,萌发植株的频率一般大于45%。      

香蕉胚性细胞悬浮培养方法的改进

针对香蕉胚性悬浮细胞培养过程中存在的胚性愈伤组织的诱导率低、周期过长、胚性易丢失等问题, 以“苹果蕉”及“威廉斯”香蕉的未成熟雄花为试验材料, 对香蕉胚性愈伤组织的诱导、 悬浮培养的理化条件进行改进。 结果表明： （1）光照条件较暗培养更有利于诱导理想的香蕉胚性愈伤组织; （2）M1培养基中加入酪蛋白和脯氨酸有利于胚性愈伤组织的诱导; （3）用微孔板代替三角瓶悬浮培养, 有利于悬浮细胞分裂增殖, 而且可减少污染的可能。     

水稻不同外植体培养效果及其相关性分析

 以23个水稻品种（组合）或品系 (基因型)为材料，对不同外植体（花药、幼穗、幼胚和成熟胚）进行愈伤组织诱导和绿苗分化，结果表明，4种外植体的培养效果存在基因型差异，不同外植体的培养效果差异明显。花药与幼穗、成熟胚间的愈伤组织诱导率呈显著正相关，幼穗与幼胚的愈伤组织诱导率也呈显著正相关；绿苗分化率之间则不存在相关性；4种外植体的愈伤组织诱导率和绿苗分化率之间无相关性。     

亚麻体细胞无性系的建立及其植株再生

以亚麻无菌苗（７－１０天培养）切取的茎尖和下胚轴作为外植株，分别接种于Ｎ６、Ｂ５基础培养基，均附加ＩＡＡ４ｍｇ／Ｌ、ＫＴ２ｍｇ／Ｌ和ＬＨ２００ｍｇ／Ｌ，经过四个星期的离体培养，获得具备不定苗发生能力的愈伤组织，诱导率平均达９４．２％。然后把它们转移至继代培养基中进行再分化培养，培养得到绿苗及胚性愈伤组织，分化频率平均达６．３倍。切取下的绿苗植于改良后的Ｂ５培养基上进行生根培养，生根率达９０％以上。     

西北地区特色大麦品种成熟胚离体培养的初步研究

为筛选组织培养特性优良的大麦品种并建立高效的再生体系,选用西北地区主栽品种甘啤3号、甘啤4号、甘啤6号及德国引进品种玛俐、博乐共5个大麦品种,分别研究了基因型、培养基成分、种子处理方式等因素对大麦成熟胚组织培养的影响.结果表明,不同大麦品种的出愈率、绿点率和绿苗率均存在极显著差异,其中博乐的综合效应最好.脱分化培养基A3、分化培养基C2是适合进行再生体系构建的培养基.胚刮碎与纵切处理的愈伤组织诱导率显著高于横切.甘啤3号、甘啤4号、博乐的愈伤组织诱导频率和分化绿苗率均较高,是适合进行遗传转化的受体材料.     

甜菜(Beta vulgaris L.)原生质体培养研究初报

从甜菜下胚轴愈伤组织SC_3和未授粉胚珠愈组织SC_1、SC_2中分离到原生质体,在MSB(2)培养基中进行液体浅层培养。约1周后,开始第一次细胞分裂,2～3周左右形成了小细胞团,SC_3原生质体直接发育成原胚。此时统计植板车约为0.1％～0.2％。培养至第五周,3种基因型原生质体中均出现肉眼可见的愈伤组织,原胚发育成球型胚状体。待愈伤组织长到一定大小时,及时转移到新的固态培养基上增殖后进行各种分化试验。球形胚在原培养基中继续培养,7～8周后形成心形胚状体。     

提高水稻成熟种胚体细胞培养力

实验结果认为,水稻成熟胚是一种“竞争性”外植体。高浓度的脱落酸（ABA）能有效地抑制胚芽和胚根的生长,而对水稻盾片愈伤组织的生长影响较小,从而促进盾片愈伤组织的同步健壮生长。这些愈伤组织致密,呈乳白色且分化频率高。调节分化培养基的浓度可减少愈伤组织变褐老化,有效地提高愈伤组织绿苗分化率。在诱导培养期间,较高的2,4－D浓度（大于1 mg/L）和6－BA会抑制种胚体细胞愈伤组织的诱导,其中籼稻比粳稻敏感。在诱导培养基中附加2,4－D 0.5 mg/L,BA 0.5 mg/L,ABA 5 mg/L,B_1 (5－10 mg/L)对成熟籼稻种胚培养是较合适的。     

提高野栽稻杂交后代花药培养率的研究

取普通野生稻与普通栽培稻杂交组合共１０个，研究了不同组合、不同世代、培养基配比及培养时变温处理等与花药培养效率的关系。结果表明：杂交组合间有差异，普通野生稻与粳型杂交其后代花培易成绿苗；Ｆ１比Ｆ２、Ｆ３愈伤组织诱导率和分化率均高；培养基以改良Ｎ６培养基最好；变温处理可提高愈伤组织诱导率和绿苗分化率。     

短光低温不育水稻宜D S成熟胚培养的研究

对短光低温不育水稻宜D S成熟胚在组织培养中的愈伤组织诱导和分化进行了研究,结果表明:愈伤组织诱导率与绿苗分化率之间无对应关系;诱导培养基的成分对转分化后的愈伤组织有后效作用,2,4-D与6-BA和NAA搭配使用比单独使用2,4-D诱导的愈伤组织更易于分化;同时还发现,不同诱导培养基诱导的愈伤组织在转分化后对分化培养基的要求不同.     

籼稻绿芽悬浮细胞原生质体再生成株

采用籼稻Hu-18绿芽为外植体,在N6附加2 mg/L 2,4-D的培养基上诱导愈伤组织。加20 d后转人AA 培养基进行悬浮培养。继代培养45 d左右形成了分裂旺盛的胚性细胞悬浮系。即从绿芽诱导至胚性细胞悬浮系的建立仅用了65 d左右。继代后前6 d,细胞干重几乎每2 d增加1倍,而培养液的渗透压及pH 值迅速下降。取继代后4 d的悬浮细胞游离原生质体,产率为8.74X10⁶/g鲜重。纯化后的原生质体在KPR培养基中进行琼脂糖包埋培养,原生质体植扳率为12.0％ 。将20 d后的小愈伤组织(0.1 mm)转入 N6附加0.5 mg/L 2,4- D、1 mg/ L BA、1 mg/L KT、0.3 mg/L ZT的培养基上增殖,待长成直径2～3 mm 左右时,用N₆附加1 mg/L BA,1 mg/L KT,0.3 mg/L ZT的培养基进行分化培养, 5 d后同时出现芽根生长,最终再生成绿色植株,绿苗分化率为3.5株/10000个原生质体。     

Initial acytokinesis during leaf protoplast culture of dihaploid and tetraploidSolanum tuberosum and diploidS. bulbocastanum

Summary Leaf protoplasts of dihaploid (2n=2x=24) and tetraploid (2n=4x=48)Solanum tuberosum, and diploidS. bulbocastanum (2n=2x=24) were cultured in liquid medium. The cultures were studied for early karyological changes during their development. Giemsa staining of spread preparations revealed extremely low percentages of protoplasts developing into calli with the parental chromosome number, and high percentages of acytokinetic cells. The nuclear divisions within a cell were synchronous which allowed the occurrence of spindle interaction, resulting in nuclear poly- and aneuploidization. Although polyploidization was also found in uninucleate cells, a major increase in the formation of true-to-type calli would certainly be established by the improvement of early cross wall formation.     

稻属AA染色体组8个种间SSR多样性与亲缘关系

选用平均分布于水稻基因组的30对SSR 引物,对AA染色体组8个野生稻种共42份材料的遗传多样性及遗传关系进行了研究。结果显示,本试验选取的30个SSR标记均具有多态性,多态性位点百分率为100%。30个多态性位点共扩增出的等位基因数为224, 每个位点可扩增出3～10个等位基因,平均7.47个;等位基因有效数(Ae)变幅为1.25～891,平均5.45。多样性指数中,Shannon多样性指数(I)为0.454～2.386,平均1.826;而Nei基因多样性指数变幅为0.199～0.888,平均0.774。系统聚类和带型分析结果表明,亚洲栽培稻(Oryza sativa) 与普通野生稻(O. rufipogon) 的亲缘关系最近,非洲栽培稻(O. glaberrima) 则与巴蒂野生稻(O. barthii) 关系最为密切,杂草稻(O. spontanea) 与普通野生稻 (O. rufipogon)、亚洲栽培稻(O. sativa) 之间有较近的亲缘关系,而展颖野生稻(O. glumaepatula)、长雄蕊野生稻(O. longistaminata)与AA组其他稻种之间的亲缘关系较远。     

荔枝胚性悬浮培养物的建立,保持和优化原生质体分离的研究

将松散颗粒状的荔枝胚性愈伤组织转入液体培养基,２－３周后即可建立起优质的悬浮培养物,长时间悬浮培养后,荔权胚性悬浮培养物的生长势和分化能力下降,但液体培养基＋固体培养基交替培养可使其保持稳定良好的状态。材料来源,继代时间,酶液浓度,酶液渗透压和高渗预处理对胚性悬浮培养物的原生质体分离均有明显影响。     

Regeneration ofSolanum tuberosum cv. Katahdin from leaf expiantsin vitro

A previously published medium has been found to be effective for plant regeneration from leaf expiants ofSolanum tuberosum cv. Katahdin. A number of combinations of thidiazuron and naphthaleneacetic acid, along with a medium previously published for shoot regeneration from protoplast-derived calli ofSolanum phureja, which contained zeatin, indoleacetic acid and gibberellic acid (ZIG), were tested for callus induction, and all calli were transferred to ZIG for shoot induction. We conclude that leaf expiants cultured on ZIG medium at all stages of culture were the most effective at shoot production. A mean of over six shoots were produced per expiant after four months in culture.     

不同生态型普通野生稻花药培养力的研究

对我国匍匐、倾斜和直立型普通野生稻进行了花药培养力的研究。供试的37份普通野生稻其花药培养力存在明显差异,愈伤诱导率变幅0～9.1%,绿苗率变幅0～32.1%,其中有31份材料可得到花培绿苗,占83.8%％。花药培养力的高低顺序为：栽培籼稻＞栽培稻／野生稻杂种＞直立型普通野生稻＞倾斜型普通野生稻＞匍匐型普遍野生稻。不同培养基对不同生态型普遍野生稻具有不同的花培效率。改良N6一号培养基具有显著提高花培效率的作用,适合各型普通野生稻的花药培养。     

Plant regeneration from cell suspension culture of potato (Solanum tuberosum L.)

In the present study, for callus production leaf and stem segments of potato cultivar White Desiree were cultured on MS medium supplemented with 2,4-D, NAA and Kinetin (callus production medium). Calli then were transferred in the same liquid medium for cell suspension production. In the next step cell suspensions were transferred back to the callus production medium. Finally, calli derived from cell suspension were cultured on 6 different shoot initiation media (S1-S6). However, on S6 medium with combination of GA3 and BAP more than 80% of the calli produced shoot buds and shoots. Fully grown shoots then were rooted and produced whole plants. Chromosome and morphological analysis showed no somaclonal variation among regenerated plants.     

橡胶树多主棒孢病菌原生质体转化体系的建立

由多主棒孢病菌侵染引起的棒孢霉落叶病是严重危害橡胶生产的一种世界性病害,近年来在中国也有发ⅱ生.在菌龄、细胞壁酶种类、酶作用浓度、作用时间、酶解温度、渗透压稳定剂等因素对橡胶树多主棒孢原生质体制备和再生影响分析的基础上,笔者首次建立了PEG介导的多主棒孢病菌遗传转化体系,并获得了多主棒孢病菌绿色荧光转化子.该体系中,多主棒孢病菌的原生质体再生率为19.12%,转化率为10.34个/μgDNA.